酿酒酵母蛋白激酶Sch9的PDK1位点调控C末端磷酸化状态

利用酿酒酵母蛋白激酶Sch9(哺乳动物p70S6k1的同源物)PDK1和PDK2位点点突变的两种突变体,分别进行生长、寿命表型检测及免疫印迹分析实验,发现PDK1位点的磷酸化水平对于Sch9活性起着主导性作用,并且PDK1位点发生去磷酸化会促进C末端高度磷酸化,而PDK1发生磷酸化会抑制C末端的磷酸化.由此说明Sch9上PDK1和PDK2位点是否发生磷酸化除了受到各自上游激酶的调节外,两者之间还存在着一种负调控机制.     

葱蝇PDK1基因的克隆及生物信息学分析

3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(3-phosphoinositide-dependent protein kinase 1,PDK1)是磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol-3kinase,PI3K)/蛋白激酶B(PKB/Akt)信号通路中一个关键的激酶。该通路在人(Homo sapiens)、黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)、秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)中是一条保守的通路,通过激活下游的因子对代谢、细胞分化、寿命等产生重要调节作用。本研究基于葱蝇(Delia antiqua)转录组数据通过生物信息学分析从其中鉴定出PDK1基因4条Unigene序列,并通过PCR技术克隆了PDK1基因的全长cDNA,命名为DaPDK1,其全长为3 215bp,开放阅读框长2 730bp,编码909个氨基酸。采用生物信息学的方法,推测该基因编码的蛋白质相对分子质量为100.3kD,等电点为8.53。该蛋白第87~109氨基酸是跨膜区,第284~627和744~833氨基酸是两个保守结构域STKc和PH。同源性分析表明DaPDK1蛋白与地中海实蝇(Ceratitis capitata)PDK1蛋白氨基酸序列相似性最高(一致率为53.1%,相似率为63.2%)。本研究结果有望为进一步研究葱蝇PI3K/Akt信号通路中PDK1基因的特性及功能奠定基础。     

葱蝇PDK1基因的克隆及生物信息学分析

3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(3-phosphoinositide-dependent protein kinase1,PDK1)是磷脂酰肌醇3-激酶(Phos-phatidylinositol-3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(PKB/Akt)信号通路中一个关键的激酶。该通路在人(Homo sapiens)、黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)、秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)中是一条保守的通路,通过激活下游的因子对代谢、细胞分化、寿命等产生重要调节作用。本研究基于葱蝇(Delia antiqua)转录组数据通过生物信息学分析从其中鉴定出PDK1基因4条Unigene序列,并通过PCR技术克隆了PDK1基因的全长cDNA,命名为DaPDK1,其全长为3215bp,开放阅读框长2730bp,编码909个氨基酸。采用生物信息学的方法,推测该基因编码的蛋白质相对分子质量为100.3kD,等电点为8.53。该蛋白第87~109氨基酸是跨膜区,第284~627和744~833氨基酸是两个保守结构域STKc和PH。同源性分析表明DaPDK1蛋白与地中海实蝇(Ceratitis capitata)PDK1蛋白氨基酸序列相似性最高(一致率为53.1%,相似率为63.2%)。本研究结果有望为进一步研究葱蝇PI3K/Akt信号通路中PDK1基因的特性及功能奠定基础。
     

