胃癌细胞SGC-7901双向电泳系统的建立及优化

文蛤抗癌活性多肽对多种癌细胞有抑制效应,具有良好的药物开发前景.双向电泳技术的进步为药物的开发提供了理想的技术平台.我们通过对胃癌细胞SGC-7901总蛋白双向电泳技术的建立以及初步优化对一些环节如样品处理的方法、上样量的选择、电泳参数的设置、凝胶浓度和SDS凝胶电泳染色方法等进行了优化得到了分辨率较好的胃癌细胞的蛋白图谱,为进一步的文蛤抗癌多肽抑制胃癌细胞作用的蛋白组学研究提供实验工作的基础.     

吴茱萸碱诱导人胃癌细胞SGC-7901细胞凋亡

探讨吴茱萸碱对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制、诱导细胞凋亡的影响.采用MTT法测存活率;光镜观察细胞形态学改变;流式细胞术测细胞凋亡;流式细胞仪检测线粒体膜电位.结果显示,吴茱萸碱能抑制胃癌细胞SGC-7901的生长.MTT法测得吴茱萸碱的IC50为3.15μg/mL.在光镜下观察药物作用24 h的细胞生长密度逐渐变疏,细胞变小,表面起皱,高质量浓度组大部分细胞破碎.流式细胞仪检测,用20、10、5、2.5、1.25μg/mL质量浓度的吴茱萸碱作用48 h均出现亚二倍体凋亡峰,凋亡率分别为27.273%、24.206%、20.575%、19.520%、18.361%.流式细胞仪测线粒体膜电位,用质量浓度2.5、1.25、0.625、0.313、0.152μg/mL的吴茱萸碱作用48 h后线粒体膜电位显著提高.提示吴茱萸碱通过诱导胃癌细胞SGC-7901的凋亡,而达到抗肿瘤作用.     

中国两性生殖卤虫早期胚胎发育蛋白的双向电泳条件优化

采用双向电泳技术对中国卤虫胚胎发育到5 h时的蛋白组进行研究与分析.考察不同条件对双向电泳结果的影响,分别从上样量、染色方法、分离胶浓度等3方面进行研究.实验结果显示上样量为400 μg时图谱的斑点数较多;采用银染法所得实验结果优于考染;同时分离胶浓度为10%时所得蛋白斑点数较多.优化的实验条件为进一步研究中国卤虫蛋白组奠定基础.     

小菜蛾成虫蛋白质组双向电泳图谱的建立及条件优化

通过选择合适的pH范围及长度的胶条,并对蛋白样品上样量、等电聚焦伏小时数、银染时间及样品前处理等进行优化,建立了以双向电泳技术为基础的小菜蛾成虫蛋白质组学研究方法.优化结果表明使用17 cm、pH3～pH10的非线性胶条可以得到分辨率较高的胶图.该方法的建立为小菜蛾抗药性差异蛋白质组学研究奠定了基础.     

莪术油对人胃腺癌SGC-7901细胞形态的影响

研究莪术油(Zedoary Turmeric Oil,ZTO)对体外培养的人胃腺癌SGC-7901细胞形态变化的影响。不同浓度的ZTO作用人胃腺癌SGC-7901细胞24 h后,通过普通光学显微镜、荧光显微镜、透射电镜观察细胞形态变化情况。光学显微镜和荧光显微镜下可见未加药物组细胞呈梭形,胞浆丰富,核质均匀,核仁呈现黄色荧光,加药组细胞体积变小,胞浆浓缩、胞膜有起泡脱落现象,胞膜崩解,部分细胞核破碎或消失,细胞核呈现绿色或亮黄色荧光。透射电镜下可见未加药组细胞呈圆形,细胞核较大,胞浆较多,细胞器丰富,加药组细胞积明显变小,核固缩,微绒毛消失,部分坏死细胞的胞核溶解,细胞器结构崩解消失。ZTO作用人胃腺癌SGC-7901细胞24 h能致见未加药组细胞胞浆较多,细胞器丰富,加药组细胞体积明显变小,坏死细胞的胞使细胞发生明显的形态改变,且具有剂量依赖性。     

