R—藻红蛋白光动力杀伤的形态学机制研究

在荧光显微镜下观察新型光敏剂Ｒ藻红蛋白的荧光在肿瘤细胞中的分布,探讨以藻红蛋白为光敏药物的光动力损伤可能发生的细胞水平机制,以及培养液酸度和藻红蛋白浓度对其与细胞结合、进入及光动力杀伤的关系．结果表明在ｐＨ５ 时,藻红蛋白与瘤细胞有最好的结合．其结合部位随藻红蛋白浓度的增加,逐渐以分布在胞膜、胞浆和胞核为主,表现为一个动态进入细胞的过程．光动力杀伤作用与其进入细胞的数量成正相关,从形态学上证明了Ｒ藻红蛋白介导的光动力治疗作用与藻红蛋白进入瘤细胞状态紧密相关．     

红毛藻R-藻红蛋白果冻的制备工艺

为了研究红毛藻R-藻红蛋白、卡拉胶 魔芋粉复合胶、木糖醇、柠檬酸的不同添加量对红毛藻R-藻红蛋白果冻品质的影响,通过单因素实验筛选获得4种物质的最佳添加量,并采用正交法优化果冻配方,确定红毛藻R-藻红蛋白果冻的最优制备工艺条件。结果表明,得到的最佳配方是复合胶、木糖醇、柠檬酸、红毛藻R-藻红蛋白液的质量分数分别为0.9%,9.0%,0.10%,4.5%;感官评分为87.64,弹性为（0.98±0.016）mm,咀嚼性为（0.789±0.021）N;可溶性固形物质量分数为24.3%;菌落总数为40 CFU/g,未检出大肠杆菌,结果符合国家标准要求。     

多管藻R-藻红蛋白和R-藻蓝蛋白的制备及其相对分子质量的测定

以海生大型红藻多管藻(Polysiphonia urceolata)为材料,通过凝胶过滤层析、离子交换柱层析、凝胶电泳,得到纯度较高的R-藻红蛋白和R-藻蓝蛋白.在SDS-PAGE中,藻红蛋白表现出4个带有发色团的亚基α、β、β'、γ和γ',其相对分子质量分别为1.73×1041,.95×104,3.33×104和3.10×104;藻蓝蛋白则表现出3个带有发色团的亚基,分别是:α、β和β',其相对分子质量为1.75×1042,.13×104和2.62×104.不同相对分子质量的γ亚基和β亚基的发现都有别于先前的报道,这对藻红蛋白和藻蓝蛋白结构的研究提供了有价值的研究结果.选用Superdex-200凝胶柱层析对纯化的藻红蛋白和藻蓝蛋白进行了相对分子质量测定,藻红蛋白相对分子质量为2.4×105,藻蓝蛋白相对分子质量为1.36×105这表明纯化制备的藻红蛋白和藻蓝蛋白分别以六聚体((αβ)3γ(αβ)3)和三聚体((αβ)3)形式存在.     

转小鼠金属硫蛋白基因集胞藻6803及其野生藻培养

通过摇瓶培养考察转小鼠金属硫蛋白基因集胞藻６８０３及其野生藻的光合自养培养过程中碳源浓度、氮源浓度和光照度对这两种藻生长的影响。野生藻的最适生长碳源浓度（０．０５－０．５ｇ／Ｌ）比转基因藻的最适生长碳源浓度（０．０２－０．０５ｇ／Ｌ）高。氮源浓度对转基因藻和野生藻的影响趋势相同。在０．３－４．５ｇ／Ｌ范围内,随着氮源浓度的增高,藻体生长的最大细胞浓度降低。转基因藻生长的最佳光照度为１５００ｌｘ,野     

