Vero细胞的微载体培养——放大过程中的接种工艺

概述了用微载体系统培养贴壁细胞放大过程中的接种方法,研究了球转球的工艺条件,并建立了球转球的动力学模型。用此方法成功地在国产５０Ｌ生物反应器中培养Ｖｅｒｏ细胞,细胞密度达１．１×１０＾７ｃｅｌｌｓ／ｍＬ。     

用大孔明胶微载体培养Vero细胞

用自制在孔明胶微载体与实心微载体ＣＴ－３在转瓶中培养Ｖｅｒｏ细胞，在培养后期许多细胞从ＣＴ－３上胶落下来，细胞密度降低，而大孔微载体上的细胞密度一直保护在较高水平（８×１０＾８ｃｅｌｌｓ／Ｌ以上），表明大孔微载体能够延长细胞活性期，用大孔明胶微载全反应器中培养Ｖｅｒｏ细胞，最大活细胞密度达５．６×１０＾９ｃｅｌｌｓ／Ｌ。     

微载体培养Vero细胞工艺条件初探

本文研究了细胞生长过程中微载体的种类,浓度及细胞的接种量、溶解氧水平对培养Vero细胞的影响。在pH为7.0～7.4,液解氧水平为30%～50%空气饱和浓度,搅拌速度为25～35r/min,温度为37℃时,在1.5升Celligen~(TM)系统中,连续培养7天,可使细胞浓度达到2.5×10~6 Cells/ml,为接种量的12倍,细胞生长旺盛,形态正常。     

生物反应罐Vero细胞微载体灌流培养

用7L生物反应罐,3g/L Cytoedx 1,φ＝50％溶解氧,40－50r/min搅拌速度进行细胞培养,培养48h开始灌流。连续动态测定葡萄糖含量、渗透压变化及pH值,同时观察细胞形态、增殖情况。连续3批7L规模灌流培养表明,细胞贴附率高,增殖速度快,细胞形态良好,细胞群体倍增数达4．7。结果表明生物反应罐灌流培养法是一种快速、规模化制备细胞的有效方法。     

甲壳胺微载体培养Vero细胞实验

采用以甲壳胺为基质合成的CX－1型微载体，进行Vero细胞悬浮培养实验，结果表明，在1mg/ml甲壳胺微载体浓度下，使用RPMI1640培养基，添加10％新生牛血清，37℃培养3h，传代Vero细胞能够快速贴附于微载体上，悬浮培养24h时，细胞浓度达到2.26×10^5个／ml；培养72h时，细胞浓度达到6.89×10^5个／ml；培养120h时，细胞浓度达到7.12×10^5个／ml。电镜观察表明细胞在微载体上长势良好。说明甲壳胺微载体适合Vero细胞高密度悬浮培养。     

影响Px细胞微载体培养因素的研究

研究了细胞生长过程中微载体的种类、浓度及细胞接种量对培养Ｐｘ细胞的影响。以ＧＴ－３为微载体，当细胞接种量为２．０×１０＾５细胞／ｍＬ，微载体浓度为２．０ｍｇ／ｍＬ，温度为２８℃时，第６天细胞密度可达１．０×１０＾６细胞／ｍＬ，为接种量的５倍，细胞生长旺盛，形态正常。     

大孔明胶微载体的制备

以明胶为原料，用悬浮成球、甲苯制孔的方法制备大孔明胶微载体。考察了表面活性剂及其配比、油水比、明胶浓度、制备方式和表面修饰等对载体性能的影响。优化了制备大孔明胶微载体的条件，制得了直径为１００－３００μｍ，孔径为１０－３０μｍ的大孔明胶微载体。     

生物反应器微载体系统大规模培养草鱼细胞及病毒

采用微载体GT-2在细胞培养生物反应器中悬浮培养草鱼细胞和草鱼出血病病毒。合适的工艺条件为:温度26℃,pH6.8～7.2(生长期),7.2～7.4(接毒后),搅拌转速40 r/min,溶氧(DO)40%空气饱和度。GT-2是一种较适合于草鱼细胞贴壁生长的微载体。细胞密度可达7.4×10~6 Cells/mL,病毒滴度可达8.00。     

