非直接荧光免疫法鉴定HMG＿（14）非组蛋白质在果蝇唾腺染色体上的原位分布

以获得的抗ＨＭＧ＿（１４）ＭｃＡｂ为探针,运用间接荧光免疫技术,对果蝇（Ｄ,Ｖｉｖｉｌｉｓ南京）唾腺染色体上ＨＭＧ＿（１４）的分布及其ＨＭＧ＿（１４）与活性区“ｐｕｆｆ”的关系进行了初步观察。发现;（１）ＨＭＣ＿（１４）分布在唾腺染色体所有的横纹带上;（２）在“ｐｕｆｆ”区,ＨＭＧ＿（１４）有增加的趋势;（３）ＤＮａｓｅＩ处理可以使染色体上的ＨＭＧ＿（１４）丢失。实验结果进一步验证了ＨＭＧ＿（１４）是染色体上的一种结构性蛋白。     

HMC14单克隆抗体杂交瘤株的建立

以北京鸭红细胞提取的ＨＭＧｓ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取其脏压细胞与Ｓｐ２／０（小鼠骨髓瘤细胞）融合，经选择培养，阳性筛选，克隆化以及冻存复苏，获得了三株稳定分泌抗ＨＭＧ１４的杂交瘤细胞株，经ＷｗｓｔｅｒｎＢｌｏｔ鉴定，与其它几种ＨＭＧ无反应，抗体为ＩｇＧ１亚型。腹水ＨＭＧ１４单隆抗体经ＳｅｐｈａｄｘＣＬ－４Ｂ亲和柱得到了纯化。     

抗孕酮单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

应用自制的结合抗原孕酮—BSA,免疫Balb/c小鼠,取其脾脏细胞与SP_2/0骨髓瘤细胞进行二次融合、共384孔、杂交瘤细胞102孔,融合率为25.26％,其中15个阳性孔、占10.7％,获得PE_7 PG_4两个阳性分泌细胞株。经四次克隆冻存多批,保存七个月后,其抗体效价稳定。经载体取代实验,证明单克隆抗体仅对黄体酮起反应;对BSA呈阴性反应。单抗对雌二醇无交叉反应。     

分泌抗弓形虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用弓形虫可溶性抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠,取脾细胞,与Ｓｐ２／０ 细胞融合,获得３ 株能稳定分泌抗弓形虫单克隆抗体的细胞。细胞培养上清液和腹水中的单克隆抗体效价分别为１∶１６ ～２５６ 和１０ － ６ ～１０ － ７ 。单抗类型均为ＩｇＭ。杂交瘤细胞经液氮冻存１２ 个月后,复苏生长良好,分泌活性稳定。在ＭｃＡｂ－ Ｄｏｔ－ ＥＬＩＳＡ 实验中,所能测出可溶性抗原的最小浓度为１０ ｎｇ／ ｍＬ     

抗家蚕抗菌肽单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

首次报道了抗家蚕抗菌肽（一种小分子多肽）单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立．用ＦＰＬＣ纯化家蚕抗菌肽（ＡＢＰ）获得了电泳一条带的均一样品；将它与辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）偶联，以此偶联物免疫ＢＡＬＢ／Ｃ鼠．以抗菌肽—牛血清白蛋白（ＡＢＰ－ＢＳＡ）做包被物ＥＬＩＳＡ筛选出５个阳性杂交瘤细胞株，冻存复苏后得到三个稳定分泌抗体的阳性细胞株，抗体ＩｇＧ亚型为ＩｇＧ２ａ．统计了杂交瘤的染色体数     

抗鱼卵透明带单克隆抗体淋巴细胞杂交瘤的建立及初步鉴定

详细介绍了抗鱼（花鲢Anstichthysnobilis）卵透明带单克隆抗体淋巴细胞杂交瘤的制备及鉴定方法，用佛氏佐剂乳化热溶花鲢鱼卵透明带，然后免疫雌性BALB／C小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤Sp2／0融合产生杂交瘤，经3次再克隆后，用间接ELISA方法筛选出一株抗鱼卵透明带的单克隆抗体杂交瘤，经免疫双扩散试验测得该种单克隆抗体为IgG1，经过染色体检查知其染色体数目在86～108之间，为93.6±3.81，杂交瘤细胞染色体经检查发现有中间和亚中着丝点染色体，符合杂交细胞染色体特征。     

