蛹虫草菌丝体液体培养条件研究

研究蛹虫草液体发酵条件,以干菌体得率为指标,通过单因素试验确定适宜的碳源、氮源、培养温度和pH值。结果表明,最适液体培养基为:葡萄糖20 g/L,蛋白胨5.0 g/L,最适pH=6.0,最适培养温度24℃。     

蛹虫草废弃培养残基中虫草素的提取工艺研究

优化并比较了微波辅助和超声波辅助提取蛹虫草培养残基中虫草素的工艺方法.采用L 9(34)正交试验设计,考察了料液比(g:mL)、乙醇含量(%)、微波功率(微波法)或提取温度(超声波法)、提取时间等4个因素对虫草素提取率的影响.结果表明:微波提取以25倍料液比、40%乙醇、240 W下微波提取1.5 min,提取2次为最佳工艺,该条件下浸膏得率为28.33%,虫草素含量为0.378 mg/g;超声波提取在45 kHz功率下,以25倍料液比、40%乙醇、60℃下超声提取30 min,提取2次为最佳工艺,该条件下浸膏得率为38.24%,虫草素含量为0.362 mg/g.比较了超声波提取2次、微波提取2次、微波—超声波联合提取以及超声—微波联合提取等方式对虫草素的提取效率,最终确定微波提取2次为最佳工艺,该工艺适用于蛹虫草培养残基中虫草素的快速高效提取.     

蛹虫草子实体的人工培养研究

通过对蛹虫草子实体的人工培养研究发现：固体营养物以小米和高粱米的混合物是最佳的。人工培养基的最佳碳、氮源为可溶性淀粉和蛋白胨，最佳pH范围是5～6；VB1、2，4-D和无机元素K^ 、Mg^2 、Ca^2 对子实体的生长有促进作用。最佳培养条件是湿度80％。光照6001x(24L：0D)，15℃培养10d后转到25℃下培养．蚕蛹培养子实体的条件是10℃下培养到蚕蛹僵硬后转到25℃下培养，湿度80％．     

蛹虫草液体的深层发酵

以菌丝体质量浓度(干重)和发酵液中甘露醇浓度为指标,研究温度、初始pH值、培养时间等因素对蛹虫草液体培养的影响,得到蛹虫草摇瓶液体培养的最佳温度为25.0℃,初始pH值为6.10,培养时间为5 d;蛹虫草液体发酵最适培养基的组成为:20 g/L蔗糖+5 g/L蛋白胨+1 g/L MgSO4.7H2O。在此基础上进行小型分批式发酵罐实验,研究有利于蛹虫草生长及活性物质生成的pH控制策略。研究结果表明,pH分段控制的液体深层发酵对蛹虫草生长最为有利,菌丝体质量浓度为17.31 g/L,甘露醇质量浓度达43.47 g/L。     

蛹虫草虫草素和虫草多糖综合提取工艺的研究

蛹虫草（Cordyceps militaris）在我国本草文献中已有记载。近年来的研究更进一步证实了蛹虫草与冬虫夏草C.sinensis有相同或相似的化学成分和药理作用,是可供开发的新产品,并可以之作为冬虫夏草的替代品。现代科学论证蛹虫草不仅具有特殊的营养价值,而且有明显的药用价值。其中尤以虫草素、虫草多糖等多种生物活性物质的药用价值最为显著。虫草素是一种具有抗菌活性的核苷类物质,对核多聚腺苷酸聚合酶有很强的抑制作用。在DNA转录 mRNA过程中使mRNA成熟障碍,抑制癌细胞的生长。并有降血糖的作用。虫草多糖是一种高度分枝的半乳甘露聚糖,它能促进淋巴细胞转化,提高血清1gG的抗体含量和机体的免疫功能,增强机体自身抗癌抑癌的能力。因此分离纯化虫草素和虫草多糖,对此类抗癌药物的开发具有很大社会价值和意义。本次研究以蛹虫草粉末为原料,研究了蛹虫草中虫草素和虫草多糖的综合提取工艺技术,探讨了采用超声波水提法、超声波醇提法、水热回流法和醇热回流法4种提取方法,选择虫草素和虫草多糖的最优提取办法。并通过用正交试验方法研究考察了水热回流法中提取温度、提取次数、提取时间、料液比4个因素对虫草素和虫草多糖综合提取效率的影响。建立了从蛹虫草中综合提取虫草素和虫草多糖的最佳工艺。采用正交试验对蛹虫草中虫草素和虫草多糖综合提取工艺进行了研究,为进一步开发利用提供有价值的参考数据,也将会对今后产品开发研究具有重要的意义。     

