聚离子亚基化合物介导的基因转移方法可用于外源基因的瞬时表达

利用聚离子亚基化合物介导的基因转移方法，研究了外源β－半乳精苷酶报告基因的瞬时表达．结果表明聚离子亚基化合物介导的基因转移方法可用于外源基因的瞬时表达研究，而且在相同的条件下，用该方法在NIH3T3细胞和PA317细胞中对报告基因转移的效率要高于磷酸钙法和脂质体法．实验结果还表明聚离子亚基化合物的结构影响外源基因转移效率．     

农杆菌介导法的植物遗传转化

农杆菌介导的基因转化是一种使外源DNA转移到目的植株的天然系统,通过植物表达载体上DNA的加工与转移将外源DNA转运到植物细胞中。因其具有易操作、低费用、高效率、插入片段确定性好和转基因拷贝数低等独特优点,已经成为转基因策略中的首选方法,在植物的遗传转化中得到广泛应用。     

携带人类染色体的小鼠

<正> 美国宾州大学的研究人员Cecilia Lo博士与细胞基因联合公司合作培育出转染色体“Transomic”小鼠——带有人类染体色的啮齿类。截止目前,用于培育转基因动物的转移遗传学材料只限于小DNA序列。转移较大的片段或整个染色体能够在动物模型上对人类生理学做更广泛的研究。例如,将全部产抗体的基因从人类的     

聚离子亚基化合物介导的基因转移方法可用于外源基因？…

利用聚离子亚基化合物介导的基因转移方法，研究了外源β－半乳糖苷酶报告基因的瞬时表达。结果表明，聚离子亚基化合物介导的基因转移方法可用于外源基因的瞬时表达研究。而且在相同的条件下，用该方法在ＮＩＨ３Ｔ３细胞和ＰＡ３１７细胞中对报告基因转移的效率     

携带p53基因重组腺病毒载体的构建

将pCMVp53重组转移载体经BamHI和NheI酶切,得到p53基因cDNA,然后将cDNA片段克隆到转移载体pCMV5GFP,使其受CMV5启动子的调控,获得pCMV5p53重组转移载体.用该线状重组转移载体与腺病毒右臂DNA经磷酸钙共转染293细胞获得重组腺病毒,经酶联免疫吸附法(ELISA)测定p53蛋白含量,证明外源p53基因在含重组腺病毒的293细胞中得到表达.     

乙型肝炎病毒转基因小鼠外源基因的复制和传代稳定性观察

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠外源基因的复制、传代稳定性.方法通过nest-PCR和Southern分子杂交等检测方法,对48#、87#、90#三个系列中各15只整合阳性小鼠定期进行血清中HBV DNA存在情况以及对各系列繁育F1-F5代小鼠外源基因整合传代进行检测.结果各系列转基因鼠血清都有HBV DNA存在,并以1月龄时血清中HBV DNA阳性率最高,但随月龄改变,其DNA阳性率也变化,并存在系列、个体及月龄上的差异.结论HBV基因可在转基因小鼠体内复制、传代,且目前已稳定传至第五代(F5).     

乳腺生物反应器的研究现状

1980年Gordon将重组DNA采用显微注射方法导入小鼠受精卵,首次获得了带有外源基因的转基因小鼠,这是人类首次对哺乳动物进行人工改造的尝试。1982年Palmiter等将大鼠生产激素基因显微注射到小鼠受精卵中,首次获得了比普通小鼠大得多的“超级小鼠”,并提出可以从转基因动物中提纯有价值的药用蛋白。“超级小鼠”的诞生,说明了通过性细胞的基因操作可以有效地将外源基因导入哺乳类动物的基因组内,使其得以有效地表达,并产生相应的生理效应。这一结果的取得,标志     

精子介导法生产转基因动物研究进展

精子介导基因转移是利用动物精子具有自发结合和内化转运外源DNA能力的特点,并使其在受精时导入卵每细胞,获得转基因动物。该方法具有操作简单、高效和适用等特点,但影响精子转染外源基因效率的因素很多,其中包括外源DNA、精子及转染方法等。     

