碱性成纤维细胞生长因子对无血清培养大鼠生长板软骨细胞的影响

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）用于无血清培养扩增软骨细胞的可行性及最适质量浓度。方法：分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞（rat costochondral growth plate chondrocyte,RGC）。细胞化学和免疫细胞化学染色的方法检测第1代RGC中蛋白多糖和Ⅱ型胶原的表达。观察0．1、1．0、10．0和100．0μg/L bFGF对无血清培养RGC形态的影响,并分别用^3H—TdR和^3H—Proline掺入法检测上述质量浓度bFGF对无血清培养RGC增殖和胶原合成的影响。结果：第1代RGC表达蛋白多糖和Ⅱ型胶原,保持了软骨细胞的分化表型。随着bFGF质量浓度的增加RGC的形态由多角形变为梭形和圆形。与无血清对照组相比,上述4个质量浓度的bFGF均显著促进RGC的增殖和胶原合成（P〈0．05）,其中1．0和10．0μg／L bFGF促RGC增殖的作用与10％胎牛血清（FBS）对照组差异无显著性意义（P〉0．05）,但促胶原合成作用较弱,相当于10％FBS对照组的印％左右（P〈0．05）。结论：bFGF可用于无血清扩增软骨细胞,1．0～10．0μg/L是适宜的质量浓度范围,但其促胶原合成作用较弱,还需添加其他因子以弥补促胶原合成作用的不足。     

建立人输卵管上皮细胞无血清培养

人输卵管上皮细胞（HOEC）可以体外较长时间无血清培养,DMEM／F12培养液的培养效果优于Ham’sF10,在加有多种因子和胎球蛋白的培养液中,HOEC可贴壁生长,生长能力达到合质量分数15％FCS的对照组的30％～40％,一般可传代2次,最长培养可维持38d,细胞形态与有血清培养差别不大,虽然无血清培养HOEC的生长速度、密度、传代成功率远不及有血清培养,但能抑制成纤维细胞生长,维持较纯的上皮细胞。     

果蝇胚胎细胞无血清培养

本文报告了以聚乙二醇(PEG)为添加物而进行的果蝇胚胎细胞无血清培养的研究,结果表明:PEG具有促进脂肪体细胞发育和细胞增殖的作用,并简单讨论了PEG的这种作用机理.     

小鼠腔前卵泡无血清体外培养的研究

目的:探索添加物维生素C和促性腺激素对小鼠腔前卵泡卵母细胞体外生长发育的影响及适合小鼠腔前卵泡体外生长发育的培养体系.方法:通过改良的TCM199无血清培养系统,在96孔细胞培养板中,每孔放入1个腔前卵泡等条件下体外培养腔前卵泡卵母细胞.结果:随着培养时间的延长,各组卵泡和卵母细胞的直径都不同程度的有所增长,其中FSH400+LH200组和VC50+FSH400+LH200影响均大于VC50和对照组,存在显著性差异(P0.05),但二者之间无显著性差异.FSH400+LH200质量浓度组卵泡存活率、发生GVBD率和第一极体排出率均最高,分别为68.6%、17.6%、9.8%.但VC50+FSH400+LH 200组卵泡成腔率最高,为48%.结论:在改良的TCM199无血清培养系统中,联合添加促性腺激素和抗氧化剂后,卵泡成腔率大有提高,卵泡存活率、发生GVBD率和第一极体排出率仅次于单独添加促性腺激素组.     

在无血清培养基中代谢副产物对杂交瘤细胞生长代谢的影响 III.丙氨酸的作用

研究了无血清培养中的代谢副产物丙氨酸对杂交瘤细胞生长代谢的影响。丙氨酸浓度在0～ 8.9mmol/L范围时 ,丙氨酸对细胞生长影响不大 ,对单抗的生成没有直接影响 ,但对细胞代谢有较大的影响。随着丙氨酸浓度的提高 ,葡萄糖的消耗增加 ;同时 ,乳酸的生成增加 ,而丙氨酸和氨的生成减少     

葡萄糖供应速率对大肠杆菌表达及分泌人表皮生长因子的影响

采用一株大肠杆菌BL 21(DE 3)[pBLMVL 2EGF]生产人表皮生长因子(hEGF),其中hEGF表达由PL启动子控制并通过phoA信号肽分泌到胞外。实验结果表明:诱导阶段以恒定比供应速率流加葡萄糖时,流加速率对hEGF的表达和分泌有很大影响。当葡萄糖比供应速率为0.122g/(g.h)时,hEGF表达水平最低,分泌效率最差,只有37.5%;随着葡萄糖比供应速率的增加,胞外和胞内hEGF比生产速率明显增加,当葡萄糖比供应速率为0.196 g/(g.h)时,单位菌体产生的hEGF水平最高(121.6 m g/g),其中分泌至胞外的hEGF占42%。此外,诱导前补充有机氮源有利于提高诱导初始hEGF的生产速率。     

基于自编码器的无监督机器异常声检测

针对机器异常声音很少发生并且种类多、不稳定的问题,提出了一种基于自编码器的无监督机器异常声检测方法.首先,利用正常声音的频谱特征训练自编码器,对正常声音的特征进行重建;然后,通过自编码器重建待测音频的特征,利用待测音频的特征和重建的特征两者之间的误差值进行异常检测.采用DCASE2020 Challenge Task2...     