溶血磷脂酸受体2调控胃癌细胞SGC-7901侵袭迁移以及增殖凋亡

为探讨LPA2是否可调节胃癌细胞SGC-7901的侵袭迁移及增殖凋亡,将LPA2 siRNA和pc DNA3.1-LPA2表达载体转染SGC-7901,转染后利用Western blotting检测LPA2、E-cadherin及Vimentin蛋白表达情况,Transwell实验检测细胞侵袭迁移能力,MTS实验检测细胞增殖,流式细胞仪检测凋亡情况。结果表明LPA2 siRNA对胃癌细胞SGC-7901敲除成功后,细胞内的E-cadherin表达增高,Vimentin表达降低;同时其侵袭、迁移和增殖能力降低,凋亡能力升高。细胞SGC-7901过表达LPA2后,细胞内的E-cadherin表达降低,Vimentin表达增加,其侵袭、迁移和增殖能力升高,凋亡能力降低。可见LPA2可调控胃癌细胞SGC-7901侵袭迁移以及增殖凋亡,为胃癌的治疗提供新的靶点。     

拟南芥全细胞蛋白质样品制备及其双向电泳条件的优化

对双向电泳方法进行了改进, 包括对样品的制备、 双向电泳参数的选择等关键步骤进行优化. 实验发现, 采用乙酸铵 甲醇沉淀拟南芥全细胞蛋白质, 同时结合高伏时、 长时间的等电聚焦可以获得高分辨率、 重复性好的蛋白质双向电泳图谱. 银染后, 经Phoretix 2D v2004软件分析可分辨出1 000以上蛋白点.     

中药防风对胃癌SGC-7901细胞生长及基因表达的研究

目的 研究中药防风对胃癌SGC-7901细胞生长及基因表达的影响.方法 应用集落形成实验、MTT实验及电子显微镜技术观察了防风对SGC-7901细胞生长的影响;应用免疫组织化学染色技术研究防风对SGC-7901细胞基因表达的影响.结果 防风对SGC-7901细胞的生长曲线、集落形成有明显的抑制作用,其抑制作用与防风的浓度和时间呈正相关关系,其IC50值为24g/mL.防风能使SGC-7901细胞p16和p21编码基因的蛋白表达上调,PCNA,C-Met编码基因的蛋白表达下调.结论 防风能抑制SGC-7901细胞生长;防风可使SGC-7901细胞的p16,p21,PCNA,C-Met表达改变.这些结果 为防风在临床上的进一步应用提供了理论依据.     

野西瓜挥发油对人胃癌SGC-7901细胞的抑制

探讨野西瓜挥发油对人胃癌SGC-7901细胞生长的作用.采用MTT、SRB和肿瘤细胞集落形成能力实验观察野西瓜挥发油对SGC-7901细胞增殖的抑制作用;激光共聚焦显微镜观察FITC-Annexin V和PI双染法检测野西瓜挥发油作用于SGC-7901细胞后细胞凋亡的形态特征.结果显示,野西瓜挥发油可抑制SGC-7901细胞的生长,MTT与SRB法测得其IC50为145.5μg/mL,GI50为121.32μg/mL,LC50为900.96μg/mL,TGI为240.55μg/mL;野西瓜挥发油对SGC-7901细胞集落形成的IC50为160.04μg/mL.Annexin V/PI双染激光共聚焦显微镜观察到75、150、300μg/mL的野西瓜挥发油可诱导SGC-7901细胞出现凋亡早、中、晚期的细胞形态.提示野西瓜挥发油具有明显的抗肿瘤作用,其抑瘤机制可能为诱导肿瘤细胞凋亡.     

大型海藻龙须菜蛋白提取及双向电泳体系的优化

本文以龙须菜为材料,比较了尿素/硫脲法,改良丙酮沉淀法,Trizol法3种不同蛋白质提取方法;并从胶条长度及pH范围,上样量,分离胶浓度等因素探讨了双向电泳技术体系的优化.结果表明:采用Trizol法辅以超声破碎提取龙须菜总蛋白效果优于尿素/硫脲法和改良丙酮沉淀法;同时,采用pH 4-7,11 cm胶条,上样量为800μg,分离胶浓度为12%的双向电泳条件可获得背景清晰,分辨率好的二维电泳图谱.该体系也可以为龙须菜属和江蓠属其他海藻的蛋白质双向电泳分析提供参考.     

