异甘草素对人膀胱癌T24细胞ATP生成和乳酸代谢影响

为探讨异甘草素对人膀胱癌T24细胞糖酵解水平的影响及其作用机制。本研究采用SRB法测定异甘草素对人膀胱癌T24细胞增殖的影响;试剂盒测定T24细胞中ATP含量变化;试剂盒检测细胞培养液中葡萄糖摄取和乳酸含量影响;用比色法测定己糖激酶和丙酮酸激酶活性,酶标仪法测定乳酸脱氢酶的活性。结果显示:异甘草素对T24细胞有显著增殖抑制作用,且呈剂量依赖性(P0.01),经异甘草素处理的T24细胞出现明显的形态改变;异甘草素可浓度依赖性的抑制T24细胞ATP的生成(P0.05或P0.01);异甘草素可减少T24细胞对葡萄糖的摄取和乳酸的释放(P0.05或P0.01);与对照组相比,经过异甘草素处理的T24细胞的HK、PK和LDH活性均明显降低(P0.05或P0.01)。由此可知,异甘草素可抑制T24细胞糖酵解水平,其机制可能与减少葡萄糖摄取,下调糖酵解的关键性酶的活性有关。     

甘草查尔酮A抑制小鼠黑色素瘤B16F10细胞糖酵解表型和诱导凋亡

为探讨甘草查尔酮A对小鼠黑色素瘤B16F10细胞糖酵解表型和凋亡的影响。采用磺酰罗丹明B法检测甘草查尔酮A对B16F10细胞增殖影响的方法,比色法检测B16F10细胞外葡萄糖和乳酸含量,生物发光法检测细胞内ATP含量,Giemsa和Hoechst33258染色法观察细胞形态变化,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率。结果显示,甘草查尔酮A能有效抑制B16F10细胞增殖,呈现浓度依赖性和时间依赖性。随药物浓度的增加,B16F10细胞摄取葡萄糖能力减弱,细胞外乳酸含量和细胞内ATP含量明显降低。同时,细胞出现典型凋亡形态,细胞体积逐渐缩小,胞核皱缩,碎裂,呈现致密颗粒状荧光,且细胞凋亡率明显增加。由此可知,甘草查尔酮A能抑制B16F10细胞糖酵解表型和诱导细胞凋亡。     

大蒜多糖抗氧化活性及其对PC12细胞增殖的影响

目的: 检测大蒜多糖对大鼠嗜铬瘤细胞株(pheochromocytoma cells, PC12)增殖的影响和对经过氧化氢(H2O2)诱导损伤的PC12细胞的保护作用.方法:应用四氮唑蓝(MTT)比色法检测大蒜多糖对细胞增殖的影响;建立H2O2致PC12细胞损伤模型,于倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化;化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量及细胞内和细胞培养上清液中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性.结果:大蒜多糖各剂量组均能显著提高正常PC12细胞的存活数,大蒜多糖各剂量组均能有效对抗由25 μmol/L H2O2引起的细胞存活率下降和细胞凋亡,可明显改善细胞形态的衰变,显著降低LDH释放量和细胞培养液及细胞内的MDA含量,提高SOD活性.结论: 大蒜多糖促进正常PC12细胞增殖;且对H2O2诱导PC12细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高PC12细胞的抗氧化能力有关.     

狼毒乙醇提取物限制糖脂代谢阻止小鼠肺癌细胞生长和转移

采用不同浓度的狼毒乙醇提取物处理体外培养的Lewis肺癌细胞48h,MTT法检测细胞粘附与增殖,transwell小室检测细胞运动,并测定细胞内葡萄糖(Glu)、葡萄糖转运体1(GLUT1)、游离脂肪酸(FFA)和甘油三酯(TG)水平.将小鼠Lewis肺癌细胞分别注射到小鼠腋部皮下和尾静脉建立小鼠Lewis肺癌皮下移植模型和实验性肺转移模型,分成模型组、狼毒乙醇提取物高剂量组和低剂量组,模型建立后次日给药,治疗3周评价狼毒乙醇提取物的抗肿瘤和抗转移作用,检测瘤组织中GLUT1、乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、FFA和TG水平,并采用免疫组化法比较肺转移肿瘤部位与非肿瘤部位GLUT1和脂肪酸合成酶(FAS)的差异.结果显示,狼毒乙醇提取物对体外培养的Lewis肺癌细胞呈剂量依赖性抑制其粘附、增殖和运动,能降低细胞内Glu,GLUT1,FFA和TG水平.与未治疗的模型小鼠比较,狼毒乙醇提取物呈剂量依赖性减缓肿瘤生长速度、阻止肿瘤转移、延长荷瘤小鼠存活时间.狼毒乙醇提取物能降低瘤组织中GLUT1,LDH,FFA和TG水平,但增加SDH活性.在免疫组化中,与正常肺组织比较,狼毒乙醇提取物也能抑制肺转移肿瘤部位的GLUT1和FAS.以上结果表明,狼毒乙醇提取物能限制肿瘤细胞对葡萄糖和脂肪的利用从而阻止肺癌细胞的生长和转移,是一种有前景的新型潜在抗肿瘤药物.     

