家蝇蛹凝集素对免疫低下小鼠免疫功能的影响

将家蝇蛹凝集素(MPL)分别按400μg/(kg·d)、800μg/(kg·d)、1 200μg/(kg·d)连续给小鼠灌胃10d,于第8d和第9 d给阴性对照组和3个剂量组小鼠腹腔注射环磷酰胺,造成小鼠免疫功能低下.观察家蝇蛹凝集素对免疫低下小鼠免疫器官指数、巨噬细胞的吞噬能力、脾脏淋巴细胞增殖和血清溶血值HC50的影响.结果表明,家蝇蛹凝集素能显著拮抗环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠的免疫器官指数下降,提高巨噬细胞的吞噬能力,明显促进脾脏淋巴细胞增殖,且能使血清溶血素含量显著增加.说明家蝇蛹凝集素对环磷酰胺所致小鼠免疫功能低下有较好的预防作用.     

家蝇蛹中多酚氧化酶的分离纯化及抑菌活性的研究

采用缓冲液浸提、超滤、亲和层析和高效液相色谱4种方法,从家蝇蛹中分离纯化一种D-半乳糖专一性的多酚氧化酶(PO),并对其抑菌活性进行了研究.在SDS-PGAGE中呈现出两个条带,其中表观分子质量为78 ku的条带为目的蛋白;经过高效液相色谱分析,呈现出了分别和SDS-PAGE结果中相对应的两个峰,其中第一个峰为要纯化的目的蛋白;目的蛋白经过肽指纹图谱检测为PO,精确分子质量为79ku.1mL纯化的PO在1 g/L的质量浓度下对1 mL稀释后的大肠埃希菌、枯草芽胞杆菌和伤寒沙门菌(106mL-1)的抑制率分别为43.2%、38.7%和50.1%.     

大豆凝集素的分离纯化及活性鉴定

以D-半乳糖胺为配基、 FF-sepharose 4B为固定相, 制备大豆凝集素亲和层析填料. 分离和纯化大豆中的大豆凝集素蛋白, 测定其纯度、 免疫原性和凝集活性, 并与美国Sigma公司的标准品比较. 结果表明： 每毫升GalN-FF-Sepharose-4B层析填料能结合10 mg大豆凝集素; 纯化获得的大豆凝集素分子量为30 000; SDS-PAGE测定纯度大于98%; Western blot结果为阳性; 1 mg/mL SBA血集效价为1/2^10; 其纯度、 免疫原性和凝集活性等指标与大豆凝集素标准品相同, 与理论值相符.     

木菠萝凝集素的纯化与性质研究

木菠萝种子经抽提、４０－６０％饱和度度硫酸铵沉淀和Ｇａｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ亲和层析，得到纯化的木菠萝凝集素（Ｊａｃａｌｉｎ）。Ｊａｃａｌｉｎ分子量约为５８２００，由分子量分别是１４０００和１５８００的亚基组成，等电聚焦电泳显示多条区带，其ＰＩ为５．７－８．６５，Ｓｃｈｉｆｆ’ｓ试剂染色证明它是一种糖蛋白，Ｎ－末端为精氨酸和甘氨酸。Ｊａｃａｌｉｎ能凝集除山羊、鸡以外的多种动物和人Ａ、Ｂ、Ｏ和Ａ     

3种食用菌凝集素的纯化和部分生物学活性的比较

柱状田头菇、鲍鱼菇、红菇子实体浸出液经硫酸铵分级沉淀、活性炭柱吸附、DEAE-SepharoseFF离子交换层析及Sephadex G-100分子筛层析,得到纯化的柱状田头菇凝集素(Agrocybe cylindraceaLectin,简称ACL)、鲍鱼菇凝集素(Pleurotus abalonusLectin,简称PAL)、红菇凝集素(Russula depallensLcetin,简称RDL).从纯化结果来看,RDL的纯化倍数及蛋白回收率比ACL和PAL高.ACL和RDL对供试动物的红细胞都有凝集作用,PAL只凝集部分动物红细胞并表现出血型专一性.ACL、RDL和PAL除凝集红细胞外也能凝集动物的其它细胞,但PAL不凝集S180瘤细胞.此外,3种凝集素也能凝集某些微生物,如细菌、放线菌、植物病原菌.凝集结果表明ACL、RDL的凝集活性普遍高于PAL.     