蛋白质双向电泳实验课的建设与实践

蛋白质组学作为功能基因组学研究的重要支柱应运而生。双向电泳是蛋白组学研究中最常用的蛋白质分离技术,为了让生物信息专业的学生了解和掌握这项技术,通过实验教学加强学生科研素质和实验技能的培养,华中科技大学生命科学与技术学院在生物信息专业本科生的系统生物学实验教学中开设了“蛋白质双向电泳”的实验内容。由于该项技术操作复杂,对于本科生来说实验难度较大,经过两年的教学实践,我们在实验课教学模式、教学方法和实验器材上进行了创新与探索,在教学效果和学生的实验结果方面均取得了较好的成绩。     

多糖对人胃癌SGC7901细胞生长抑制

以培养的人胃癌SGC7901细胞为对象,研究了用多糖处理后培养细胞的变化特征.结果显示,多糖可以抑制人胃癌SGC7901细胞的增殖,并呈现出对剂量和时间的依赖性.用1.0×10-2g/mL的多糖处理培养细胞48h后,出现典型的形态学凋亡现象和明显的DNA片段化,细胞凋亡率达到40%左右.随着细胞凋亡的发生,BCL-2蛋白的表达下降,而BAX蛋白的表达上升.因此,结果表明多糖可以通过诱导细胞发生凋亡来抑制人胃癌SGC7901细胞的生长,从而达到治疗胃癌的目的.     

运动发酵单胞杆菌蛋白质双向电泳技术的建立

运动发酵单胞杆菌(Zymomonas mobilis)具有高乙醇耐受力和高乙醇转化率,产醇率也较高,是一种很好的生物能源.运用双向电泳技术对运动发酵单胞杆菌蛋白质组进行了一系列单因子实验,经过验证获得了重复性好、分辨率高的双向电泳图谱,为该菌的比较蛋白质组学的研究,发现并克隆产乙醇率高的基因奠定了基础.     

用蛋白质组学技术分析家兔MODS血清蛋白质组的方法初探

应用蛋白质组学技术比较家兔肠源性多器官功能障碍综合征(MODS)模型复制前后的血清蛋白质组表达差异,探索该技术在家兔肠源性MODS研究中应用的可能性.取家兔肠源性MODS模型复制前后血清各50 μL,去除高丰度蛋白后用丙酮将洗脱液中的蛋白沉淀,加入水化液使沉淀中的蛋白充分裂解,离心后取上清液上样.双向电泳后银染,用PDQuest7.4软件进行胶图分析,比较两组血清双向电泳图谱中的差异蛋白点.家兔肠源性MODS前后血清双向电泳图谱清晰,分辨率高,重复性好,可以满足进一步研究的需要.其中11个点在复制MODS后表达上调,8个点下调.复制家兔肠源性MODS前后血清双向电泳图谱存在显著差异;初步建立的家兔血清蛋白质双向凝胶电泳技术,将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础.     

肝癌细胞株HepG-2的G1期细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立

采用双向电泳分离肝癌细胞株 HepG2 的 G1 期细胞的蛋白质,经考马斯亮蓝染色及图像扫描与分析显示:在 pH3-10,13 cm 的 IPG 胶条上,可分离到 227 个重复性及分辨率均较好的蛋白斑点,蛋白斑点的匹配率为 84%.建立了 HepG2 的G1 期细胞蛋白质组双向电泳图谱,为其蛋白质组学的进一步研究奠定了基础.     

甘蔗叶片蛋白质组双向电泳技术优化

为了建立适合甘蔗叶片蛋白质组研究的双向电泳技术,对甘蔗叶蛋白质的溶解方法、IEF电泳、上样量等关键步骤进行了优化.结果表明:裂解液中有2 mmol/L的硫脲才能更充分地溶解蛋白;上样量1.0 mg时得到质量较好的凝胶图谱;甘蔗叶片蛋白质主要分布在pH4～7范围.通过对甘蔗叶片蛋白双向电泳技术的优化,提高了双向电泳图谱分...     

基于双向电泳-MALDI质谱分析的蛋白组学本科教学实验

蛋白质组学已成为研究生物学过程及直接描述细胞和组织变化的有力手段。双向电泳结合生物质谱技术是蛋白质组学研究中的最常用的蛋白质分离和鉴定技术之一。该项技术是生物技术专业本科生必须掌握的一门实验技术。通过双向电泳-MALDI质谱分析的蛋白组学本科教学实验的设计,建立了完善的本科教学实验方案,让大型仪器全面支撑本科教学实验,进一步提高了大型仪器的利用率。