异甘草素诱导小鼠黑色素瘤B16F0细胞凋亡的研究

为探讨异甘草素对小鼠黑色素瘤B16F0细胞诱导凋亡的影响。采用SRB法检测异甘草素对B16F0细胞增殖的影响;台盼蓝拒染法检测细胞致死率;吖啶橙/溴乙啶荧光染色法观察细胞凋亡形态;AO/EB和Hoechst 33258染色观察药物处理后细胞形态的变化;流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染发检测细胞凋亡率;caspase-9/3试剂盒检测半胱氨酸蛋白酶-9和半胱氨酸蛋白酶-3的活性;QPCR法检测细胞凋亡相关基因B淋巴细胞-2,Bcl-2相关X蛋白的m RNA表达。结果显示,异甘草素能有效抑制B16F0细胞增殖,呈现浓度依赖性和时间依赖性,作用于B16F0细胞后呈现出明显的凋亡形态,同时随着异甘草素浓度的增加(0、24、45、65μg/m L),细胞凋亡率增加;caspase-9,caspase-3活性逐渐升高;Bax/Bcl-2比率上调(P0.05或P0.01)。由此可知,异甘草素能够显著诱导小鼠黑色素瘤B16F0细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。     

缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液对Hep G2细胞缺氧耐受性的影响

目的:探讨缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液(HP)对Hep G2细胞缺氧耐受性的影响.方法:用4种浓度的HP作用于缺氧(2%O2)培养HepG2细胞,以同浓度正常小鼠脑匀浆提取液(NP)作对照,检测了在缺氧培养后,Hep G2细胞的MTT值、早期凋亡率(Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测)、晚期凋亡率(Hoechst33258染色荧光显微镜检测).结果:低浓度HP对Hep G2细胞有保护作用,而高浓度HP对Hep G2细胞有损伤作用.结论:HP的作用有浓度依赖性和时间依赖性.     

甘草四种活性成分药酶诱导作用研究

为研究甘草内4种潜在活性成分甘草酚、甘草查尔酮A、甘草异黄酮A、异甘草黄酮醇对体外I相与II相药物代谢酶的激动活性,探讨甘草解毒的分子机制。通过系统药理学方法筛选甘草内口服生物利用度(OB)较高的化合物,体外建立Hep G2与A549的药酶诱导体系,MTT法正反向验证I相与II相药物代谢酶的激动显著减轻顺铂对细胞的毒性,RT-PCR法检测A549细胞中核转录因子Nrf-2和Hep G2细胞内肝微粒细胞色素P4503A4(CYP3A4)基因的表达,Western blotting法检测Hep G2细胞内CYP3A4蛋白的表达。高OB的4种潜在活性成分均能诱导I相与II相药物代谢酶。由此可知,甘草酚、甘草查尔酮A、甘草异黄酮A、异甘草黄酮醇可以激活A549细胞内Nrf-2及Hep G2细胞内CYP3A4的表达,结合上述化合物潜在的高生物利用度,认为其在甘草解毒机制中发挥重要的作用。     

海洋深层水与褐藻糖胶配伍应用抑制HepG2肝细胞脂质积聚调节作用的研究

以Hep G2细胞为模型,研究海洋深层水(deep sea water,DSW)与褐藻糖胶(fucoidan,FPS)配伍应用对Hep G2细胞脂质代谢的调节作用。采用MTT法确定与DSW配伍应用的FPS浓度控制在50μg/m L以内。在这一范围内,随着FPS浓度的增加(分别为5,10,20,50μg/m L),Hep G2细胞胞内的脂质含量逐渐降低,呈现明显的剂量依赖关系。而且,DSW与50μg/m L的FPS配伍应用的效果显著优于单用同剂量的DSW或FPS。实验结果表明,DSW与FPS配伍应用对Hep G2细胞脂质代谢具有更好的调节作用,其最佳配伍应用浓度为50μg/m L,这为高脂血症的防治提供了一个新的思路。     

