重组毕赤酵母AiiA蛋白表达量的双抗体夹心ELISA测定

利用双抗体夹心ELISA的方法,建立了能对重组毕赤酵母表达Aii A蛋白进行定量测定的方法.双抗体夹心ELISA方法建立的标准Aii A蛋白曲线显示,随着Aii A蛋白质量浓度增大,显色后A410值增大,在Aii A质量浓度为1.11~35.5μg·m L-1的范围内具有良好的线性关系.经方法学分析表明,该方法对含有Aii A蛋白的发酵样品的检测具有良好的特异性和精确度,Aii A的检测限为0.80μg·m L-1,批内差异系数和批间差异系数分别为5.22%和10.30%.测定8.86,2.22,1.11μg·m L-13个质量浓度回收率分别为104%、97.3%和102%,能够满足定量要求.     

ELISA检测姜片虫病患者抗体的研究

研究了姜片吸虫成虫冷浸抗原检测姜片吸虫病患者血清抗体的敏感性和特异性及其在流行病和临床上的应用价值．超声粉碎制备姜片吸虫成虫冷浸抗原．以评价ELISA法检测姜片虫病血清抗体的敏感性、特异性和交叉反应性．按常规ELISA方法操作,目视与酶标仪判断结果．普查2189人中姜片吸虫卵阳性者168例;168例中165例ELISA阳性,ELISA与改良加藤法的阳性符合率98．21％;健康居民血清147份,阳性6份,阳性率4．08％;与血吸虫病交叉阳性为9．38％,肺吸虫病交叉阳性为5．36％．姜片吸虫成虫冷浸抗原1：3500工作浓度包被酶标板,检测姜片虫病血清抗体具有敏感性高、特异强和交叉反应率低的特点．     

南昌地区婴幼儿轮状病毒急性胃肠炎的流行病学调查

本文报告了应用ELISA的方法检测了1984—1987年元月临床诊断为急性胃肠炎的婴幼儿粪便标本243份,轮状病毒(RV)抗原阳性率1984年为53.8％1985年为15.58％,1986年为48.33％,1984年的标本同时进行了轮状病毒RNA基因分析,两法符合率为71.56％。1985年分别与1986年和1984年比较,P值小于0.01。证实1984年和1986年在南南地区秋冬季出现了RV流行、并形成了高峰,而且后者比前者流行高峰提前了二个月。1985年6-8月份中均有RV引起的病例,但未形成流行高峰。在年令分布上1984年和1986年3岁以内无显著区别,而1985年1—3岁患儿RV阳性率显著高于1岁以内患儿。     

ELISA和PCR法在研究乙肝病毒传播途径中的应用

应用HBV表面抗原酶标试剂盒和诊断HBVDNA的PCR试剂盒分别检测可能污染有HBV的不同来源标本30份，结果ELISA法检出HBsAg阳性5例，检出率16．7％；PCR法检出HBVDNA阳性12例，检出率40％，明显高于ELISA法，提示应用PCR技术探讨乙肝病毒传播途径似乎效果更好。     

花椰菜天然钙调素抗体的特性及其ELISA定量法的建立

钙调素是一种具有多种调节功能的钙结合蛋白质，其免疫原性很弱，本文采用两次基础免疫和多次加强免疫的方法，获得了免疫花椰菜天然钙调素抗血清，用免疫双扩散法鉴定，其效价为１：３２钙调节不易与固相载体结合，我们先用０．２％戊二醛处理聚苯乙烯板载体，再用于包被钙调素，在上述基础上建立了定量测定植物钙调素的竞争性酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）技术及检测动物血清中抗钙调素抗体的间接ＥＬＩＳＡ技术。     