培养杂交瘤细胞制备单克隆抗体的工艺过程

研究了在生物反应器中培养RT-28杂交瘤细胞分泌抗A红细胞单抗的工艺过程,包括搅拌剪切、通气方式及溶氧水平、连续灌注稀释率等条件,对细胞生长及产物分泌、葡萄糖代谢及乳酸产生的影响,得出了合适的工艺条件为:温度37℃,溶解氧10～60%空气饱合度,搅拌转速30～60r/min,pH7.0～7.2。细胞密度达2.0×10~6cells/mL,单抗滴度述1:256。     

抗牛免疫缺陷病毒（BIV）穿膜蛋白gp45杂交瘤细胞株的建立

编码牛免疫缺陷病毒（ＢＩＶ）穿膜蛋白的一个４００ｂｐ的基因片断被克隆到ｐＡＴＨ表达载体上，此 重组的融合蛋白ＴｒｐＥ－Ｅｎｖ８在大肠杆菌中得到高效表达，而且包含有与ＢＩＶ抗体特异性反应的抗原决定簇。我们用此融合蛋白免疫ｂａｌｂ／ｃ小鼠得到与ＢＩＶ穿膜蛋白特异性反应的杂交瘤。此单克隆抗体在蛋白印迹法分析中与重组的ＴｒｐＥ－Ｅｎｖ８有特异性反应，用免疫酶染色法可检测ＢＩＶ在体外的复制。     

ces＿p（E＿i）的非L＿n￣（1）与局部一致非L＿n￣（1）

本文证明了ｃｅｓ＿ｐ（Ｅ＿ｉ）是非（非方形）、局部一致非（局部一致非方形）的充要条件为每个Ｅ＿ｉ分别也是非（非方形）、局部一致非（局部一致非方形）。     

天花粉蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系的制备及鉴定

将小鼠骨髓瘤细胞（SP2／0细胞）与经TCS免疫过的小鼠脾细胞融合,融合后的细胞悬浮于HAT培养液中进行选择性培养,挑选可以分泌TCS单克隆抗体的细胞系,再经克隆化为单克隆细胞系。用间接酶联免疫吸附法检测此细胞系分泌单克隆抗体情况。经细胞融合和2次克隆化后,获得1株可以稳定分泌TCS单克隆抗体杂交瘤细胞系,ELISA检测结果为阳性。获得了可以稳定分泌天花粉蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系,为TCS鉴定、应用奠定良好的基础。     

镉螯合物特异性单克隆抗体的制备与鉴定

为了获得镉螯合物特异性单克隆抗体, 以异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸为双功能螯合剂连接镉离子与钥孔戚血蓝素,牛血清白蛋白合成了免疫原与包被抗原. 经过抗原鉴定,免疫Balb/c小鼠, 取小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤, 经筛选和2次克隆化, 从制备的腹水中获取单克隆抗体. 用酶联免疫吸附测定法鉴定单克隆抗体3A9D9G7的特性,腹水效价为4×10-4, 单抗亚类为IgM, 轻链为κ型, 亲和常数为1.44×1010 mol/L, 其他金属螯合物的交叉反应低于0.9%, 表明该单克隆抗体能特异性识别Cd-EDTA, 为环境样品与食品中镉残留的快速检测提供了工具.     