无马蹄的圆周自映射

对于圆周连续自映射f,我们证明了以下条件是彼此等价的:(1)f无马蹄。(2)f的回归点集的闭包中的非回归点的集合为可数集。(3)任何一点的ω-极限集只含有唯一的极小集。(4)任何一点的ω-极限点或是f的一个周期轨道或者不包含f的周期轨道。(5)任一点的ω-极限点的ω-极限点是回归点。(6)任一点的ω-极限点的ω-极限点是几乎周期点。(7)每一个非游荡点的ω-极限集是极小集。     

哺乳动物细胞适应无血清培养的改造

哺乳动物细胞是目前最成功的医学制品表达宿主细胞.但在大规模培养中哺乳动物细胞会面临着对无血清培养基的适应性差、贴壁性差以及细胞凋亡等很多难题.对哺乳动物细胞本身进行改造已成为优化哺乳动物表达系统的新的热点.     

血清浓度对SMMC—7721细胞DNA合成的影响

以人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞为材料研究了不同血清浓度对ＤＮＡ合成和细胞生长状态的影响，结果表明几乎在所有处理中短时无血清培养都能刺激ＳＭＭＣ－７７２１细胞的ＤＮＡ合成，且＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入量与培养液中ＦＣＳ浓度成明显负相关，＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入量比值最高可达３９．３２倍．１８ｈ内，随培养时间的增加无血清培养对细胞ＤＮＡ合成的刺激作用逐渐下降，＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入量比值从３９．３２倍下降为３．５３倍，     

高密度培养大肠杆菌表达人角质细胞生长因子

角质细胞生长因子(KGF)是成纤维生长因子家族(FGF)成员,与上皮细胞增殖、组织胚胎发育、创伤修复等过程密切相关.在大肠杆菌BL21(DE3)中克隆KGF基因,并进行诱导表达条件的优化.使用合成培养基,应用底物反馈流加策略将糖浓度控制在较低水平,在发酵罐中高密度培养,细胞干质量浓度可以达到46 g/L.发酵罐培养的大肠杆菌在对数生长期经过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,在可溶性和不溶性产物中都得到了具有免疫学活性的GST-KGF融合蛋白,经过ELISA检测,发酵液中可溶性表达的KGF产率达到108μg/L.该研究为利用原核表达系统生产活性KGF建立了优化工艺,有利于将大规模生产用于创伤修复的KGF.     

无血清微载体培养MDCK细胞和甲型流感病毒H1N1的条件优化

 血清微载体培养MDCK细胞,并接种流感病毒H1N1,优化培养条件,为细胞流感疫苗的工艺研发奠定基础.采用不同的细胞接种量在50mL无血清微载体搅拌瓶中培养MDCK细胞,并接种甲型流感病毒H1N1,检测不同pH值和TPCK-胰酶含量的病毒培养液,不同病毒接种量,补加TPCK-胰酶,以及不同收毒时间对血凝效价的影响.以1.0×10⁵mL^-1的MDCK细胞数量接种到无血清微载体上,病毒培养液pH值为7.2~7.4范围内,TPCK-胰酶质量浓度为1.0μg/mL,接种后不补加胰酶,病毒接种量MOI=1.0,并在72h收获,最高血凝效价达到512.由此获得了在无血清为载体上培养MDCK细胞和甲型流感病毒H1N1的适宜条件.     

血清浓度对SMMC－7721细胞DNA合成的影响

以人肝癌ＳＭＭＣ—７７２１细胞为材料研究了不同血清浓度对ＤＮＡ合成和细胞生长状态的影响，结果表明几乎在所有处理中短时无血清培养都能刺激ＳＭＭＣ—７７２１细胞的ＤＮＡ合成，且３Ｈ—ＴｄＲ掺入量与培养液中ＦＣＳ浓度成明显负相关，３Ｈ—ＴｄＲ掺入量比值最高可达３９．３２倍．１８ｈ内，随培养时间的增加无血清培养对细胞ＤＮＡ合成的刺激作用逐渐下降，３Ｈ—ＴｄＲ掺入量比值从３９．３２倍下降为３．５３倍，结果提示人肝癌ＳＭＭＣ—７７２１细胞对培养液中短时无血清的反应不同于其它细胞株     

