抗体药物的植物反应器生产

大量的重组抗体被用于疾病的预防、诊断和治疗．目前．这些重组抗体绝大多数是利用鼠源细胞生产的．它的缺点是有潜在的隐患和价格昂贵．然而．植物作为反应器生产抗体药物既具有安全性又可大规模廉价生产的特点．具有广阔的前景．     

烟曲霉Asp f3和Asp f4的表达纯化与多克隆抗体的制备

侵袭性曲霉病以烟曲霉在肺部定植、侵袭为主,具有较高的致死率.治疗侵袭性曲霉病的关键是早期确诊.目前临床上用于诊断侵袭性曲霉病的血清学方法是检测血清中半乳甘露聚糖循环抗原的GM试验,在敏感性和特异性方面存在局限性.为了用抗重组蛋白多克隆抗体鉴定和分析烟曲霉Asp f3和Asp f4特异性和曲霉广谱性表位,构建检测可疑血清样本中相应抗体的表位嵌合肽,以诊断侵袭性曲霉病.本研究表达纯化了烟曲霉Asp f3和Asp f4重组蛋白,制备了IgG抗体滴度均在1.28×106以上的高滴度的兔抗重组蛋白多克隆抗体.     

人凝血因子Ⅸ的线性B细胞表位预测及鉴定

为预测并鉴定人凝血因子IX(FIX)的线性B细胞表位.通过IEDB数据库及Discovery Studio软件预测FIX的B表位和白喉毒素T结构域(DTT)的B表位,用所预测的FIX的B表位替换某预测的DTT的B表位形成DTT-表位融合蛋白.通过基因工程技术制备各重组蛋白,并免疫小鼠,通过ELISA和Western-blot检测抗血清效价和特异性,通过等温量热滴定技术(ITC)测定抗体的亲和力.预测到4个FIX的B表位.用重组蛋白FIX-2-DTT免疫的小鼠产生了识别完整FIX的抗体,该抗体具有良好的特异性,其结合常数KD为106 M-1.表明FIX-2(306 NAAINKY312)是FIX的B表位,用重组蛋白FIX-2-DTT免疫小鼠能够产生特异性识别FIX且亲和力温和的抗体.     

重组猪生长激素抗体的制备与纯化

为了获得重组猪生长激素抗体,对重组猪生长激素融合基因的真核表达产物进行免疫印迹(Western blot)检测,将利用DNA重组技术构建的重组质粒pPGH020在大肠杆菌(E.coli)BL21中进行诱导表达.表达产物经Ni+亲和层析柱纯化,获得纯化的重组猪生长激素融合蛋白.然后以此为抗原免疫新西兰大白兔,获得多克隆抗体,抗体再经硫铵沉淀、透析和亲和层析纯化.Western印迹结果表明,该纯化抗体显示了良好的免疫反应,其灵敏度比兔抗rpGH抗血清提高50倍,为猪生长激素融合基因在真核细胞的表达及功能鉴定奠定了基础.     

莱茵衣藻作为绿色细胞工厂生产高附加值重组蛋白的研究进展

重组蛋白广泛用于医疗、养殖、食品等领域.利用单细胞绿藻——莱茵衣藻为绿色细胞工厂生产重组蛋白的研究在很长时间以来便引起了广泛的关注.相对于传统细胞工厂,这种光合真核微生物在生产高附加值蛋白方面具有众多潜在优势,包括具备准确折叠和组装复杂蛋白的能力、规模化培养时间短、生物安全性高和生产成本低廉等.目前,利用莱茵衣藻叶绿体基因组和核基因组已成功表达了多种重组蛋白,如蛋白亚基疫苗、单链抗体、蛋白细胞因子、蛋白(肽)类激素和工业养殖业用酶等,初步证实了莱茵衣藻作为绿色细胞工厂方面的实用性.本文阐释了莱茵衣藻作为绿色细胞工厂生产高附加值重组蛋白的优势和目前已取得成就的典型案例,并对今后需要克服的困难进行了讨论.     

弓形虫SAG1,ROP1基因及其复合抗原基因的核酸免疫研究

目的 检测混合SAG1和ROP1编码基因真核表达质粒疫苗诱导小鼠的免疫应答,评价其抗弓形虫感染的保护性免疫效果.方法 将SAG1和编码基因片段克隆入pEGFP-N3表达载体,构建重组质粒;RT-PCR体外验证重组质粒在NH3T3细胞中的表达;通过检测抗体、抗体分型及细胞因子来评价体液免疫和细胞免疫;腹腔内注射毒性株弓形虫速殖子攻击免疫小鼠.结果 RT-PCR结果显示重组质粒能在哺乳动物细胞内表达;SAG1和ROP1混合重组质粒疫苗诱导小鼠产生很强的体液免疫和细胞免疫,对于毒性株弓形虫感染攻击具有保护作用.结论 不同候选抗原编码基因重组质粒能够诱导小鼠产生抗弓形虫感染保护性免疫,提示含有多种成分的混合DNA疫苗的研制可作为核酸免疫研究的策略之一.     