雌三醇单克隆抗体的制备与表征

活化雌三醇 (E3 )C3处的酚—OH ,与牛血清白蛋白 (BSA)偶联 ,制备得E3 的完全抗原。利用完全抗原免疫动物 ,采用单克隆抗体技术 ,经过细胞融合、克隆筛选、扩大培养、动物体内诱生等过程 ,最后获得了E3 的单克隆抗体。对纯化的单克隆抗体的性质进行表征 ,结果表明 :抗体的效价为 6 0× 10 -10 mol L ,抗体属于IgG1型 ,分子量为 16 80 0 0u ,单克隆抗体与固定化抗原亲和常数为4 7× 10 7L mol。     

应用噬菌体随机肽库研究抗溶藻弧菌及其外膜蛋白单抗识别的特异性表位

用噬菌体随机七肽库筛选制备的抗溶藻弧菌及其外膜蛋白的纯化单抗，经3轮淘洗，获得较高程度富集的噬菌体，效价较高，第3轮淘洗比第1轮淘洗的产量高出近百倍。同时获得的阳性噬菌体经ELISA检测能与Va抗原发生强的阳性反应，确证了淘洗筛选的结果。     

Preparation and Identification of Monoclonal Antibodies Against Vibrio anguillarum

Monoclonal antibodies (Mabs) against V. anguillarum strain M3 are prepared, and their isotypes are also characterized. Among them, C1C5 is the only Mab which does not cross-react with other eleven non-V, anguillarum strains. The proteinase K digestion test shows that the epitopes recognized by C1C5, C6C3 and C6C32 Mabs contained protein. The periodate oxidation test showed that the epitopes recognized by Mabs except C1 C5 are glycosylated. In addition, results of additivity test indicate that the epitopes recognized by C6C3 and C6C32 Mabs are similar, and quite different from those recognized by MabC1C5.     

Smurf2单克隆抗体的制备与鉴定

Smad泛素调节因子家族的两个E3泛素连接酶成员Smurf1和Smurf2 (Smad ubiquitin regulatory factor 1 and 2)具有至少80％的同源性.为了更好地研究它们的功能,需要获得一个能区分Smurf1和Smurf2的单克隆抗体.选取Smurf2与Smurf1蛋白序列中仅有的非同源区域序列作为抗原免疫Bal b/C小鼠,成功制备若干株能稳定分泌抗Smurf2抗体的杂交瘤细胞株.对所获得的单克隆抗体的效价和特异性等进行一系列检测,结果表明该抗体能特异性地识别过表达及细胞内源Smurf2蛋白.此外该抗体能被应用于Western blot和免疫荧光实验,从而为深入研究Smurf2的细胞生物学功能提供了良好的实验基础.     

脊髓灰质炎病毒I型单克隆抗体的制备

目的: 为建立脊灰病毒Sabin株I型特异的单克隆抗体．方法:以Vero细胞增殖病毒并用蔗糖密度梯度离心法纯化后,用病毒免疫SPF级Balb/c小鼠．取小鼠免疫脾淋巴细胞与SP2/0-Ag14骨髓瘤细胞进行细胞融合,通过间接 ELISA 法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞,并用有限稀释法克隆化．用细胞培养法制备脊灰病毒单抗,并以中和试验测定单抗效价．结果:获得了8株分泌抗脊灰病毒Sabin株I型单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中1株G8G7能够稳定分泌抗体．间接ELISA 法测得单抗的效价为1∶8,中和试验测得中和抗体的效价为1∶58．结论:G8G7分泌的抗体为抗脊灰病毒Sabin株I型特异的单克隆抗体.     

抗人骨桥蛋白单克隆抗体制备及其特异性研究

利用RT-PCR技术克隆人骨桥蛋白(hOPN)基因,构建OPN原核表达质粒pET-32a(+)-hOPN,转化BL21菌株,经IPTG诱导表达重组人骨桥蛋白(rhOPN).以纯化的rhOPN为免疫原,免疫BABL/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞NS1融合.通过有限稀释法进行克隆和间接ELISA筛选,获得抗人OPN蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株,以ELISA、Western blot对抗体特异性进行鉴定.通过竞争抑制试验对单克隆抗体识别抗原位点进行分析.结果共获得2株抗人OPN单克隆抗体,分别命名为8F1和2B5,亚型测定皆为IgG1.通过细胞侵袭抑制试验检测,2株抗人OPN mAb皆能很好地抑制细胞迁移.本研究成功获得了抗人骨桥蛋白的特异性单克隆抗体,为进一步研究OPN蛋白在自身免疫病和肿瘤中的功能提供了重要的工具.