人小肠癌腹水转移细胞的无血清建系培养

人小肠癌腹水转移细胞系ＨＩＣ的无血清培养亚系经过３ａ的传代培养建立成功，命名为ＨＩＣＳＦ。该细胞仍保留其母系ＨＩＣ一些属性：亚三倍体组型，众数５３条；增殖活跃，倍增时间１６ｈ；异体动物移植致瘤，具有活跃的血管生成行为和较高的转移行为。由于培养条件的变化，该细胞也获得了一些新的特征，ＨＩＣＳＦ细胞属弱贴附细胞，形态多变。贴附细胞主要靠树枝状突起贴附于培养介质，突起内微管、微丝相对较多，细胞骨架总体上呈无序排列。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳表明ＨＩＣＳＦ细胞分泌多种蛋白质进入培养上清中，培养上清的层析分离表明，至少存在分子质量分别为９０，７０，４５和１０ｋｕ４种促生长活性因子，同时也存在分子质量分别为６０和３０ｋｕ２种生长抑制活性因子。这些生长因子共同调控着ＨＩＣＳＦ细胞的自主生长。     

杂交瘤细胞的无血清低蛋白培养

实现了杂交瘤细胞的体外无血清低蛋白培养。考察了血清浓度、基础培养基和接种密度对细胞生长的影响。在含5%血清培养基、1%血清培养基和无血清低蛋白培养基中适应生长的细胞,μ分别为0.68、0.45、0.44d-1,qGlc分别为13.4×10-9、13.1×10-9、19.2×10-9mmol/(cell·分别为39.4×10-9、44.1×10-9、37.7×10-9mg/(cell·d),YMAb/Xv分别为52.6×10-9、d),qMAb57.8×10-9、54.4×10-9mg/cell,YLac/Glc分别为2.0、1.95、2.0mmol/mmol。无血清培养中葡萄糖代谢途径不变,参与细胞维持代谢的葡萄糖比例增大。血清浓度降低,延迟期变长,最大活细胞密度下降。基础培养基影响细胞的最大活细胞密度,不影响生长速率。无血清培养基中细胞的接种密度选择在0.2×106～0.3×106cells/mL。     

一种适合粉纹夜蛾5B1细胞生长的无血清培养基的研究

报道了一种适合粉纹夜蛾（5B1）细胞生长的无血清培养基（简称为SFM），该培养基以Tc-100基础培养基为基础，补加一定量的水解乳蛋白和酵母抽提物，并加入适量的微量元素，维生素，脂类复合物等，5B1细胞已在该SDFM中传代18代，研究结果表明：该培养基能支持5B1细胞的生长和芹菜夜蛾核型多角体病毒（SfaMNPV)在其中复制。     

无监督异常检测的深度变分自编码高斯混合模型

针对高维数据无监督异常检测难以重构异常样本,无法保留低维空间信息的问题,提出一种深度变分自编码高斯混合模型（deep variational autoencoding gaussian mixture model,DVAGMM）。该模型利用深度变分自编码器为每个输入样本生成低维数据和重构误差,并将这些数据输入高斯混合模型。为更好地学习到原始样本的低维特征,同时避免自编码器自身的局部优化问题,减少重构误差,模型采用联合优化深度变分自编码器和高斯混合模型参数的方法,并利用单独的估计网络促进混合模型的参数学习。实验结果表明,该模型在几个基准数据集上的检测准确率和效果都比其他传统模型更高,以F1值作为综合评价指标,模型的综合分数比第二名高出大约4%。     

在无血清培养基中代谢副产物对杂交瘤细胞生长代谢的影响Ⅲ.丙氨酸的作用

研究了无血清培养中的代谢副产物丙氨酸对杂交瘤细胞生长代谢的影响。丙氨酸浓度在0－8.9mmol/L范围时，丙氨酸对细胞生长影响不大，对单抗的生成没有直接影响，但对细胞代谢有较大的影响，随着丙氨酸浓度的提高，葡萄糖的消耗增加；同时，乳酸的生成增加，而丙氨酸和氨的生成减小。     

小鼠无透明带胚胎培养方法的优化

目的:探索合适的小凹制作方法以培养小鼠无透明带胚胎,完善WOW(the well of the well)系统,为手工克隆技术提供支持,提高核移植生产效率.方法:对WOW系统进行改进,用金属针、玻璃针及胚胎聚集针分别做小凹,比较这三种方法制作的小凹对小鼠无透明带受精胚胎的培养效果.结果:胚胎聚集针所做小凹的囊胚发育率显...