不同小鼠肝炎病毒对ELISA方法检测其血清抗体的影响

目的 建立小鼠肝炎病毒（Mouse Hepatitis Virus,MHV）血清抗体ELISA检测方法,用于本地区MHV的日常监测,以便对SPF小鼠感染状况及时作出判断。方法 选取3种MHV毒株MHV1、MHV-JHM和MHV-A59,通过L929细胞扩增培养获得纯化浓缩抗原并筛选适合包被抗原类型;免疫BALB/C小鼠,获得高效价免疫阳性血清;优化ELISA反应体系建立规范化的ELISA试剂盒并用于临床小鼠血清样品的检测。结果 筛选出适合本地区的MHV包被抗原类型为MHV1,建立了病毒扩增及浓缩纯化方法,制备的MHV抗血清达到同批次大量高滴度的水平,可作为标准化质控血清。包被抗原、待检血清和酶结合物最佳工作浓度分别为4. 0μg/m L (10 -7. 73 /0. 1 m L TCID50)、1∶40和1∶4 000稀释;批次内和批次间平均变异系数分别为5. 13%和5. 57%;检测灵敏度为1∶4 000稀释;与小鼠仙台病毒（SV）、小鼠肺炎病毒（PVM）、呼肠孤病毒III型（Reo3）、小鼠细小病毒（MVM）和鼠痘病毒（Ect）阳性血清均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于10%。对165份血清样品进行检测,阳性血清相符率97. 37%（37/38）,阴性血清相符率92. 19%（118/127）。结论 本研究建立的ELISA方法检测小鼠血清MHV抗体具有较高的特异性、敏感性和结果可重复性,可以用于本地区MHV日常病原学监测,以便对小鼠感染状况作出准确判断。     

血清灭活法对消除ELISA假阳性结果的比较研究

目的建立一种简便、易行的方法,对酶联免疫吸附试验的结果进行质量控制。方法依据国标ELISA方法对578份小鼠血清进行11种病毒抗体检测,共检测抗体3677份。对初步检测出的242份抗体阳性血清,经56℃30min水浴灭活处理后进行复检。结果可疑阳性血清经灭活处理后复检,正常抗原孔A值和特异抗原孔A值明显低于初检的正常、特异抗原孔A值,差异显著(P<0.05);初检和复检的特异抗原孔A值与正常抗原孔A值的比值有显著性差异(P<0.05);血清灭活前后阳性率有显著性差异(P<0.01),分别为6.58%和2.86%。阳性对照灭活前后A值无显著差异(P>0.05)。结论血清经灭活处理后,使检测结果的假阳性率显著降低。     

抗弓形虫IgY抗体在酶免疫试验中的应用

IgY是从鸡蛋黄中提取的免疫球蛋白,不但具有高免疫活性,而且不受类风湿因子、血清补体等干扰,在免疫学试验中具有优越性。用纯化的弓形虫虫体抗原免疫白菜杭鸡获得特异性的IgY抗体,用辣根过氧化物酶标记后与抗人IgM单抗配伍建立捕获法酶免疫试验,与同类试剂对照,平行检测192份临床血样,检测结果二者吻合,表明该IgY具有良好的特异性和敏感性。     

ELISA双抗体夹心法检测鸡传染性腺胃炎

为探明鸡传染性腺胃炎的主要病原种类,采用ELISA双抗体夹心法对山东省青岛、枣庄、泰安等地区采集的传染性腺胃炎的腺胃样品进行检测。结果表明,上述地区发生的传染性腺胃炎的病原体为呼肠孤病毒。     

双抗原夹心ELISA检测抗鳗弧菌抗体效价的研究

建立检测抗鳗孤菌抗体效价的双抗原夹心ELISA法,评价其可行性。采用高碘酸盐法对鳗孤菌抗原进行辣根过氧化物酶标记,并通过血清抗体效价比较双抗原夹心ELISA与微量凝集法的优越性。结果显示：标记蛋白含量为2．5mg的抗原所需HRP的最适量为0．20rag。以超声破碎后鳗弧菌离心上清为最适标记抗原,其工作浓度为12．25mg／L．并且双抗原夹心ELISA操作简易具有较高的敏感性和特异性。     