异甘草素改善RAW 264.7细胞线粒体生物发生抑制LPS诱导的炎症反应

本研究旨在探讨异甘草素(ISL)对脂多糖(LPS)诱导的RAW 264.7小鼠巨噬细胞炎性反应的影响,及其线粒体相关机制。以体外培养RAW 264.7巨噬细胞为研究对象,采用MTT法考察ISL(5,10,20μmol/L)对RAW 264.7细胞活力的影响,Griess法检测NO含量,ELISA法检测TNF-α水平,荧光增强ATP试剂盒检测胞内ATP水平。荧光探针结合流式细胞术检测细胞总体和线粒体源ROS水平以及线粒体膜电势和线粒体质量数。免疫印迹法检测细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)以及调控线粒体生物发生相关蛋白的表达水平。qRT-PCR检测线粒体生物发生相关基因表达水平。结果表明,LPS成功诱导了炎症模型,ISL能够显著降低RAW 264.7细胞中NO、TNF-α的释放以及显著降低iNOS蛋白水平且呈浓度依赖性,ISL还可显著降低LPS诱导的RAW 264.7细胞内DCFH-DA和MitoSOX荧光强度水平,改善线粒体膜电势以及胞内ATP水平,显著降低由LPS刺激RAW 264.7细胞线粒体质量数的升高。另外,ISL还可改善由LPS诱导RAW 264.7细胞线粒体生物发生和动力...     

油橄榄叶提取物对铅中毒小鼠心肌乳酸脱氢酶活性和抗氧化能力的影响

目的:探讨油橄榄叶提取物(OLE)对铅中毒小鼠心肌乳酸脱氢酶活性和抗氧化能力的影响.方法:选健康小鼠,每日灌胃醋酸铅溶液的同时灌胃不同剂量的OLE进行治疗,连续用药30 d,检测心肌乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-PX)活性和丙二醛(MDA)含量.结果:与模型对照组相比,小鼠灌胃OLE后心肌SOD和GSH-PX活性升高,LDH活性和MDA含量降低.结论:OLE对铅中毒小鼠有一定的疗效,能影响心肌ATP酶活性和抗氧化能力,阻止铅对心肌的毒性.     

福建大头蛙抗癌多肽FJ-2945抗肿瘤活性研究

探索本课题组自主发现的天然抗肿瘤多肽FJ-2945对肝癌细胞Hep3b增殖、迁移的影响并初步明确其作用机制.通过CCK8与RTCA实验检测FJ-2945对细胞增殖能力的影响;采用Transwell与划痕实验分析FJ-2945对于Hep3b迁移能力的影响;利用流式细胞分析法检测FJ-2945对Hep3b细胞周期的影响;最后通过qRT-PCR与免疫印迹实验检测FJ-2945对Hep3b细胞增殖、迁移相关因子在转录水平与蛋白水平的影响.与对照组相比,FJ-2945显著抑制Hep3b细胞的增殖与迁移能力,并促进Hep3b细胞凋亡.实验组中的Skp2蛋白含量显著降低,最终抑制Hep3b细胞增殖与迁移能力.由此说明多肽FJ-2945可以作为潜在的药物,通过靶向Skp2抑制肝癌细胞Hep3b增殖、迁移等过程,发挥抗肿瘤作用.     

全氟辛酸对小鼠睾丸生殖细胞线粒体过氧化损伤的研究

为了研究全氟辛酸对雄性小鼠睾丸的氧化损伤,将雄性小鼠随机分为5组。连续对小鼠染毒14 d,用试剂盒法测定睾丸组织匀浆中还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)和ATP酶(Na+-K+-ATPase)的活性或含量的变化。研究结果表明:随着染毒量的增加,SOD的含量降低,MDA的含量升高,GSH的含量降低,SDH的活性则随着染毒量的增加而降低,ATPase的活性随染毒量的增加而明显降低,LDH的活性也随染毒量的增加而明显降低,因此全氟辛酸通过损伤睾丸细胞的线粒体,破坏其能量代谢,从而对睾丸组织产生损伤,导致睾丸坏死。     

