实时荧光定量PCR技术在转基因食品检测中的应用研究进展

随着转基因食品的快速发展,转基因食品的大规模商业化引起了对安全性问题的广泛争议.为了对转基因食品作出综合的评价,建立灵敏、快速、准确、高通量的检测方法十分必要.本文综述了实时荧光定量PCR技术的基本原理、优缺点及其在转基因食品检测中的应用与研究进展,并探讨了该技术存在的问题和应用前景.     

TaqMan MGB实时荧光PCR对转基因大豆定量检测的研究

 利用实时荧光定量PCR技术,根据转基因大豆（Roundup Ready^TM）的外源基因35S启动子序列设计引物和TaqMan MGB探针,对大豆粉中Roundup Ready^TM大豆含量进行了定量检测,根据这个检测体系建立了35S启动子Ct值与样品中转基因成分数量之间的标准曲线和线性回归方程(相关系数r²: 0.9942)。本研究设计的方法还可以应用到多组分的食品、饲料等加工产品,检测转基因成分的含量,并可作为转基因食品常规PCR定性检测方法。     

食品检验中的生物检测技术应用

生物检测技术在食品检验中的应用日益广泛,其中包括生物传感器、生物芯片、生物酶技术、PCR技术、免疫技术、核酸探针技术等,主要作用于食品成分和品质的控制,对有害微生物、残余农药等污染的检测,以及转基因食品的测试等方面,并发挥着越来越重要的作用,具有广阔的应用前景.     

转基因大豆和玉米加工产品的双重精确定量PCR检测方法

在很多国家,转基因生物(GMOs)及其衍生产品必须标有精确的转基因含量.最近研究中,实时定量PCR技术广泛应用于转基因成分的检测.然而,转基因生物的实时定量PCR方法的精确度仍然是一个难以解决的问题,尤其是对于高温处理过的样品.为了更好地准确定量高温处理样品中转基因的含量,对普通的实时定量PCR体系做了一些改进,包括重新设计内源基因和外源基因的引物,使得扩增较短并且大小接近的目标DNA片段,同时引物的GC含量和溶解温度也都相近.此外,采用热处理加工模型(HTPM)的方法,制备了含有转基因大豆GTS 40-3-2的样品,并验证了改进后的实时定量PCR系统.实验结果表明:使用改进后的实时定量PCR体系测定热处理过的样品,发现其中的转基因含量的定量偏差明显降低.同时使用改进的双重实时定量PCR进一步验证转基因大豆的加工食品,结果也显示,转基因含量的定量结果更准确.这些结果表明:改进的双重实时定量PCR将适用于热加工产品的定量检测.     

转基因食品安全评价及展望

介绍了转基因食品的实验室操作步骤和外源基因在转基因动、植物上的表达方法,同时叙述了目前国内外在转基因食品方面所采用的先进的检测手段,探讨了人们对转基因食品的安全性评定及其现存的危害,最后以大豆为例展望了转基因食品的发展前景世界转基因大豆的应用及其安全性进行了一些初步的探讨,并展望了生物技术在大豆品种改良中的应用前景。     

多重PCR法快速鉴定转基因小麦植株及后代

根据转基因植物中常用的报告基因uidA、选择基因bar的序列,设计合成两对不同的引物,建立了在转基因小麦材料分子确证中,应用一次PCR反应同时扩增检测两种或多种外源基因的多重PCR方法．通过对质粒pAHC25以及30个转基因小麦样品进行PCR扩增分析,比较多重PCR的检测结果与单基因的PCR扩增结果,发现两者结果完全一致．     

食品检测中分子检测技术的应用及实验室管理

随着科学技术的发展,分子生物学检测技术已成为现代食品检测行业中的重要分支。近些年我国对食品的质量愈发重视,实时荧光定量PCR技术凭借着其高效、迅速、精准的优势已成为食品安全检测技术中的中流砥柱,进入了新阶段。本文对食品检测中实时荧光定量PCR技术的应用以及分子生物学实验室的安全隐患进行了分析与总结,提出了有效的管理对策,确保了检测环境与数据的安全。     

PCR-DHPLC技术快速检测食品中英诺克李斯特氏菌

应用PCR结合变性高效液相色谱（DHPLC）技术,建立食品中英诺克李斯特氏菌的快速检测方法．根据英诺克李斯特氏菌的特有基因设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测,并以41株参考菌株做特异性试验．试验结果表明该方法具有很好的特异性,经PCR—DHPLC可检测食品中英诺克李斯特氏菌．该方法可以快速、准确检测英诺克李斯特氏菌,是食品微生物快速检测的新技术．     

我国转基因食品法律管制制度简析

完善我国转基因食品法律管制体系不仅有益于保护人民的健康安全、国内的生态环境,而且关系到我国的贸易利益。目前我国的相关法律法规对转基因食品的管理形成了一些基本的法律制度。但在食品标识制度与检测方法和检测标准以及转基因食品进口政策方面还应有所转变。     

POR-DHPLO技术快速检测食品中英诺克李斯特氏菌

应用PCR结合变性高效液相色谱（DHPLC）技术,建立食品中英诺克李斯特氏菌的快速检测方法．根据英诺克李斯特氏菌的特有基因设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测,并以41株参考菌株做特异性试验．试验结果表明该方法具有很好的特异性,经PCR—DHPLC可检测食品中英诺克李斯特氏菌．该方法可以快速、准确检测英诺克李斯特氏菌,是食品微生物快速检测的新技术．     