重组人源性抗HBsAg Fab抗体的特性分析

通过噬菌体展示技术从含高滴度抗乙肝表面抗原(HBsAg)抗体的人外周血淋巴细胞获得抗HBsAg Fab抗体的轻、重链基因．将Fab的轻、重链基因分别整合到巴斯德毕赤酵母(Pichua pastons)GS115菌株的染色体上，成功构建了高效分泌表达抗HBsAg Fab抗体的酵母工程菌．对酵母表达的重组Fab抗体进行了纯化，并对其相对分子质量、糖基化以及抗原结合能力等特性进行了分析，结果显示重组酵母分泌表达的重组人源性抗HBsAg Fab是一个相对分子质量为50000左右的低糖基化糖蛋白，1mg重组Fab抗体相当于40u的抗乙肝表面抗原抗体(20U／mg)．表明重组Fab抗体具有较强的结合HBsAg的能力．     

汉滩病毒嵌合基因 G150.7 重组腺病毒免疫学特性研究

对本室已构建的汉滩病毒糖蛋白(GP)和核蛋白(NP)的嵌合基因GlS0.7重组腺病毒的免疫学特性进行研究.将汉滩病毒含有G1S0.7嵌合基因的重组腺病毒直接免疫Balb/c小鼠,用ELISA、微量细胞培养中和实验及淋巴细胞增殖实验检测小鼠的免疫应答效果.用该重组腺病毒免疫的小鼠,可诱导产生抗汉滩病毒NP及GP特异性的抗体,抗体效价分别为1:320及1:40.同时重组腺病毒还可刺激机体产生低水平的中和抗体和明确的淋巴细胞增殖反应.说明所构建的汉滩病毒嵌合基因G150.7重组腺病毒,可同时刺激机体产生特异性的抗汉滩病毒体液免疫应答及细胞免疫应答.     

大肠杆菌K88ac-ST1-LTB融合蛋白多价卵黄抗体的制备

对已构建的重组菌株BL21(DE3)(pETXKSL3)进行鉴定,酶切鉴定证实重组质粒pETXKSL3含有K88ac-ST_1-LT_B融合基因且阅读框架正确.Western blot分析表明K88ac-ST_1-LT_B融合蛋白能够被ST_1单抗、K88ac和LT_B抗体识别.以K88ac-ST_1-LT_B融合蛋白为抗原免疫蛋鸡制备卵黄抗体,ELISA法测定卵黄抗体效价可达1∶13 200.仔猪攻毒实验表明制备的卵黄抗体对仔猪黄痢和仔猪白痢的预防有效率为96%,上述研究结果说明K88ac-ST_1-LT_B多价卵黄抗体对由ETEC引起的新生仔猪腹泻具有很好的预防效果,从而为最终开发出一种新型高效、可替代抗生素的防治新生仔猪大肠杆菌性腹泻的特异性卵黄抗体生物防治制剂打下坚实基础.     

杀鲑气单胞菌溶血素和菌毛蛋白的重组表达及其免疫保护效果研究

为探究杀鲑气单胞菌溶血素和菌毛蛋白能否作为亚单位疫苗候选抗原,本研究针对前期分离的杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种(Aeromonas salmonicida subsp.masoucida, ASM),利用原核表达系统对其进行重组表达,免疫虹鳟后检测其免疫保护效果与诱导的免疫应答特征。Western-blotting结果显示,虹鳟抗灭活ASM血清可与2种重组蛋白发生阳性反应,说明其具有较好的免疫原性。免疫保护实验结果显示,重组溶血素、重组菌毛蛋白及两者混合物免疫对虹鳟的相对免疫保护率(Relative Percentage Survival, RPS)分别为64.6%、37.5%和75.0%;ELISA检测发现,重组溶血素和重组菌毛蛋白单独免疫以及两者混合免疫均能有效诱导虹鳟产生抗各抗原的特异性抗体,在免疫2周后特异性抗体水平均显著高于对照组(P0.05),其中混合免疫组虹鳟血清中抗重组溶血素抗体水平显著高于重组溶血素单独免疫组,但其诱导产生的抗重组菌毛蛋白抗体水平与重组菌毛蛋白单独免疫组无显著性差异;荧光定量PCR检测结果显示,3个免疫组中IL-6、IL-8、TCR及CD4基因的表达水平均显著高于PBS对照组,其中重组溶血素与重组菌毛蛋白共免疫组中IL-6、CD4、MHC-Ⅱ及IgM基因表达水平显著高于其他免疫组。研究结果表明,重组溶血素对虹鳟具有较好的免疫保护效果,且提示重组菌毛蛋白具有开发成为佐剂分子的潜在价值,该结果可为杀鲑气单胞菌亚单位疫苗的研制及应用提供了重要参考。     