硒对蛹虫草生长发育的影响

以蛹虫草作为富集硒的载体，用不同浓度的含硒培养基分别对蛹虫草的子实体进行培养，以研究蛹虫草的耐硒能力．结果表明：采用固体培养基培养蛹虫草子实体，在含硒0．5—20mg／kg的固体培养基上，菌丝均能生长；在含硒0．5—5．0mg／kg范围内，子实体生长速度较其他浓度明显提高；在含硒10．0—20．0mg／kg范围内，子实体生长受到抑制；在含硒30mg／kg以上的培养基上，菌丝不能生长。     

蛹虫草发酵罐培养生产虫草多糖和虫草素条件的研究

采用摇瓶培养法通过单因素试验和正交设计试验初步拟定蛹虫草的发酵罐培养条件.基本上罐条件为初始pH6.5,温度21℃,转速150rpm,培养时间5d.在此基础上分别以菌量、多糖和虫草素为指标,调整通气量和装液量.当以获得菌量和多糖为目的时,通气量为0.9m3/h、装液量70%.若以得到虫草素为目的,通气量调整为0.7m3/h、装液量70%.     

优化条件对蛹虫草菌丝体与胞外多糖得率研究

采用摇瓶法对蛹虫草无性型菌种(ACCC 50383)菌丝体发酵培养,以菌丝体与胞外多糖得率为指标,通过单因素方差分析、S-N-K多重比较和回归方程分析,分别考察6种碳源和6种氮源,确定最适碳源为蔗糖,最适氮源为大豆蛋白胨;对发酵条件的研究表明,获得较高产率的发酵时间为6 d,最适发酵温度为(26.3±0.9)℃,发酵液初始pH值对发酵产率无影响,获得最大发酵产量时装液量为(208±28)mL。     

蛹虫草中活性成分虫草素的研究进展

虫草素具有多重的药理功效,在现代医学中发挥着越来越重要的作用,本研究以蛹虫草为例,详细介绍了提高其虫草素含量的方法 ,以适应强大的市场需求.     

蛹虫草液体培养联产胞外多糖与菌丝虫草素的实验研究

通过对蛹虫草(Cordyceps militaris)液体发酵产胞外多糖和菌丝虫草素的初步实验研究,获得了蛹虫草液体发酵联产胞外多糖和菌丝虫草素的适宜参数.研究结果表明,蛹虫草液体发酵联产胞外多糖和菌丝虫草素的较适宜的氮源是豆粕粉和6%~8%玉米浆粉;较适宜的碳源是玉米面;维生素B1添加量以10 mg/100 m L、微量元素锰添加量以0.01%Mn SO4为宜、培养基初始p H值以5.5为宜;培养温度22~24℃,接种量1%,培养基装量50 m L和5~7 d的培养时间有利于胞外多糖和菌丝虫草素的产生.     

北虫草及其活性成分的研究与开发

冬虫夏草为非常珍贵的天然药材,资源严重缺乏,价格已超过黄金,无法满足社会需求。因北虫草的化学成分和药理功能与冬虫夏草非常相似,其主要功能活性物质含量高于天然冬虫夏草,被作为冬虫夏草的最佳替代品,受到广泛关注和重视,本文总结了近年来北虫草及其生物活性成分的研究与开发结果。     

RP-HPLC定量检测蛹虫草培养基中活性成分

建立一种反向高效液相色谱法定量检测蛹虫草培养基中活性成分腺苷含量和虫草素含量的方法.色谱柱为Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相:0.02 mol/L KH2PO4∶甲醇(体积比85∶15)溶液;流速:1.0 mL/min;检测波长:260 nm.腺苷的线性测量范围为0.5~100μg/mL(R=0.999 9),平均回收率为105.3%,标准品RSD=0.76%(n=5),样品RSD=1.87%(n=5);虫草素的线性测量范围为0.5~100μg/mL(R=0.999 9),平均回收率为104.0%,标准品RSD=0.95%,样品RSD=1.23%.本测定方法线性范围宽、分离度好、具有良好精密度,可定量、准确分析不同蛹虫草培养基中活性成分腺苷和虫草素含量.     