FgPDK1调控禾谷镰孢菌响应渗透胁迫研究

真菌为了应对渗透胁迫进化出包括高渗甘油途径(high osmolarity glycerol,HOG)在内的一系列调控网络,但其上游信号调控因子尚不明确.本文以禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)为研究对象,在盐胁迫下通过遗传学和生理生化手段,研究了一个关键的线粒体能量代谢酶基因丙酮酸脱氢酶激酶(Fg PDK1)在调控渗透胁迫方面的重要作用.结果显示,(1)菌丝生长测定结果表明Fg PDK1敲除突变体(ΔFg PDK1)对盐胁迫的敏感性较野生型(PH-1)显著增加;(2)与PH-1相比较,盐胁迫下ΔFg PDK1表现出更为严重的电解质外渗和更高的胞内甘油累计量;(3)盐胁迫下ΔFg PDK1菌丝的活性氧(ROS)累计量、丙二醛含量、细胞死亡量都比PH-1显著增加;(4)盐胁迫下ΔFg PDK1菌丝的抗氧化酶基因(SOD和CAT)表达量显著低于PH-1;(5)上述生理生化表现在Fg PDK1功能恢复菌株(ΔFg PDK1-C)均可恢复到野生型水平.这些结果表明F.graminearum可能通过Fg PDK1调控HOG下游途径并维持抗氧化能力来应对高渗透胁迫.本研究为解析真菌适应渗透胁迫的分子调控机制提供了新证据.     

p70S6K结构与功能研究进展

p70核糖体蛋白S6激酶（p70S6K)是mTOR的主要下游作用靶物,在翻译起始、蛋白合成、细胞周期、细胞迁移等方面具有重要作用。本文综述了p70S6K的结构和功能,这对于了解p70S6K以及其调控的相关信号通路分子具有重要意义。     

Sch9通过Cdc34调控酵母细胞的寿命和胁迫应答

为研究Sch9激酶的生理功能,本文首先通过同步细胞周期的方法发现Sch9的PDK1位点的磷酸化随细胞周期变化.接下来在酵母中过表达Cdc34显示Cdc34的组成性表达可以进一步延长s ch9△突变体的寿命并且增强其对氧化胁迫及热胁迫的抗性.我们的研究结果首次表明Cdc34作为Sch9的底物参与细胞胁迫应答和衰老的调控.     

酵母(Saccharomyces cerevisiae)Sch9蛋白激酶PDK1位点体内磷酸化的研究

根据Sch9氨基酸序列中激活区570位苏氨酸（T570）位点，也被称为PDK1位点附近的氨基酸序列设计了一段磷酸化多肽，并获得了570位磷酸化苏氨酸特异性抗体. 实验表明该抗体可有效区别Sch9 PDK1位点的磷酸化和非磷酸化. 使用该抗体检测生理条件下表达的Sch9蛋白，发现Sch9的PDK1位点在生理条件下发生了明显的磷酸化.     

己糖激酶与肿瘤的生物学特征

目的阐述己糖激酶与肿瘤的生物学特征的密切联系,为进一步研究提供依据.方法查阅国内外研究资料并汇总分析.结果己糖激酶作为糖酵解的限速酶,有4 种同工酶,其异常表达不仅与肿瘤的能量代谢异常有关,而且与肿瘤细胞增殖、细胞调亡及基因突变等多种生物学特征有密切关联,是影响肿瘤生物学特征的一个重要的代谢酶.结论进一步探索己糖激酶的肿瘤生物学特征对肿瘤研究具有重要意义.     

精氨酸激酶及其底物复合物的结晶和结晶学初步研究

精氨酸激酶是一种存在于无脊椎动物体内的磷酸源激酶,对于无脊椎动物体内能量的代谢、储存和利用具有至关重要的作用.海参体内的精氨酸激酶在磷酸源激酶的进化中具有特殊的地位,氨基酸序列比对的结果表明:它与鲎源单亚基精氨酸激酶的氨基酸序列的同源性为64%,而与双亚基兔肌肌酸激酶的氨基酸序列同源性却达到了75%.为了揭示海参源精氨酸激酶的催化机理,研究其与单亚基精氨酸激酶及肌酸激酶催化机理的异同,实验获得了精氨酸激酶复合物晶体,取得了X射线衍射数据,进行了结晶和结晶学的初步研究.     