一种有效解决混合基矩量法积分奇异性的方法

三维散射问题通常采用电场积分方程(EFIE)结合矩量法(MOM)来求解,为了消除基于双线形4边形的混合域基函数在伽列金-矩量法的应用中所出现的积分奇异性,采用了参数坐标变换、相对坐标变换和奇异值提取相结合的技术,有效地消除了被积函数中出现的奇异性,并降低了原4维奇异性积分的维数,实例计算结果表明,该处理方法是正确和有效的。     

CDMA蜂窝网无线定位技术测试与研究

通过对检测移动台信号到达2个基站的时间差实现CDMA蜂窝网中移动台定位的方法研究，对该定位技术进行了实际测试，分析了造成蜂窝网络中无线定位误差的原因，提出了实际情况下实现该项技术必须考虑的因素，通过验证，达到了较高的定位精度。     

煤矿电机车计算机模糊控制系统

采用具有动态响应特性好的模糊控制方法，设计出了根据矿井井底采区煤仓煤量的多少来对煤矿电机车进行自动控制的计算机模糊控制系统。文章详细介绍了煤矿电机车计算机模糊控制系统的控制原理、模糊控制器的设计及控制系统的设计。实际应用表明，模糊控制方法是一种先进的、非常适合于对煤矿电机车系统进行自动控制的方法。     

利用双线性对构建基于身份的指定验证者签名方案

在一般的数字签名中,任何拥有签名者公钥的人,都可以验证该签名的有效性.但这种性质,在签名者想要保护其隐私性的情况下,是该签名者所不期望的.指定验证者签名概念的提出,能很好解决这种情况下的问题,而基于身份技术的使用,又能对公钥授权机构的密钥分发问题加以很好的解决.利用双线性对可实现密码学上基于身份的签名应用.就基于身份的指定验证者签名方案进行研究,利用双线性知识,参照前人的指定验证者签名方案,在系统设置阶段增加一个单向的无碰撞Hash函数,在签名阶段选取一个参数,在签名和验证阶段应用系统初设阶段所定义的Hash函数构造本方案.并对方案在可验证性、安全性及性能做了相应分析.     

初探水文监测中雨量数据采集仪的使用

通过对JD2-1型雨量数据采集仪的安装调试及近5年的观测使用，对该仪器的构造、功能、原理、使用方法及使用过程中存在的问题进行了分析，就本地区在使用中出现的实际问题。提出几点建议。     

Wavelets in probability and statistics——A review in recent advances

The main purpose of this paper is to give a review on recent advances of wavelet in probability and statistics. Many interesting new ideas, new results and new methods are introduced in this review. From many aspects of this paper, probability and statistics researchers may rind many new interesting research topics for further studying on wavelets in stochastic processes. New results, such as K- stationarity, wavelet representation of Karhunen processes,hidden periodicities analysis by wavelet approach, heteroscedasticity in wavelet regression, wavelets and neural networks, etc. are introduced in this paper. Comments, discussions and plentiful references are also involved in this review.``     

最小相位系统MRAS的工程设计法

本文给出适用于所有最小相位系统为被控对象的MRAS的简化工程设计方法,对于解决一般工程控制问题具有普遍意义.作为本方法的理论依据,文中给出一条定理及其数学证明.定理表明使用该方法设计的MRAS满足渐近超稳定性条件.文中还讨论了该方法的应用情况,从而论证了该方法的合理性和可行性.     

湖南西部地区保险市场状况及发展对策

在概述湖南西部保险市场发展环境基础上,从市场供给主体、保费收入及增长速度、市场份额、保险深度和保险密度、保险产品结构等方面分析了湖南西部保险市场发展的现状,探讨了其存在的问题,并提出了湖南西部保险业发展的对策.     

一类新的带(H,η)-单调映象的广义非线性模糊集值变分包含

在Hilbert空间中,引入和研究了一类新的带(H,η)-单调映象的广义非线性模糊集值变分包含,并对这类变分包含建立了新的寻求解的迭代算法,证明了迭代序列的收敛性.     

山西省疾病预防控制档案资源共享的现状与对策

随着广大人民群众物质文化生活的普遍提高，对预防疾病，提高健康水平的关注日益增强。面对疾病预防控制档案资源共享的现状和问题，从服务大众，服务基层的角度来阐述疾病预防控制档案的资源共享是必然趋势，同时提出实现疾病预防控制档案资源共享的对策。