红藻藻胆体内部蛋白间的能量传递研究 Ⅰ.人工合成R-PE/R-PC/APC复合物内的能量传递

研究了人工合成的藻胆体模拟复合物的时间分辨荧光光谱,并运用多指数拟合的方法对数据进行了详细的处理和分析,结果表明能量在Ｒ－ＰＥ和Ｒ－ＰＣ之间的传递时间与能量从Ｒ－ＰＣ传递到ＡＰＣ的时间几乎相等（５０ｐｓ）;除此之外,Ｒ－ＰＥ到ＡＰＣ还有两种能量传递的通道,能量在这两个通道的传递时间分别为１１０ｐｓ和４００ｐｓ．即：蛋白之间的能量传递通道是并行的．     

R—藻红蛋白色基多肽对肿瘤细胞光动力杀伤作用的实验研究

首次用胃酶降解及CM Sephedex C-50柱层析法获得了6种藻红蛋白的色基多肽,并用藻红蛋白及其色基多肽对两种肿瘤细胞作体外激光疗法增敏作用实验,S180小鼠腹水癌细胞株培养后分别用浓度为10,25,50,100ug/mL的藻红蛋白及其色基多肽处理,经波长为488nm的氩离子激光辐照（照射剂量为28．8J/cm2),用MTT法检测,其细胞的生存率最佳效果分别棕达45％及16％,显示出良好的剂量效应,在激光处理藻红蛋白及其色基多肽对HL60人白血病细胞所做的细胞生长曲线图的比较中可看出,色基多肽的激光增敏作用要优于藻红蛋白多聚体。     

新型光敏剂藻红蛋白在肿瘤光动力治疗中的研究进展

藻红蛋白是无毒副作用的天然产物,是一种新型蛋白光敏剂。光动力学治疗是一种新的肿瘤治疗手段。近年来,对藻红蛋白在肿瘤光动力治疗中的应用研究逐步发展起来。通过介绍近年来对光动力治疗和光敏剂的研究进展、现状和历史,主要阐述了由藻红蛋白介导的光动力作用对肿瘤细胞的作用效果和作用机制,认为藻红蛋白在肿瘤光动力治疗的发展过程中至关重要。藻红蛋白可能是通过光动力反应过程中产生的活性氧物质来杀死肿瘤细胞或引起肿瘤细胞凋亡,从而达到治疗目的。     

红毛菜藻红蛋白的提取及稳定性研究

用多种提取方法提取红毛菜（Bangia fusco-purpurea）藻红蛋白并对藻红蛋白粗提液的稳定性进行了初步研究。冻融法提取藻红蛋白的得率较高；温度、pH、铜离子、铁离子及光照对藻红蛋白稳定性有很大影响，藻红蛋白较适宜的保存条件为；低温（5℃左右）、pH5.7、避光。根据实验结果，提出了藻胆蛋白光解反应的可能机理。     

红藻藻胆体内部蛋白间的能量传递研究：I.人工合成R—PE／R …

研究了人工合成的藻胆体模拟复合物时间分辨荧光光谱,并运用多指数拟合的方法对数据进行了详细的处理和分析,结果表明能量在Ｒ－ＰＥ和Ｒ－ＰＣ之间的传递时间与能量从Ｒ－ＰＣ传递到ＡＰＣ的时间几乎相等（５０ｐｓ）除此之外,Ｒ－ＰＥ到ＡＰＣ还有两种能量传递的通道,能量在这两个通道的传递时间分别为１１０ｐｓ和４００ｐｓ,即：蛋白之间有能量传递通道是并行的。     

可逆光致变色的藻红蓝蛋白α亚基分子设计

从层理鞭枝藻藻红蓝蛋白α亚基基因表达质粒pGEMD-pecA出发，通过酶切、削平或补充补末端及重新环合等技术，使其后的阅读框发生移码突变，从而到C－端缺失24个和36个氨基酸的两个缺失突变体pGEMD-pecA-C24和pGEMD-pecA-C36，用PCR技术将已突变的基因片段转入表达载体pET30中，得到pET30-pecA-C24和pET30-pecA－C36，获得高效表达，利用PCR技术从pGEMD-pecA中扩增出N－端缺失20个和32个氨基酸pecA的突变基因片段，并克隆于表达载体pET30中,得到pET30-pecA-N20和pET30-pecA-N32，获得高效表达，两个C－端缺的突变的脱辅基蛋白无论有或无藻红蓝蛋白连接／异构酶催化，均不能与藻蓝胆素共价偶联，两个N－端缺失突变脱辅基蛋白均能在藻红蓝蛋白连接／异构酶催化下与藻蓝胆系共价偶联，且色素从藻蓝胆素转化为藻紫胆素。     