KRAS下游信号通路在胰腺癌研究中的新进展

胰腺导管腺癌是目前已知的恶性度最高的肿瘤之一。大多数情况下,胰腺导管腺癌由KRAS基因突变诱发。迄今为止,临床上试图直接改变KRAS基因状态的尝试均无效果,因此明确KRAS突变介导的下游治疗靶点刻不容缓。然而在胰腺肿瘤发生的过程中,KRAS通路的激活及调节过程十分复杂、多样,具有环境和器官的特异性。其中,PI3K/PDK1/AKT和RAF/MEK/ERK是最主要的KRAS下游信号转导通路。该研究综述了关于KRAS信号通路的最新进展,并讨论这些进展对于改善胰腺癌治疗的可能性。     

基于数字电视条件接收的视频水印算法

提出了一种视频水印算法,算法将数字电视条件接收系统中的个人分发密钥(PDK)作为惟一标志用户身份的信息,经过Reed-Solomon编码和交织后生成数字水印;同时,用户的接收端对接收到的视频流依次进行解密、可变长解码和逆扫描操作,再将水印嵌入到数字电视I帧亮度信号的8×8离散余弦变换(DCT)量化系数矩阵的中频系数中;对提取出的数字水印做Reed-Solomon解码和解交织即可获得嵌入的PDK,然后根据这个PDK可以知道非法用户的身份,进行了计算机仿真实验,实验表明此算法是可行的.     

纳豆激酶液体发酵条件的优化和调控

1987年日本学者须见洋行首先在日本传统食品纳豆中发现一种具有高效溶栓活性的酶,并将其命名为纳豆激酶（简称NK）。纳豆激酶可以降低血液中的脂肪和胆固醇,可以溶解血栓、净化血液。更重要的是,纳豆激酶等活性能物质可以渗透到毛细血管发挥作用,调节微循环,因而有祛斑美容、治疗顽固性过敏引起的皮肤病的效果。目前已经掀起了开发以纳豆激酶为主要原料的保健品热潮。本文通过对纳豆激酶液态发酵条件进行优化,改善发酵条件,在提高NK产量的同时,降低了生产成本,为工业化生产奠定了基础。     

一类级联系统区域极点配置问题

对于线性系统,极点配置是一个重要的问题。对于具有特殊结构的线性系统,如何配置极点是一个有意义的课题[1-2],本文对具有递阶互联项的级联系统区域极点配置问题进行研究。对三级     

己糖激酶冻干粉的制备工艺及其酶学性质

为将发酵制备的液态己糖激酶制备成粉剂,应用于诊断试剂领域,对己糖激酶冻干保护剂进行了筛选优化;并对制得的己糖激酶干粉的酶学性质进行了研究。通过单因素试验、Plackett-Burman设计和最陡爬坡试验,以响应面分析确定其最优保护剂种类复配比例。结果表明:冻干保护剂选取蔗糖、乳糖和山梨醇效果最佳;且最优比为蔗糖4. 5%、乳糖2. 0%、山梨醇8. 0%,平均酶活保存率为78. 1%。己糖激酶干粉的最适反应温度为50℃;在45℃高温处理30 min后,仍具有60%的活力;最适反应p H为8. 0,在p H 6. 0～10. 0范围内具有较好的稳定性;为己糖激酶制剂在诊断试剂领域的应用奠定了基础。     

有丝分裂激酶抑制剂研究

有丝分裂激酶在有丝分裂的各个阶段及其检测点担任着各种重要的调控作用,因此这些激酶都作为细胞周期发生和检测的标志.通常在肿瘤细胞中这些激酶都会过表达,所以现在抗肿瘤药物研究中这些激酶往往都会成为重要靶点.目前许多抗肿瘤药物的研究都集中在有丝分裂激酶的抑制剂上,其中部分抑制剂已经进入临床实验的研究阶段.根据已发表的有丝分裂中关键激酶及其抑制剂的文献,就3类主要的有丝分裂激酶—Pololike激酶(PLKs)、Aurora激酶和Cyclin-dependent激酶(CDKs)及其抑制剂研究现状进行综述,为今后有丝分裂激酶抑制剂的研究总结思路.     