基因枪法在植物转基因中的应用

基因枪法是是指用鸽粉或金粉包裹外源DNA,而后依靠基因枪装置,利用高压氦气冲击波加速微弹去穿透植物细胞壁和细胞膜,使外源DNA进入植物细胞并整合到植物细胞染色体组中,从而达到稳定遗传和表达的目的。它多用于对农杆菌不敏感的物种和基因型,用外源DNA包被的钨粒对大豆茎尖分生组织进行轰击,获得大豆转基因植株,此后,这一技术便很快在大豆中得到了应用。虽然它有缺点,但可与其他转基因技术结合使用。农杆菌介导法和基因枪轰击法各有自己的优缺点,它们之间并不是相斥的M相反,通过结合两种方法的特性,互相取长补短,就有可能提高转化效率。     

微束激光对单细胞诱变机制研究

本文报道用微束激光对家蚕进行外源染色质的转移获得成功,观察到转移的染色质基因在受体中的当代形态性状表达.并论述短脉冲微束激光照射家蚕受精卵大细胞转移外源基因的同时,引起变异的主要机制.     

外源DNA导入技术在小麦改良中的应用研究

研究表明:(1)外源 DNA 导入技术应用于转移抗病基因是有效的;(2)外源DNA 导入后代常常会产生意想不到的特殊类型,为新种质创造开辟了一条新途径.     

转基因作物在农业生产中的应用

把人们所需要的外源基因(如高产、抗病虫害优质基因)定向导入作物细胞中,使其在新的作物中稳定遗传和表现,产生转基因作物新品种,是大幅度提高作物产量的一项新技术。它给农业生产带来了希望和奇特的景观。 科学家们创造的第一种转基因作物始于12年前,目前已有数十种转基因作物相继问世。外源基因导入作物的方法,一般有以下几种:一、滴注引进,即将外源DNA滴进或微量注射入受体,二、离体培养,即在花粉、种胚等诱导、分化培养基中加入外源DNA;三、射击穿入,即利用基因枪、电击法等将外源DNA直接导入受体;四、     

不同转导方式及载体形式对TALENs在小鼠胚胎干细胞打靶效率的研究

通过同源重组进行小鼠胚胎干细胞基因敲除是目前应用最为广泛的基因敲除技术手段,但同源重组的效率却非常低.TALEs和FokI的剪切结构域融合的TALENs可以实现高效的基因敲除.已有报导表明,TALENs识别位点的DNA序列和长度,及间隔区的长短等条件影响TALENs打靶效率.但外源载体的导入方式及载体的形式(DNA或RNA)是否以及如何影响TALENs的打靶效率还不明确.用不同的转导方式将TALENs导入小鼠胚胎干细胞中,并检测TALENs切割识别位点的效率,实验发现Lipofectamine○R2000转染的TALENs比电转化能更高效地切割目的 DNA位点,而DNA质粒或体外转录的RNA表达的TALENs切割DNA位点的效率相近.数据表明,在应用TALENs进行基因敲除时,有必要选择合适的转导方式以提高突变效率.     

HCAP1基因对Raji细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax/Bcl - 2的作用

目的：研究外源HCAP1基因产物对Burkitt淋巴瘤细胞系Raji细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax／Bcl-2的作用。方法：用脂质体介导的基因转移方法，把外源HCAP1基因转染到Raji细胞中，用流式细胞术和Hochest 33258荧光染色检测细胞凋亡；用Western blot检测外源HCAP1基因对凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2蛋白表达的调节。结果：外源HCAPl基因导入Raji细胞24、48和96h后，细胞凋亡率增加。Western blot显示Bax／Bel-2蛋白表达比值明显增高。结论：转染外源性HCAP1基因可诱导Raji细胞凋亡，使Bax／Bcl-2蛋白表达比例上调可能是HCAP1诱导凋亡的机制之一。     

精子介导法生产转基因动物研究进展

精子介导基因转移是利用动物精子具有自发结合和内化转运外源DNA能力的特点,并使其在受精时导入卵母细胞,获得转基因动物.该方法 具有操作简单、高效和适用等特点,但影响精子转染外源基因效率的因素很多,其中包括外源DNA、精子及转染方法 等.     

