~3H标记化合物显示细胞内大分子代谢动态过程问题研究

使用放射性同位素3H标记的化合物3H-TdR、3H-Urd、3H-Leu作为培养中的动物细胞生物合成的前体,定时对培养细胞做放射性检测,表明生物大分子合成随时间而上升.进一步研究表明,异三尖杉酯碱对生物大分子合成有明显的抑制作用.     

MTT法测定高三尖杉酯碱对人肝癌HepG2抑制作用

采用MTT法检测高三尖杉酯碱对HepG2细胞体外培养的抑制作用.将常规用96孔板培养的HepG2细胞作为空白组,其余分11个剂量的给药组,相应处理24、48、72 h.与空白组对照后,HepG2细胞的增殖被各给药组不同程度的抑制,并随着给药剂量的增加其抑制率也增加.高三尖杉酯碱在体外可有效的抑制人肝癌细胞的活性和细胞增殖.     

粉防己碱逆转人早幼粒白血病HL60耐药细胞对三尖杉酯碱的耐药性

无细胞毒性浓度的粉防己碱（０．５ｍｇ·Ｌ－１），明显地增强三尖杉酯碱对人早幼粒白血病ＨＬ６０耐药细胞的生长抑制作用，降低集落形成率，但对敏感ＨＬ６０细胞没有增强作用。ＤＰＨ荧光标记法测定表明，粉防己碱对细胞膜流动性没有影响；提取经药物作用后的细胞ＤＮＡ，琼脂糖凝胶电泳显示，粉防己碱增加三尖杉酯碱引起的ＨＬ６０耐药细胞ＤＮＡ降解，使细胞以编程方式死亡。结果表明：粉防己碱能逆转人早幼粒白血病ＨＬ６０耐药细胞对三尖杉酯碱的耐药性，值得临床上进一步研究。     

抗三尖杉酯碱的HL60细胞蛋白质磷酸化

研究了抗三尖杉酯碱的ＨＬ６０细胞蛋白质磷酸化的变化。经差速离心得到纯膜蛋白，抗性细胞有一高度磷酸化的１１０ｋｕ的蛋白质存在，免疫沉淀ｃ－ＫＡＦ－１蛋白激酶，抗性细胞内ｃ－ＲＡＦ－１蛋白激酶磷酸化程度明显提高，其活性被蛋白激酶Ｃ抑制剂ＣａｌｐｈｏｓｔｉｎＣ明显地抑制。结果表明：ＨＬ６０细胞对三尖杉酯碱的抗药性与蛋白质高度磷酸化有关；抗性细胞内ｃ－ＲＡＦ－１蛋白激酶磷酸化程度明显提高，可能与多药抗药性和抗细胞调亡有关。     

四异硫氰基哌啶氧自由基对白血病L7712型细胞增殖和代谢的影响

用细胞培养~3H-TdR掺入法,证明四异硫氰基哌啶氧自由基对白血病L_(7712)型细胞的增殖有明显的抑制作用。吉姆萨染色低渗法,发现4μg/ml上述自由基能明显降低培养24小时L_(7712)型细胞的有丝分裂指数。用~3H-TdR,~3H—Urd和~3H-Leu体外掺入,滤膜处理和液内测量技术,发现上述自由基能明显地抑制L_(7712)型细胞DNA,RNA,和蛋白质的合成。     

敏感和抗性的白血病HL60细胞对staurosporine诱导凋亡的不同反应(英)

用对蛋白激酶具有强烈抑制、作用广泛的抑制剂staurosporine（Sta）,研究敏感和抗三尖杉酯碱的人白血病HL60细胞中凋亡和多药抗药性的关系．Sta均能诱导2种细胞发生典型的凋亡,但抗性细胞发生凋亡需更长的时间,凋亡的细胞数减少．Sta增加柔红霉素在抗性细胞内的积聚,说明其能逆转多药抗药性．在抗性细胞凋亡过程中,mdrl基因表达没有变化,c-myc基因表达稍有增加．结果显示：Sta能诱导敏感和抗三尖杉酯碱的HL60细胞发生凋亡,mdrl基因表达与凋亡过程无关．     