滤纸片微量末梢全血ELISA法检测HBsAg的评价

为了提高HBsAg检测的敏感性和免去小儿(尤其新生儿)静脉采血的困难与分离血清的麻烦,本文研究了用指尖血滴滤纸片检出HBsAg的方法,并对其实用价值进行评价。应用第三代检测方法——ELISA(酶标双抗体夹心法),将吸附在滤纸片上约20μl的指尖全血检出HBsAg,共检测标本205份,结果发现:全血滤纸片ELISA法虽较静脉血分离血清所得阳性率(61.46％)为低,但其阳性率(28.29％)仍明显高于用对流免疫电泳法静脉血分离血清(ClEP)的阳性率(12.68％),P<0.005。作者认为滤纸片法还有下列优点:(1)无需静脉抽血及分离血清,老幼咸宜,对新生儿更好。(2)一次可采大量检测对象,用品简单。(3)便于保存及携带,有利于大规模调查。(4)不需复杂仪器,如果将血滴量适当加大,操作细节加以改进,定能提高其检出阳性率,因而值得推广。     

胭脂红酸ELISA检测试剂盒的制备及应用

为了快速高效检测肉类食品中胭脂红酸含量,制备了胭脂红酸ELISA检测试剂盒,检测了市售肉类样品中胭脂红酸含量,并通过高效液相色谱法进行了验证。结果显示试剂盒的检测限为1 ng/mL,线性范围7. 8～1 150 ng/mL,灵敏度IC50值为95. 2 ng/mL;该试剂盒中的检测抗体对胭脂红的交叉反应率为108. 7%,但与其他4种色素添加剂均未见交叉反应。检测市售肉类样品的批内回收率在79. 1%～103. 1%之间,批间回收率在81. 6%～98. 8%之间;批内、批间试验的相对标准偏差基本小于10%,且与HPLC方法具有良好的一致性(R2=0. 927),说明该试剂盒具有灵敏、准确、简便、快速的特点,为胭脂红酸免疫学快速检测方法的建立提供了技术基础。     

比色时间对ELISA结果判读的影响

目的:探讨比色时间对酶联免疫吸附试验(ELISA)结果判读的影响.方法:用酶免试剂盒对HBsAg阳性标本40份和高值阴性(其OD值在0.8×cutoff～cutoff之间)标本6份进行检测.加终止液后用双波长(450nm/630nm)在不同时间段读取各孔OD值.结果:比色时间延迟10min后,各时间段与第一次相比,结果有明显变化.部分高值阴性标本出现了假性检出.结论:比色时间对ELISA的检测结果影响明显,应对其作有效限定.     

叠氮钠（NaN3）对ELISA检测酶活影响的探讨

用抗促黄体激素(LH)单克隆抗体为试样,进行了叠氮钠(NaN_3)在ELISA检测中影响辣根过氧化物酶(HRP)活性的研究。实验结果表明,当酶标二抗工作液中不舍NaN_3时,含0.02％NaN_3的ODP底物工作液能将其中的HRP全部失活;而当底物工作液中不舍NaN_3时,含0.02％NaN_3的酶标二抗工作液中的HRP有30％～60％失活。提出在以HRP作为标记酶的ELISA检测所用的部分缓冲液中废止使用NaN_3作为防腐剂。     

抗体夹心酶联免疫吸附法测定鸡白细胞介素-2

利用抗鸡白细胞介素-2（ChIL-2）单克隆抗体作包被抗体、生物素标记的抗ChIL-2多克隆抗体作检测抗体建立了一个抗体夹心酶联免疫吸附测定系统．此系统对鸡白细胞介素乏的检测灵敏度为50pg／mL．两种抗体与鸡干扰素-α和人白细胞介素-2等细胞因子不产生任何非特异性反应．以不同种类的促有丝分裂剂或鸡病毒刺激鸡淋巴细胞，培养液中分泌产生的天然鸡白细胞介素-2的量用此系统检出．在促有丝分裂剂中，植物血凝素（PHA）导致ChIL-2的产生量最高；在病毒方面，传染性法氏囊病毒最能促使ChIL-2的分泌．本研究建立的抗体夹心酶联免疫吸附测定系统为我们以定量方式测定鸡白细胞介素-2提供了一个灵敏度高、特异性好的工具．     