四个年龄组健康乳牛腕关节滑液成分的测定

本文对初生(1—3日龄)、1—3月龄,一岁龄,成年(3—13岁)四个年龄组健康黑白花乳牛腕关节滑液(SF)的细胞总数(TCC)、总蛋白(TP)及其各组分、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)、γ—谷氨酰转肽酶(γ—GT)的正常值进行了测定,同时测定其对应血清值,揭示了滑液成分含量随年龄增长呈现的变化规律及其与对应血清值间的关系。结果表明,随年龄的增长,所测滑液成分含量的一般变化规律是:滑液TCC、TP、LDH、ALP、γ—GT含量逐渐降低,差异显著(P<0.05或0.01),一岁龄后多趋于稳定。滑液白蛋白(A)含量随年龄增长而降低,球蛋白(G),尤其是γ球蛋白则相反,差异显著(P<0.05或0.01),A:G值逐渐减小。滑液成分含量一般明显低于其对应血清值(P<0.01)。本文建立了关节滑液成分的生化测定方法并为乳牛腕关节滑液的临床检测提供了正常参考数据。     

H2S对ox-HDL致内皮细胞损伤的保护作用

探讨硫化氢对氧化高密度脂蛋白（ox-HDL）致人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护作用.方法 体外培养HUVECs细胞,应用形态学观察法和噻唑兰（MTT）比色法检测细胞活性,试剂盒测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH) 及丙二醛(MDA)含量.结果 ox-HDL组细胞损伤明显,经硫化氢低、中、高剂量组的干预,受损情况均有较明显改善,细胞存活率增加,且培养液中LDH及MDA含量降低,与对照组比较差异有显著性(P<0.05).结论 硫化氢对ox-HDL所致内皮细胞损伤具有一定的保护作用,其机制可能与降低氧自由基抗氧化作用有关.     

黄秦艽活性提取物对雪上一枝蒿所致PC12细胞毒性的保护作用研究

目的探讨黄秦艽中活性成分D1对雪上一枝蒿总生物碱(CFA)所致的PC12细胞损伤的保护作用及机制。方法用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞活力,试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH)活力,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Bcl-2表达水平。结果 CFA孵育24 h可剂量依赖性降低PC12细胞存活率。D1(6.25~25μg/m L)预孵育2 h可显著抑制CFA所致的PC12细胞损伤和LDH释放,当D1浓度为6.25μg/m L和25μg/m L时,Bcl-2蛋白表达水平明显上升。结论 D1可通过修复损伤的线粒体及调节相应凋亡蛋白表达保护CFA所致的PC12损伤。     

α-亚麻酸对胰岛素抵抗HepG2细胞脂类合成基因表达的影响

目的分析在α-亚麻酸(ALA,C18:3)干预后,胰岛素抵抗Hep G2(insulin resistance Hep G2,IR-Hep G2)细胞模型脂类合成关键基因表达水平的变化。方法 Hep G2细胞造模期分为两组,由无血清培养基培养的对照组(normal control group,NC)以及含有0.25 mmol/L软脂酸的无血清培养基培养的软脂酸组(palmitic acid,PA),培养24 h后鉴定细胞胰岛素敏感性并测定细胞内胆固醇(total cholesterol,TCH)、甘油三酯(Tryglyceride,TG)水平,然后用ALA替代20%的PA培养12 h,再次鉴定细胞胰岛素敏感性并检测细胞内TCH、TG水平,real time q PCR检测TG、TCH合成关键基因mRNA水平,Western blot检测TG、TCH合成关键基因蛋白表达量。结果 IR-Hep G2细胞模型建立成功,并且PA组TCH水平显著高于NC组(P=0.0016),出现了脂代谢紊乱;ALA干预IR-Hep G2细胞12 h后,细胞活性有所恢复,与PA组相比,ALA组胰岛素诱导基因(insulin induced genes,INSIGs)及脂类合成关键蛋白的mRNA表达无明显变化;与基因表达结果不一致的是,ALA干预后可以特异性提升细胞内INSIG-2蛋白相对表达量,但对INSIG-1蛋白相对表达量没有明显影响。同时,ALA可以显著抑制55k Da固醇调节元件结合蛋白-2(sterol regulatory element-binding protein-2,SREBP-2)、HMG-Co A还原酶(3-hydroxy-3-methyl glutaryl coen-zyme A reductase,HMGCR)及脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FASN)蛋白的表达,且ALA组细胞内TG水平显著降低(P=0.0119)。结论 0.05 mmol/L ALA干预IR-Hep G2细胞后,通过提升INSIG-2蛋白的表达,抑制SREBP-2从内质网到高尔基体的剪切成熟活化,降低细胞内55k Da SREBP-2水平及HMGCR的表达,并且抑制FASN表达,从而抑制了TG/TCH的合成。     