EC109细胞株细胞周期DNA代谢和形态改变的研究

人食管癌细胞株 EC109以显微分光光度计测定癌细胞核 DNA 含量,以放射自显影测定细胞核摄取~3H-TdR 和扫描电镜检查细胞表面的超微结构.大多数 EC109瘤细胞间期细胞核的 DNA 含量增加,主要干系细胞 DNA 含量为2 C,属 G_1期,也可见低于四倍体(3 C),高于四倍体(>4 C).甚至多倍体(>8 C)的瘤细胞.~3H-TdR 加入培养基10分钟后,许多瘤细胞核有银粒出现(S 期细胞).大量细胞进入细胞周期反映其恶性程度高.扫描电镜可见 EC109在细胞周期不同阶段其细胞大小形状和微绒毛也不同.本文结果说明用细胞核 DAN 含量测定,~3H-TdR 掺入和细胞表面超微结构可测定肿瘤周期.也可用这些方法判定瘤细胞的恶性程度.     

丁酸钠对M期同步及非同步的HeLa细胞早G_1期阻断的可逆性

本文采用早熟染色体凝集(PCC)和~3H-TdR显微自显影技术,观察丁酸钠对同步及非同步的HeLa细胞早G_1期阻断的可逆性及其可逆的进程。实验发现丁酸钠对HeLa细胞早G_1期阻断完全是可逆的,且这种可逆是在洗去丁酸钠后立即产生,丁酸钠对HeLa细胞早G_1期阻断的时间点发生在细胞进入S期前的9.5h;发现早G_1期阻断后的恢复必须再经过中、晚G_1期然后才能进入S期.     

离心淘洗技术在药物细胞毒性研究中的应用

应用离心淘洗技术同步分离体外培养小鼠红白血病细胞,得到同步化的G_1期,S期和G_2M期细胞。经药物处理后进行细胞集落形成实验,发现钙拮抗刺异博定对各时相细胞集落形成率影响很小。而抗癌药物平阳霉素对各时相细胞都有较强毒性,特别是对G_2M期细胞,杀伤作用特别强。     

双丁酰环腺苷酸对人胃腺癌体外培养细胞DNA合成的影响

应用~3H-TdR光镜和电镜放射自显影观察表明,MGc80-3 细胞标记指数达31.51％,标记银粒集中于分裂间期的S期细胞核中,细胞核呈重标记状态,绝大多数标记银粒分布于细胞核常染色质区域,少数见于核孔附近的常染色质或核孔附近的细胞质中,核仁未见标记,显示细胞内 DNA合成十分活跃。但经 dBcAMP诱导后,标记指数则降至 4.35％,细胞核呈弱标记状态,电镜放射自显影则未在细胞核内见到标记银粒,表明其DNA合成受到明显抑制。这种变化是由于dBcAMP诱导胃癌细胞内cAMP水平提高而实现的,认为DNA合成抑制是导致MGc80-3细胞走向分化的一个重要原因,对于癌变细胞恶性表型逆转具有重要作用。     

taxol对V79—8系细胞微核化机理的探讨

用多种方法探讨了 v_(79-8)系细胞在 taxol 作用下微核化的时期和机理.早熟染色体凝集(PCC)法发现此种 G_1 及 G_2 期缺陷的细胞株,在一定的生长条件下有相当数量的 G_1 和 G_2 细胞存在.taxol 作用后,首先是有丝分裂指数(I_m)的增加,然后随 I_m 的下降细胞微核化增加.秋水仙酰胺阻断的 M 期细胞,在释放的同时加入 taxol,细胞微核化速率增加迅速.微管的间接免疫荧光法显示,在 taxol 作用下,微管集合成不规则的束.微核化细胞可以继续合成 DNA.每个微核中含有可被抗着丝点抗体(ACA)血清荧光染色的着丝点.     