海生红藻R-藻红蛋白和隐藻藻蓝蛋白光吸收系数测定

选用Bradford法和Lowry法,以牛血清蛋白和γ-球蛋白作为标准蛋白,分别对从海生红藻异管藻（Heterosiphonia japonica）和多管藻（Polysiphonia urceolata）以及蓝隐藻（Chroomonas placoidea）中分离纯化的异管藻R-藻红蛋白（HR-PE）、多管藻R-藻红蛋白（PR-PE）、蓝隐藻藻蓝蛋白（Cr-PC）进行了蛋白浓度及其特征吸收峰的光吸收系数测定.根据2种方法和2种蛋白针对3种藻胆蛋白的测定结果以及影响结果的主要因素进行了细致地分析和比较,Lowry法是进行藻胆蛋白,尤其是六聚体藻红蛋白浓度及光吸收系数测定的更适合、准确的检测方法;在进行同类或相同藻胆蛋白之间相对含量、比例的定量分析时,Bradford法是一种更便捷的测定方法.由于藻胆蛋白光吸收系数值与选用的蛋白定量检测方法及其所用的标准蛋白直接相关,在使用和比较藻胆蛋白光吸收系数值时必须明确检测方法和标准蛋白,否则藻胆蛋白光吸收系数值将不具有可比性.     

藻红蛋白基因部分序列的克隆和顺序分析

报道了真核红藻－龙须菜的藻红蛋白亚基基因的部分序列,位于β亚基的近碳端,α亚基的近氮端,包括β亚基部分３０９个核苷酸,α亚基部分１６２个核苷酸,还有间隔部分５５个核苷酸,可编码β近碳端的１０２个氨基酸和α近氮端的５４个氨基酸,并与目前已知的相应序列做了比较,该序列与已知红藻ＰＥ亚基基因相应部分的相似性为７７．９％和８１．１％。对应的氨基酸序列的相似性为７９．５％到８６．５％,蛋白质序列的保守性高于     

海生红藻多管藻中藻胆蛋白的分离纯化

选用Middle Fine Sephadex G-150(MFG-150)、Fine Sephadex G-150(FG-150)以及Sephacryl S-300(S-300)3种凝胶过滤对富含R-藻红蛋白(R-PE)的多管藻藻胆蛋白提取液进行R-PE、R-藻蓝蛋白(R-PC)和别藻蓝蛋白(AP)的分离,并对所得R-PE、R-PC/AP组分用DEAE Sepharose-Fast Flow离子交换层析做进一步纯化,优化建立了从多管藻藻胆蛋白提取液中同时有效分离纯化R-PE、R-PC和AP 3类藻胆蛋白组分的技术方法.     

红藻藻胆体内部蛋白间的能量传递研究

研究了人工合成的二元藻胆体模拟复合物（Ｒ－ＰＣ／ＡＰＣ）的时间分辨荧光光谱并运用多指数拟事的以数据进行了详细的处理和分析，研究结果证实了能量在Ｒ－ＰＣ和ＡＰＣ之间的传递时间与人Ｒ－ＰＥ传递到Ｒ－ＰＣ的时间几乎相等；除此之外，Ｒ－ＰＣ到ＡＰＣ没有其它传冯通道，结果为可以从Ｒ－ＰＥ直接传递到ＡＰＣ同时也可以经过Ｒ－ＰＣ传递到ＡＰＣ，Ｒ－ＰＣ作为能量传递中间受体，在实际的体系中其作用是通过竞争的机制实现     