培养方式对蛹虫草液体发酵产核苷物质的影响

本文考察了蛹虫草CM3,08Y1菌株在通过光照振荡、光照静置、黑暗振荡、黑暗静置四种培养方式和添加前体物质(腺嘌呤1 g/L+甘氨酸16 g/L),发酵60 d后,发酵液内虫草素和腺嘌呤含量变化。结果表明:CM3菌株在静止培养及添加前体时虫草素的含量达2 541.06 mg/L,腺嘌呤利用率达99.79%;08Y1菌株在光照静止培养及添加前体时虫草素的含量达2 875.71 mg/L,腺嘌呤利用率达99.75%,这为蛹虫草高产虫草素提供了有效的方法,同时说明不同菌株在不同条件下,其代谢产物的量具有明显的差异。     

蛹虫草发酵产物新纤溶酶的分离纯化

笔者所在项目组的前期研究发现,蛹虫草深层培养可以产生至少两种纤溶酶.基于此,文中对蛹虫草深层培养产生的纤溶酶的分离纯化展开了研究.采用硫酸铵盐析、Sephadex G-25凝胶色谱、Phenyl-Sepharose HP疏水相互作用色谱、CM-Sepharose FF弱阳离子交换色谱和Superdex 75凝胶色谱对纤溶酶进行分离.最终纯化后的纤溶酶Ⅰ比活力达1467.44U/mg,纯化倍数为36.07,回收率为5.79%.纤溶酶Ⅱ比活力达1681.58U/mg,纯化倍数为41.33,回收率为4.00%.两种纤溶酶经电泳鉴定均达到电泳纯,相对分子质量分别约为28000和32000.     

HPLC法测定人工蛹虫草子实体中虫草素

为测定人工蛹虫草子实体及培养基中的虫草素，采用高效液相色谱法(HPLC)，以十八烷基硅烷键合相硅胶为固定相；磷酸盐缓冲溶液(pH6．5)-甲醇(85：15)为流动相；检测波长260nm；其流速为lmL／min。结果是人工蛹虫草子实体中虫革素含量在1．1l％～1．44％之间，平均值为1．29％，RSD为9．6％。天然冬虫夏草中仅测得痕量虫草素。结果表明：不同的人工蛹虫草样品中虫草素含量有一定差异，且高于天然冬虫夏草。     

冬虫夏草菌丝生长的营养基质研究

本文报导６种固体培养基上冬虫夏草菌丝的生长速度和４种液体培养基内菌丝的生长量。     

北虫草培养残基中虫草素的提取纯化及抗肿瘤活性

以北虫草固体培养残基为实验材料,比较闪式提取、超声波提取和超高压提取培养残基中虫草素的效果,用陶瓷膜过滤提取液,获得虫草素粗提液,利用高速逆流色谱分离制备虫草素,通过LC-MS/MS对产物结构进行鉴定,并验证了虫草素对小鼠S180肉瘤的抑制作用。结果显示,超高压提取培养基中虫草素较好,高速逆流色谱分离纯化条件是以V(乙酸乙酯)∶V(正丁醇)∶V(水)=2∶3∶5的两相溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相,流速3.0mL/min,主机转速900r/min,分离温度28℃,以此分离条件经一步洗脱,高速逆流色谱收集馏分,其中峰Ⅲ产物经HPLC检测纯度达97.6%,结构经LC-MS/MS鉴定为虫草素。从100g北虫草培养残基中可制备得虫草素181.90mg,并对其活性验证发现剂量为100mg/kg时小鼠S180肉瘤瘤重抑制率为64.48%。     

北虫草人工代料栽培的几种碳源比较

研究用4种不同粮食作物作为培养基主料,生产的北虫草在产量和质量上的差别。在其他条件相同的情况下,分别用大米、高梁、玉米、小麦为主要碳源制作培养基,从液体菌种培养直到子实体成熟。随机抽样检测其产量、质量。结果表明：小麦、大米作培养基主料,子实体的产量、质量较好,高粱其次,玉米较差。