凝集素的分离纯化、基因克隆及功能研究进展

凝集素(lectin)研究近年来发展迅速，尤其在植物基因工程中，植物外源凝集素基因越来越受到重视。本文从凝集素的分离纯化、基因克隆、理化性质和功能等方面进行了综述。此外还讨论了凝集素基因在植物基因工程中的应用。     

家蝇蛹血淋巴抗菌活性的诱导及相关蛋白/多肽的表达规律

对家蝇蛹血淋巴的抗菌活性进行了诱导，并用统计学逐步回归的方法和多项式回归的方法确定了抗菌相关蛋白／多肽，研究了其表达规律。结果表明，针刺、带菌针刺和超声波均能诱导家蝇蛹产生抗G^ 球菌的物质，而对G^-杆菌无效。在分子量低于18000的蛋白／多肽中，有两种物质（R5、R6）对抑菌活性有显著影响，它们的表观分子量分别在12000和7650左右，这两种蛋白／多肽均在诱导下表达。其中，R6对抑菌活性有极显著正贡献，而R5对抑菌活性有显著负贡献，推测R5为细胞生长促进因子。     

黄牛肝菌凝集素的分离纯化及部分性质

黄牛肝菌(Boletus fulvus)经生理盐水浸提、CM-Sepharose、DEAE-Sepharose及Sephacryl S-100分子筛层析后得到黄牛肝菌凝集素(BFL).经SDS-PAGE电泳及Sephacryl S-100分子筛层析检测表明,所得的BFL是由两个分子量约15.8kDa、非二硫键相连的亚基组成的表观分子量为32kDa的二聚体.BFL可快速凝集兔血红细胞,其最低凝集浓度为3.9μg/mL;糖抑制试验表明,胃粘蛋白、甲状腺球蛋白、卵粘蛋白和卵清蛋白均可抑制BFL活性.当温度在70℃以下和pH值在6.0~9.8之间时,BFL凝血活性基本不变.然而当温度至90℃以上和在极端pH值下,BFL凝血活性减弱甚至完全丧失.不同浓度的脲和盐酸胍对BFL凝血活性的影响表明:随着变性剂浓度的增加,BFL的结构逐渐被破坏.     

大豆凝集素的分离纯化及血凝效果研究

为研究不同品种大豆中凝集素相对含量高低及血凝效果,用0.9%Na Cl溶液抽提不同品种大豆中的凝集素,通过观察凝集素提取液与2%红细胞悬液的凝集反应程度,来初步判断凝集素的含量高低;再通过测定凝集素提取液与2%红细胞悬液作用后上清液吸光值,以及凝集红细胞沉淀的干重,进一步确定不同品种大豆中凝集素的相对含量。结果表明,利用血凝法可快速测定大豆中的凝集素含量,‘晋科5号’、‘长豆34号’凝集素含量最高,‘晋豆25号’、‘晋遗57号’凝集素含量次之,‘晋遗59号’含量最低。     

家蝇幼虫凝集素的分离纯化及其抑制MCF-7细胞活性的研究

家蝇幼虫血淋巴粗提液经过亲和层析,分离出3种与D-半乳糖特异性结合的蛋白,经高效液相色谱和聚丙烯酰胺凝胶电泳,分离出分子质量为38 ku的家蝇幼虫凝集素(MLL-2),该组分具有明显的凝血活性,圆二色谱结果表明,MLL-2的二级结构主要是以β折叠(80.3%)和无规卷曲(19.5%)的构象存在.MTT实验结果显示,MLL-2对人乳腺癌(MCF-7)细胞的生长具有明显的抑制作用,其抑制效果具有时间和浓度依赖性,形态学观察表明,MLL-2处理过的MCF-7细胞出现凋亡小体、染色质浓缩凋亡现象.经流式细胞仪分析MCF-7细胞被阻遏在G2/M期,并且凋亡率随作用时间的延长而增加.MLL-2通过诱导MCF-7细胞发生凋亡,从而起到抑制肿瘤细胞生长的作用.     