Eμ—myc转基因小鼠:一种高发生率的自发性淋巴瘤和早期B细胞白血病模型

<正> 肿瘤基因的转建对自然环境中的细胞的影响可利用转基因小鼠来评定。转基因小鼠是将一个基因插入小鼠基因组,随后通过正常繁殖而延续。作者将命名为Eμ-myc的DNA序列导入小鼠,该序列是从小鼠浆细胞瘤中分离出来的,瘤细胞中正常myc基因已连接到Ig重链强化基因上。在这种转基因小鼠中,Eμ—myc转基因仅在B淋巴细胞中表达,使B淋巴细胞较正常增殖快;小鼠出生前,前B细胞群即扩增到约正常的5倍,而B细胞却略减少。因此,由Eμ—myc基因引起的B细胞增殖是有限制的和良性的,但是,这些小鼠亦发生B细胞性淋巴瘤。为了建立Eμ—mye小鼠作为淋巴瘤发生     

人生长激素基因在昆虫细胞中表达的初步研究

将人生长激素hGH的cDNA片段克隆在转移载体pVL1393的多角体蛋白基因启动子下游,构成重组转移载体pVL1393hGH,将该质粒DNA与昆虫杆状病毒（AcNPV）DNA共转染秋粘虫（Spodopterafrugiperda）细胞Sf9,通过体内同源重组,hGH基因取代多角体蛋白基因,从而整合到病毒基因组上,经感染昆虫细胞后表达外源hGH基因,通过反复病毒空斑纯化,获不含多角体的重组病毒,利用免疫化学发光法测定hGH表达量达40μg／mL．     

外源基因导入贡柑体胚及其人工种子构建的初步研究

用小细胞团和分散细胞混合物与两种带不同质粒的农杆菌共培养的方法,将质粒PGV3850:1103neo T-DNA上的km抗性基因和Nos/Npt基因、质粒PGV517的Km抗性基因、NPTⅡ基因和毒蛋白基因转入贡柑细胞,在含有卡那霉素的选择培养基上选择出抗性愈伤组织和幼胚。通过Nopalim和NPTⅡ酶性检测、DNA/DNA分子杂交鉴定,证明了Nos基因、NPTⅡ基因已整合到贡柑体胚的细胞基因组中并表达,苏云金杆菌的毒蛋白基因整合到贡柑细胞基因组中,第一次在柑桔类果树实现了外源基因转移。用3％海藻酸钠包埋转化体胚制备人工种子,2粒转基因人工种子已萌发。     

转基因作物是怎样培育出来的?能否繁殖后代?

<正>A:转基因作物是指利用基因工程方法把外源基因导入到农作物中,使之表达并稳定遗传,赋予作物新的性状。转基因植物的培育方法有很多种,最经典的是农杆菌介导法。使用这种方法,就可以通过质粒把目的基因转入植物细胞。目的基因就是要被转入的基因,它来源于其他物种,能编     

甲基化CpG结合结构域蛋白的原核表达及应用

本文构建了甲基化CpG结合结构域(MBD)蛋白的原核表达质粒,并表达了GSTMBD融合蛋白,采用GST柱对该融合蛋白进行纯化.体外pull-down实验发现,GST-MBD融合蛋白能够与小鼠胚胎成纤维细胞MEF中oct4基因的启动子DNA结合,验证了该蛋白的体外生物活性.利用相同的实验方法,发现GST-MBD融合蛋白能够与MEF细胞中inhbb基因的启动子区结合,而不能与小鼠胚胎干细胞R1中的inhbb基因的启动子区DNA结合,同时采用半定量PCR方法检测到inhbb基因在R1细胞中高表达,而在MEF细胞中不表达,表明inhbb基因受到DNA甲基化的调控.