关于高职院校《职业生涯规划》课程建设的思考

职业生涯规划对于学生提升就业竞争力、实现个人价值具有很好的助推作用，如何开展和建设好职业生涯规划课程对于高职院校的生存和发展具有重要意义。     

金属离子对异柠檬酸脱氢酶激酶/磷酸酶(AceK)活性的影响

AceK是具有激酶与磷酸酶活性的双功能酶。本文研究了金属离子Mg~(2+)、Fe~(2+)、Ni~(2+)、Zn~(2+)对AceK激酶活性及磷酸酶活性的影响。实验表明Mg~(2+)是AceK激酶与磷酸酶激活剂,对激酶最佳激活浓度为2mmol·L~(-1),磷酸酶为5mmol·L~(-1)。但Fe~(2+)、Ni~(2+)、Zn~(2+)单独存在时,对AceK激酶、磷酸酶活性均没有明显作用,反而能较强地抑制Mg~(2+)激活的AceK酶活性,对激酶抑制作用由强到弱为Zn~(2+)、Ni~(2+)、Fe~(2+),对磷酸酶抑制作用由强到弱为Ni~(2+)、Fe~(2+)、Zn~(2+)。研究内容和结果为进一步研究AceK催化机制和结构功能打下了一定的基础。     

纳豆激酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

纳豆激酶是一种良好的天然蛋白酶类溶栓物质。国内外许多学者对该酶进行了基因工程研究,但在克隆表达过程中出现了许多长短不同的基因片段。本研究通过原产日本的优质纳豆中分离鉴定出高产纳豆杆菌N07并提取该菌株的全基因组;通过PCR手段扩增出能编码纳豆激酶信号肽,前导肽和成熟肽的前纳豆激酶酶原基因NK1,以及能编码纳豆激酶成熟肽的纳豆激酶基因NK2,构建了纳豆激酶基因的表达载体pET30a-NK1和pET30a-NK2,转化E.coli BL21后在大肠杆菌中表达,并进行了活性分析。结果发现,纳豆激酶酶原基因片段NK1能成功表达出有活性的分泌型纳豆激酶;而纳豆激酶基因片段NK2的表达产物为无活性的包涵体。在对NK1和NK2的比较研究后可知,纳豆激酶酶原基因片段NK1能在大肠杆菌中很好的分泌表达,这将为纳豆激酶基因工程的深入研究奠定基础。     

市政排水管道施工问题探讨

随着城市建设的健康发展,城市道路排水设施对于一个城市的面貌也具有越来越重要的意义,排水管道的成功铺设,对于城市规划建设、城市道路污水处理,保证城市环境质量具有重要的现实意义,本文通过自身的工作经验对于排水管道施工中的问题和处理方式予以阐述,仅供同行参考。     

新型TRK激酶小分子抑制剂的筛选与验证

原肌球蛋白相关激酶(Tropomyosin-Related Kinase,TRK)属于受体酪氨酸激酶家族,具有调节细胞增殖、分化、凋亡、代谢等作用.在多种肿瘤细胞中发现TRK激酶编码基因NTRK的融合现象,TRK蛋白过表达或激酶活性组成性激活促进了肿瘤的发生发展.以TRK激酶为靶标的小分子抑制剂正处于研发之中,如Entrectinib等.本研究以Entrectinib为阳性对照,从小分子化合物库中筛选得到Crizotinib、LY2874455等7个新颖的TRK激酶小分子抑制剂,结构计算提示Dovitinib等4个化合物均属于ATP竞争性抑制剂.在NTRK1基因融合的KM12细胞体外增殖实验中,全部的TRK激酶抑制剂均能抑制细胞增殖,且LY2874455最为显著.在细胞的联合用药实验中,发现Crizotinib与Entrectinib的联用具有协同作用.