异鼠李素抑制人食道癌细胞生长及Id-1蛋白表达

采用细胞生长、克隆形成、3H-TdR 掺入实验和流式细胞术等方法研究40 ×10-6 g/mL〖JP〗异鼠李素对Eca-109细胞生长的作用,同时利用荧光显微镜观察和免疫印迹技术研究异鼠李素对 Id-1蛋白表达量的影响.经异鼠李素作用,Eca-109细胞生长明显被抑制,集落形成率和3H-TdR掺入率明显低于对照组,流式细胞仪检测显示异鼠李素处理细胞被阻止在G0/G1期.荧光显微镜观察和免疫印迹检测显示异鼠李素处理组细胞Id-1蛋白表达量降低.以上数据表明异鼠李素可能通过调低Id-1基因表达,抑制Eca-109细胞增殖.     

植物细胞固定化条件对海南粗榧细胞生产三尖杉酯碱的影响

为了研究海南粗榧细胞的固定化条件及其对细胞的生长和三尖杉酯碱合成的影响,本研究利用海藻酸钠凝胶包埋法对海南粗榧悬浮细胞进行固定化,并改变了其固定化条件,同时测定了生物量、PAL酶活性、凝胶球硬度、蔗糖含量和三尖杉酯碱产量等指标,结果显示:海南粗榧固定化细胞的生长周期为40 d,其中,在0~15 d其细胞生长停滞,在15~30 d其细胞生长缓慢,而30~40 d为缓慢衰亡期;海南粗榧细胞固定化培养的最佳产物提取时间为第15 d;包埋过程中Ca Cl_2的最适质量浓度为0.023 g/m L;鲜重细胞的最适接种量为10%.由此得出结论:海南粗榧细胞固定化培养抑制了细胞的生长,延长了细胞的生长周期,但缩短了细胞生产三尖杉酯碱的周期.     

脱氧三尖杉酯碱的合成

(一)在分析 Mikolajczak等人最初试图合成脱氧三尖杉酯碱(Va)未得预期结果的经验教训之后,我们尝试了分步接枝改造结构的合成路线(见反应方程组A),得到预期产物——脱氧三尖杉酯碱(Va,约70％)及其差向异构体(Vb,约30％)的混合物。 (二)为了提高总产率并充份利用贵重的天然产物原料——三尖杉碱(Ⅵ),又探索了改进的合成路线。从实践中体会到:利用异戊醛与马尿酸为起始原料以合成侧链的关键化合物——5-甲基-己酮-2-酸(Ⅺ)较为切实可行,不要求特殊条件,操作也较简便。从而使预期产物——脱氧三尖杉酯碱(Va)及其差向异构体(Vb)的总产率提高。整个过程见反应方程组B 所示。 (三)预期产物粗产品(实验编号DH4.8)作过初步的抗癌试验,表明在10微克/毫升浓度时,对人体宫颈癌细胞(组织培养法)有明显的抑制作用,如表2所示。     

3,7-二硝基-二苯基溴盐诱导K562细胞株的凋亡

采用苔盼蓝染色法、MTT比色法研究了环状溴代鎓盐cBr对人慢性粒细胞白血病细胞株K562增殖的影响;并用同位素示踪技术(3H-TdR)研究了cBr对K562细胞DNA的损伤作用;从形态学(荧光显微镜、电镜观察)和生化特性(流式细胞术、3H-TdR掺入法分析)研究了cBr抑制K562细胞增殖作用的机制.结果表明:在体外cBr显著抑制K562细胞增殖,并对DNA造成损伤,提示cBr的作用是通过诱导细胞凋亡而进行的,是一种新型的免疫增强剂.     

三尖杉酯碱诱导HeLa细胞凋亡的研究

报道了三尖杉酯碱 (harringtonine ,HT)可以诱导HeLa细胞凋亡 .采用Heochst33342荧光染色、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞光度术 (FCM)的方法 ,研究了HT对HeLa细胞凋亡的影响 .利用细胞同步化技术和斑点杂交法研究发现 ,HT影响了HeLa细胞c myc和bcl 2基因的表达并且与细胞周期密切相关 .初步探讨其凋亡诱导的机制 ,认为HT通过在G1和G2 期下调细胞凋亡抑制基因bcl 2的诱导凋亡 ,以及下调c myc癌基因阻滞细胞增殖 ,并延迟凋亡发生 .这些结果对于了解HT的药物作用机制和提高临床化疗疗效具有重要意义 .     