虫草素对β-淀粉样蛋白诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的应用Aβ25-35孵育PC12细胞制作细胞损伤模型,探讨虫草素对PC12细胞损伤的保护作用.方法将不同组别PC12细胞用Aβ25-35诱导48 h后,采用MTT法测定细胞活力,LDH法测定细胞膜通透性,化学比色法测定细胞中SOD活性和MDA含量,Western blot法检测PC12细胞中Caspase-3的表达.结果与模型组相比,两种剂量的虫草素均使细胞存活率显著增加,细胞培养上清中LDH含量显著减少,细胞中SOD活性显著升高,MDA含量显著下降,并明显降低PC12细胞Caspase-3的表达.结论虫草素对Aβ25-35诱导的PC12细胞死亡、氧化损伤和细胞凋亡有明显保护作用.     

NaCl刺激保加利亚乳杆菌对丙酮酸代谢及相关酶活性的影响

分析NaCl刺激保加利亚乳杆菌与冻干存活率的关系。高效液相色谱法分析葡萄糖、有机酸、乙酰辅酶A(Acetyl-CoA)以及胞内能量代谢变化;顶空气相色谱法测定乙醛含量;分光光度法和比色法测定关键酶活性。结果显示:NaCl刺激保加利亚乳杆菌对丙酮酸的代谢有显著影响,葡萄糖代谢速率提高48.18%(P<0.01),乳酸生成速率提高8.93%(P<0.01),关键中间代谢产物Acetyl-CoA的含量增加约31.35%(P<0.01);而乙酸含量出现负增长,乙醛生成速率降低22.86%(P<0.05)。胞内ATP代谢变化明显促进糖代谢速率;乳酸脱氢酶、乙酸激酶、磷酸乙酰转移酶的活性均有增加,而乙醛脱氢酶活性减弱。结果表明,NaCl刺激保加利亚乳杆菌对自身糖代谢的加快,丙酮酸代谢碳流向的重新分配以及关键酶活性的改变,可能与提高保加利亚乳杆菌的冻干存活率相关。     

GDNF对小鼠睾丸支持细胞增殖的影响

探讨胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived fieurotrphie facmr,GDNF)对小鼠睾丸支持细胞(sertoli cell)增殖的影响.对5～10 d的昆明小鼠睾丸Sertoli细胞进行分离培养,利用MTT法检测不同质量浓度GDNF(5,10,20,50μg/L)对Sertoli细胞增殖的影响,流式细胞仪测定DNA含量、分析细胞生长周期的变化.结果表明:5,10μg/LGDNF对Sertoli细胞的增殖有促进作用(p<0.05),20μg/LGDNF对Sertoli细胞增殖有明显促进作用(p<0.01);流式细胞仪检测表明GDNF促进了Sertoli细胞由Go期进入S期和G2期,细胞增殖指数(P1)增加,S期细胞指数(SPF)增加.说明GDNF对体外培养的Sertoli细胞具有促进增殖的作用.     

桑根酮C体内外抗肿瘤作用研究

目的研究桑根酮C对3种肿瘤细胞增殖的抑制作用及其体内抗肿瘤作用。方法体外实验,选取3种癌细胞,桑根酮C体外共同培养,SRB法测桑根酮C对肿瘤细胞增殖的影响,计算IC50。B16F0、B16F10细胞给予不同浓度桑根酮C,考察对B16F0、B16F10细胞内外黑素色含量的影响。体内实验,建立小鼠H22肿瘤动物模型,3个剂量(12. 5、25、50 mg/kg)桑根酮C腹腔注射于小鼠体内,10 d后,取瘤组织和脏器,考察桑根酮C对荷瘤小鼠肿瘤生长和脏器指数的影响。结果桑根酮C抑制B16F0、B16F10、Hep G2细胞增殖,其中Hep G2最为敏感,IC50为50. 58±0. 03μmol/L。不同浓度的桑根酮C都可使B16F0、B16F10细胞内外黑素色含量增加。桑根酮C高、中、低剂量对移植瘤小鼠肿瘤生长的抑制率为35%～47%,呈剂量依赖性;与模型组比较,均有显著性差异(P0. 05)。而且桑根酮C对荷瘤小鼠脏器指数影响非常小,与空白组比较没有显著性差异。结论桑根酮C对3种肿瘤细胞增殖有抑制作用,其在体内有抗肿瘤作用,且对小鼠脏器不良影响小。