重组碱性成纤维细胞生长因子ELISA检测方法的建立

小鼠或家克经重组bFGF免疫后产生高滴度的抗血清,用此血清建立了间接ELISA检测方法,检测bFGF的灵敏度达10ng/ml.     

浅谈禽病ELISA操作技术

在疾病监控方面,酶联免疫吸附试验(ELISA)技术是应用最为广泛的血清学检测技术,禽病ELISA抗体检测试剂已经大量应用到SPF鸡微生物学监测中。ELISA不仅操作技术上有一定的要求,而且影响因素也较多,如不注意有可能导致试验结果不准确。因此,将禽病检测过程中,ELISA操作各环节需注意的问题归纳总结,与各位同仁一起交流学习。     

SARS患者、疑似病例及正常人群SARS病毒抗体的检测和追踪

目的了解广州地区各类人群的SARS病毒抗体的检出情况及SARS患者抗体产生的规律.方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)对各类人群的血清进行SARS病毒抗体的检测,并对45例SARS患者追踪一年半.结论SARS病毒IgM抗体消失较早,发病60天后检测不到,是近期感染的标志.IgG持续时间较长,一年半仍维持较高的水平,是近期或曾经感染的标志.暂未发现母婴垂直传播病例.医院的SARS感染率远高于正常人群,且可能存在隐性感染.     

用ELISA法测定SPA与多种动物IgG的结合特性

应用酶联免疫吸附试验对兔、大鼠、小鼠、小牛、绵羊、鲫鱼、鸭、蟾蜍和黄鳝9种动物血清IgG与SPA的结合特性进行了研究。酶标SPA浓度梯度,IgG包被浓度梯度及特异性自体和异体IgG阻断试验的结果表明:兔、大鼠、小鼠、小牛、绵羊及鲫鱼的IgG能与A蛋白结合,而鸭、蟾蜍及黄鳝的IgG不能与A蛋白结合。这些结果对进一步用葡萄球菌A蛋白作免疫测定和纯化IgG具有实用意义。     

高迁移组染色体蛋白-17的分离提取及其抗体ELISA测定方法的建立

纯化高迁移组染色体蛋白－１７（ＨＭＧ－１７）,建立检测抗ＨＭＧ－１７自身抗体的ＥＬＩＳＡ方法,探讨抗ＨＭＧ－１７抗体与临床疾病的关系。用水煮沸法提取,甲酸－吡啶缓冲液酸化和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０凝胶过滤技术,自小牛胸腺组织中分离ＨＭＧ－１７,用此纯化物包被,方阵滴定,建立测定抗ＨＭＧ－１７抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法,并进行方法学考核和临床标本检测。纯化的ＨＭＧ－１７抗原经十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析,呈现一条分子量约９２００的蛋白带;建立的ＥＬＩＳＡ方法批内平均变异系数（ＣＶ）为５．８％,批间ＣＶ值为９．６％,ＥＬＩＳＡ抑制试验最高抑制率达８７．２％;临床检测结果表明,在系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）、混合性结缔组织病（ＭＣＴＤ）和干燥综合征（ＳＳ）患者中分别有１７．４％～３７．３％的抗ＨＭＧ－１７抗体的阳性检出率（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）,而在其他自身免疫病和内科疾病者中,抗ＨＭＧ－１７抗体均为低水平。抗ＨＭＧ－１７抗体ＥＬＩＳＡ测定法具有较好的特异性和重复性,便于常规检测,该类抗体的存在似与某些自身免疫病（尤其是ＳＬＥ）的关系较为密切