重组金针菇免疫调节蛋白的纯化及生物活性研究

目的研究重组的金针菇免疫调节蛋白(re FIP-fve)对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用、诱导小鼠脾淋巴细胞对白细胞介素-2(IL-2)的促分泌作用及对血细胞的凝集作用.方法采用离子交换色谱法,利用SP Sepharose XL色谱柱纯化重组的免疫调节蛋白;将纯化后的蛋白作用于小鼠脾淋巴细胞和血细胞,用MTT法检测蛋白对脾细胞增殖和血细胞凝集的影响;用ELISA法检测蛋白对淋巴细胞分泌细胞因子的作用.结果经过SP Sepharose XL色谱柱纯化后可获得纯度为86%的重组蛋白;纯化蛋白浓度在80μg/m L时最大限度促进细胞增殖;蛋白浓度在2μg/m L时开始出现凝血;ELISA检测结果显示:重组的金针菇免疫调节蛋白能明显增强小鼠脾淋巴细胞分泌白细胞介素2(IL-2)的水平.结论经过SP Sepharose XL色谱柱纯化后可获得纯度较高的蛋白;纯化后的蛋白与小鼠脾淋巴细胞共同培养,不仅可以促进脾细胞的增殖,而且能增强小鼠脾淋巴细胞分泌白细胞介素2的水平;蛋白与血细胞共同培养能够促进血细胞的凝集.     

甘薯品种岩8-6凝集素的分离纯化及其性质

甘薯品种岩8－6的叶片组织依次经硫酸铵分级沉淀,甲壳素亲和层析及Sephadex G-75分离纯化得到一种凝集素（IPomoea Batatas Lectin,简称IBL）,纯化的IBL电泳显示一条蛋白质着色带,IBL的亚基相对分子质量为47000,IBL对兔红细胞有凝集作用,凝血活性可被D－果糖明显抑制,IBL对热不稳定,加热到70度时,活性完全丧失,IBL对碱敏感,IBL含有16种氨基酸,富含Asp和Glu,中性糖含量为5．07％。     

香葱凝集素的分离纯化及其部分性质的研究

香葱叶片经生理盐水抽提、硫酸铵沉淀、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５和Ｂｏ－ＧｅｌＰ－３０柱层析分离得到香葱凝集素。该凝集经聚丙烯酰胺凝胶电泳、糖蛋白色均显示单一条带。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得两条带相对分子质量分别为２９０００和２３０００，表明该凝集素是由两个不同的亚基组成。     

家蝇精氨酸激酶基因克隆及其在害虫防治上的应用

从家蝇转录组数据库中筛选到一条精氨酸激酶同源序列,将其命名为家蝇精氨酸激酶(Musca domestica arginine kinase,简称:MdAK).通过RT-PCR克隆得到MdAK cDNA序列,长2 007bp,编码356个氨基酸残基,编码蛋白的分子质量为40.0ku.利用RNAi技术敲低家蝇幼虫精氨酸激酶的表达后,其生长发育受到影响,死亡率明显升高.认为精氨酸激酶可以作为害虫生物防治的潜在靶点.     

蝇蛆肽的发酵法制备及其对果蝇的延寿作用

以米曲霉(Aspergillus oryzae)沪酿3.042转化蝇蛆蛋白,蝇蛆蛋白的主要组分91.8 ku蛋白经发酵后被降解,转化形成了分子质量为4.3～65.9 ku的蝇蛆肽,发酵液中蝇蛆肽质量浓度为7.9 mg/mL,肽转化率为31.6％.在饲喂雌雄黑腹果蝇(Drosoph ila melanogaster)的基础培养基中分别添加蝇蛆肽,使其质量分数为0,1％,2％,4％,每天分组记录果蝇的死亡数目和存活时间,直至果蝇全部自然死亡.结果表明,饲喂高浓度蝇蛆肽的雌雄果蝇的平均寿命和平均最高寿命均显著延长,提示蝇蛆肽具有一定的抗衰老作用.     

舍蝇（Musca domestica vicina）发育与习性

在室温25℃±1℃,相对湿度55%～65%条件下,舍蝇的卵期0.92～1.25(1.04)d,幼虫期4～6.75(5.65)d,蛹期5～7.78(6.80)d,成虫产卵前期4～6(5.33)d.完成一个世代的发育需13.92～21.78(18.82)d.还报告了舍蝇各虫期的主要特征和卵、幼虫及成虫的重要习性.