敏感和抗性的白血病HL60细胞对staurosporine诱导 …

用对蛋白激酶具有强烈抑制、作用广泛的抑制剂ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（Ｓｔａ）,研究敏感和抗三尖杉酯碱的人白血病ＨＬ６０细胞中凋亡和多药抗药性的关系。Ｓｔａ均能诱导２种细胞发生典型的凋亡,但抗性细胞发生凋亡需更长的时间、凋亡的细胞数减少。Ｓｔａ增加柔红霉素在抗性细胞内的积聚,说明其能逆转多药抗药性,在抗性细胞凋亡过程中,ｍｄｒｌ基因表达没有变化,ｃ－ｍｙｃ稍有增加,结果显示：Ｓｔａ能诱导敏感和抗三     

SMYD3对氯化钴诱导T47D乳腺癌细胞缺氧的影响分析

为了探究组蛋白甲基化酶SMYD3是否会对氯化钴(CoCl_2)诱导乳腺癌细胞缺氧损伤作用产生影响,采用MTT法和流式细胞术检测不同浓度的CoCl_2(0、50、100、200、400,μmol/L)给药24,h以及联合转染过表达质粒使SMYD3过表达后对T47D细胞的增殖及细胞周期的影响;实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测其对SMYD3转录表达的影响情况.MTT和流式细胞术结果显示:CoCl_2可剂量依赖性地对T47D乳腺癌细胞的增殖产生抑制作用(P0.01),并诱导产生G0/G1期细胞周期阻滞(P0.05).CoCl_2可以抑制SMYD3的转录(P0.01).利用siRNA抑制内源性SMYD3表达后同样可诱导细胞发生G0/G1期阻滞(P0.05),而转染外源质粒使SMYD3过表达则可明显拮抗CoCl_2所诱导的G0/G1期阻滞及对细胞的杀伤作用.CoCl_2对T47D细胞的周期调控作用可能与抑制SMYD3的表达有关,SMYD3的过表达可提升肿瘤细胞在缺氧环境下的存活能力.     

￣(211)At标记单克隆抗体3H11及其Fab片段对人胃癌细胞免疫结合和杀伤效应的研究

采用间接标记方法，通过对砹（２１１Ａｔ）苯甲酸中间体，制得２１１Ａｔ与单克隆抗体３Ｈ１１和Ｆａｂ片段的偶联物，其放化产率分别为３０％和３５％．２１１Ａｔ－３Ｈ１１和２１１Ａｔ－３Ｈ１１Ｆａｂ在体外稳定，对Ｍ８５人胃癌细胞具有明显的特异免疫结合和杀伤作用．核素前体掺入法的初步研究结果表明，２１１Ａｔ－３Ｈ１１和２１１Ａｔ－３Ｈ１１Ｆａｂ是通过对癌细胞ＤＮＡ和ＲＮＡ合成的抑制，特别是合成ＲＮＡ的抑制杀伤癌细胞的     

W256荷瘤大鼠组织中PGE2含量的测定

研究了大鼠 W_(256)肿瘤组织中前列腺素(PGE_2)的含量与正常组织的关系,并观察药物对 PGE_2含量的影响.实验结果表明。肺和胃肠中 PGE_2含量较高,肝和肿瘤组织中含量较低.足叶乙甙(VP_(16-213))腹腔注射20 mg/kg,能明显提高 W_(256)大鼠肝组织中 PGE_2的含量;三尖杉酯碱腹腔注射1 mg/kg 能明显降低瘤组织中 PGE_2的含量;血卟啉衍生物 HPD 和去甲斑蟊素对 PGE_2含量无明显影响.