红毛藻藻红蛋白的粗提方法比较及不同光照条件下藻胆蛋白变性机制的初步探讨

比较研究了多种细胞破碎方法和盐析方法对红毛藻中藻红蛋白的提取效果，确定组织捣碎法为效率较高的细胞破碎方法，用饱和度为60％的硫酸铵按“改进结晶法”进行盐析为较佳的盐析方法。探讨了冻融法的作用机制。同时对藻红蛋白盐析液在不同照射条件下的变性机制进行了初步的研究和探讨，研究显示光照有可能使藻胆蛋白的摩尔消光系数发生变化。     

分光光度法测定藻胆蛋白含量的研究

从多管藻和螺旋藻中提取了藻胆蛋白,利用藻胆蛋自在可见光区具有吸收的特点,建立了藻胆蛋白含量的快速测定方法．在波长565和620nm处测定藻红蛋白和藻蓝蛋白在0-1．2mg／mL内具有良好的线性关系,r藻红=0．9995,r藻蓝=0．9998,该方法测定藻红、藻蓝蛋白的回收率分别为99．07％和99．11％．与传统的Lowry法相比,该方法测定蛋向质简便快速．重现性好．     

层理鞭枝藻的藻蓝蛋白和藻红蓝蛋白α—亚基及其色素肽 …

用紫外可见吸收和圆二色光谱研究了层理鞭枝藻的藻蓝蛋白α－亚基色素肽和藻红蓝蛋白α－亚基色素肽的可逆光化学,这些研究表明藻蓝蛋白α－亚基色素钛和菏红蓝蛋白α－亚基色素肽分别相应于藻蓝蛋白和藻红蓝蛋白的辅基色素结构域,藻蓝蛋白α－亚基色素肽的光谱性质和可逆光化学与藻蓝蛋白α－亚基的相应性质很相似,藻红蓝蛋白α－亚基色素肽的光谱性质和可逆光化学与藻红蓝蛋白α－ 基的相应性质相似,不过藻红蓝蛋白α－亚基色     

委内瑞拉产地龙须菜藻红蛋白基因的克隆及其系统学研究

本文报道了红藻Gracilaria lemanei formis委内瑞拉株的藻红蛋白基因的部分序列，将序列与其它红藻-Rhodella violacea，Polysiphonia boldii，Griffithsia monolis，Porphyra tenera，phyra yezoensis及青岛产龙须菜的相应序列对齐后，进行了系统学研究。结果显示，同一属的藻白α和β亚基之间的间隔序列，从长度到核苷酸序列均非常相似，而同一科不同属或同一目的科该序列有很大的不同；两不同产地龙须菜的PE基因在β亚基上的转换多于颠换，说明β亚基比α基保守；委内瑞拉来源龙须菜与青岛产地龙须菜可能不属于同一物种，应为同属不同种关系；由蛋白基因所得的系统树包括3个与建立在形态标准上的遗传位置一致的分支；藻红蛋白基因序用于种间及更高地位的分子系统研究。     

钝顶螺旋藻中藻蓝蛋白的分离纯化及特性研究

为发展新型海洋药物,采用ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００凝胶层析和羟基磷灰石柱层析对人工养殖钝顶螺旋藻中的藻蓝蛋白进行了分离和纯化,得到了藻蓝蛋白纯品。测定了藻蓝蛋白的氨基酸组成和含量。藻蓝蛋白的紫外、可见吸收光谱表明其最大特征吸收波长为２７８,３６０,６２０ｎｍ。得到的藻蓝蛋白经等电聚焦显示为一条带,其等电点为ｐＨ＝４．３。还测量了藻蓝蛋白红外吸收光谱。研究所获得的藻蓝蛋白为后续开展临床应用提供了可靠的样品。     

红藻藻胆体内部蛋白间的能量传递研究：Ⅱ.人工合成复合？…

研究了２种人工合成的二元藻胆体模拟复合物的时间分辨荧光光谱并运用多指数拟合的方法对数据进行了详细的处理和分析,研究结果证实了能量在Ｒ－ＰＥ和Ｒ－ＰＣ之间的传递时间与有量从Ｒ－ＰＥ传递到ＡＰＣ的时间几乎相等;