多重荧光PCR同时检测转基因成分35S和Nos方法的建立

根据商品化转基因作物中常用的花郴花花叶病毒启动子（CaMV35S）和根癌农杆菌终止（Nos）的序列特点，设计并合成了两对引物和相对应的荧光双链探针，建立一种应用荧光双链探针的多重荧光PCR同时检测转基因成分35S启动子和Nos终止子的方法，并利用该方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等11份实物样品进行了检测，其中有5份样品结果阳性，结果表明所建立的多重荧光PCR方法能同时检测了35S方法同时检测出35S和Nos双组分，较常规PCR技术更为简便、快速、准确，有很很好的应用前景。     

转基因植物及其安全性问题

介绍了转基因植物在全球和我国发展概况,介绍了转基因植物的几种目的基因:抗除草剂基因、抗病虫基因、改良作物品质基因,及其在农业上的应用,从转基因植物食品的安全性和转基因生态环境的安全性讨论了正确对待转基因技术的安全性问题。     

天然的转基因“工程师”及其对转基因食品的意蕴

在转基因食品之于中国当前倍受争议甚至被“妖魔化”的背景下,了解根瘤农杆菌的转基因过程,就好比找到从根本上理解转基因技术和转基因食品的钥匙,有助于消除对转基因食品的神秘感与恐惧。根瘤农杆菌的天然转基因过程证明：DNA真的很安全,转基因技术并不可怕,转基因食品具有与传统食品实质等同的安全性。     

转基因植物检测技术研究进展

随着植物基因工程技术的发展,转基因植物的研究和开发取得了令人瞩目的成绩,已培育了一批抗虫、抗病、抗除草剂和高产优质的转基因农作物新品种。与此同时,转基因植物检测技术不断丰富和完善,促进了转基因植物科学鉴定和评价,以及转基因植物商业化种植。目前报道的转基因植物检测方法主要有3类,一是在整合水平上进行的检测,包括PCR检测、Southern blot检测和染色体原位杂交检测等;二是在转录水平上进行的检测,包括RT-PCR检测、Northern blot杂交检测等;三是在表达水平上进行的检测,包括组织化学染色检测、荧光蛋白检测、Western blot检测、ELISA检测、叶片退绿检测和叶片涂抹除草剂检测等。     

转基因食品与人类健康

随着全球人口的迅猛增长,耕地面积的不断减少,由此而导致的粮食问题成为世界许多国家面临的一项十分棘手的问题.要满足人类的粮食供应,提高食品供应质量,必须依靠科学技术.目前转基因技术在食品生产中的应用,已取得了显著的成效.可以讲,随着遗传工程技术的广泛应用,转基因食品越来越多地出现在我们的餐桌上,消费者对转基因食品的关注程度也将越来越大,遗传工程技术的应用也会受到公众的影响.     

天然的转基因天然的转基因“工程师”及其对转基因食品的意蕴

在转基因食品之于中国当前倍受争议甚至被"妖魔化"的背景下,了解根瘤农杆菌的转基因过程,就好比找到从根本上理解转基因技术和转基因食品的钥匙,有助于消除对转基因食品的神秘感与恐惧。根瘤农杆菌的天然转基因过程证明:DNA真的很安全,转基因技术并不可怕,转基因食品具有与传统食品实质等同的安全性。     

对我国转基因食品发展的建议

转基因食品（Genetically Modified Foods,GMF）是指利用转基因生物生产和加工的食品,我国规定的转基因食品还包括添加剂。由于技术的原因,目前转基因植物食品的发展远远领先于转基因动物和转基因微生物两种转基因食品。     

共转化CBF4和bar基因蒙农杂种冰草植株的分子检测

在获得转CBF4和bar基因蒙农杂种冰草植株的基础上,应用PCR和Southern杂交技术检测外源基因在转基因蒙农杂种冰草植株中的整合及拷贝数.确定外源基因CBF4和bar基因已经整合到冰草基因组中,并且是以多拷贝的整合方式插入受体细胞的染色体上.说明外源基因对蒙农杂种冰草成功地进行了转化,可以作为后期转基因冰草植株研究及培育转基因冰草新品种的材料.     

采用基因芯片技术筛查农作物转基因背景

采用基因芯片技术对转基因作物中常见的启动子、终止子和选择标记基因等多个外源基因进行检测，以建立一套快速、准确的转基因作物筛查鉴定技术．通过对大豆、玉米、油菜、棉花等农作物样品的检测，并由常规PCR技术进行验证，证实基因芯片的检测结果准确可靠，并提高了检测效率，因此，可用于农作物转基因背景的鉴定．     

食品表征属性与品质识别新技术及设备研究

随着高附加值食品产业的发展,国内外,尤其是国内的学者对食品真伪鉴别技术研究越来越重视。该研究基于分子生物学技术,针对燕窝、蜂蜜、鲑鱼、海参、冬虫夏草等高附加食品开展了食品真实表征属性生物识别新技术研究,分别建立了燕窝及伪品实时荧光PCR检测方法、蜂蜜蜜源成分实时荧光PCR检测方法、鲑科鱼类实时荧光PCR鉴定方法、海参实时荧光PCR鉴别方法、冬虫夏草实时荧光PCR检测方法,填补了我国在其检测技术方面的空白;在食品质量品质属性生物识别技术研究方面,以蛋白为检测对象,结合免疫学及质谱学等相关技术,探索了蜂王浆新鲜度的免疫检测方法、蜂王浆新鲜度的毛细管凝胶电泳方法、杂环胺HPLC-MS-MS检测方法、乳制品中羟脯氨酸的免疫分析方法的建立,该项技术的研究目前在我国具有一定的前瞻性;在食品感官品质仿生识别技术检测方面,分别建立了普洱茶香气特征评价方法,研究了蜂胶、普洱茶品质评价基础数据与特征指标、建立了传感器特征提取方法、初步开发了气体色敏传感器检测系统,研制了具有自主独立知识产权的能够剖析食品特定味觉属性的新型电子舌系统,为食品质量安全快速分析检测方面提供了新的技术手段。