悬浮培养型 BHK -21 细胞的生长规律和不同接种密度培养效果的研究

为探索悬浮培养型BHK-21细胞的生长规律和最佳接种密度,以3．0×10^5个／mL、4．0×10^5个／mL、5．0×10^5个／mL、6．0×10^5个/mL和7．0×10^5个／mL等5个接种密度培养了悬浮培养型BHK-21细胞,绘制了细胞生长曲线和活力变化曲线．结果显示,悬浮培养型BHK-21细胞生长曲线呈“S”型,接种培养前24h细胞处于适应期,生长曲线上密度增长不大,期后细胞进入对数增长期,生长密度呈指数增长．以3．0×10^5个／mL和4．0×10^5个／mL接种培养的在120h达到最大增殖密度,分别为4．65×100个／mL和5．59×10^6个／mL,倍增时间分别为26．9h和26．7h;以5．0×10^6个／mL、6．0×10^6个/mL和7．0×10^6个／mL接种培养的在96h就达到最大增殖密度,分别为5．14×10^6个／mL、5．36×10^6个／mL和5．1×10^6个／mL,倍增时间分别为22．4h、24．1h和25．2h．各组在培养的96h以前细胞活力均在90％以上且变化较小,120h和144h时细胞活力开始下降,且接种密度越高活力下降越快．该细胞以4．0×10^5个／mL、5．0×10^5个／mL、6．0×10^5个／mL接种培养能达到较高培养密度,细胞生长快,且细胞峰值持续时间长．     

用于培养动物细胞微载体的制备

合成了两种用于动物细胞培养的微载体:葡聚糖和明胶微载体。报道了合成方法。将产物初步用于Vero细胞培养,得到了满意的结果。细胞在微载体上的附着生长良好,和目前广泛使用的Cytodex 1微载体效果相仿。当DEAE-Sephadex 1.5微载体浓度为2mg/ml时,在1.5L Celligen细胞培养器中培养120小时,细胞浓度可达1.2×10~6细胞/毫升,为接种浓度的5倍,达到了文献中报道的水平。     

Vero细胞培养过程中球转球接种工艺的可行性研究II.静态球转球过程

研究了静态球转球接种Ｖｅｒｏ 细胞培养过程中的细胞生长特性,提出了细胞球转球的机理,通过与消化接种的比较,证明在静态球转球接种的细胞培养过程中,细胞在新球与老球表面的生长和细胞的生理状态很不平衡,因而认为不适合于大规模细胞培养过程,并对消化接种在大规模操作中的可行性进行了讨论     

大肠杆菌内毒素对Vero细胞培养的作用研究

将精制大肠杆菌内毒素(E.COliEndotoxin)加入含血清细胞培养液(MEM)中,配制成浓度分别为50、100、200、500EU/mL的细胞培养液 用此培养液对Vero细胞进行培养,测定细胞生长曲线、细胞平均倍增时间、最大增殖浓度及台盼蓝拒染率等指标,研究大肠杆菌内毒素对非洲绿猴肾细胞(Vero)培养的影响 结果显示,内毒素含量为50EU/mL时,Vero细胞仍能正常生长 当内毒素含量逐渐升高,培养时间逐渐延长时,细胞的增殖速度及活率明显下降 这表明,内毒素对Vero细胞的生长及活性具有明显的抑制作用,且该作用具有一定的时间、剂量依赖性     

饲养密度和饵料密度对花鲈稚鱼生长及存活的影响

采用两因素五梯度的正交设计方法,分析了不同饲养密度和不同饵料密度对花鲈稚鱼生长及存活的影响.花鲈稚鱼(全长8.22～11.05mm)和饵料(卤虫无节幼体)被分为5个不同的密度组饲养30d(花鲈稚鱼的密度:5,10,15,20,25尾/L;饵料密度:250～1125,500～2250,1000～4500,2000～9000,4000～18000只/L).结果表明:在水温为(20±1)℃,盐度为28～30条件下,饵料密度对花鲈稚鱼生长及存活有显著影响,花鲈稚鱼的生长率和存活率在饵料密度为250～1125只/L至2000～9000只/L范围内呈增长趋势,当饵料密度增加到4000～18000只/L时,花鲈稚鱼生长率和存活率反而下降.饲养密度较高时花鲈稚鱼的生长率和存活率较低,但方差分析结果显示,饲养密度对花鲈稚鱼生长及存活的影响不显著.可以认为,饲养密度和饵料密度分别为15～20尾/L和2000～9000只/L对花鲈稚鱼生长和存活应该是适宜的.     

乳酸对海水鱼类细胞系CHSE生长和代谢的影响

在鲑鱼胚胎细胞(CHSE)培养中,低乳酸浓度(1．1～6．14mmol／L,相应渗透压为644～673kPa)对细胞生长无明显影响,主要的代谢特征基本不变;在高乳酸浓度(13．1～41,58mmol／L,相应渗透压为701～944kPa)下培养,细胞生长受到抑制,代谢发生明显变化。乳酸对cHsE细胞生长的抑制作用主要由乳酸导致培养基pH下降和渗透压增加引起。在CHSE细胞批培养中,维持正常的pH,7mmol／L的乳酸浓度,不会明显抑制CHSE细胞的生长。     

中国红豆杉悬浮细胞高密度培养

采用３０ｇ／Ｌ起始糖浓度,通过在细胞对数生长后期补料的方法成功地在２５０ｍＬ摇瓶和１．５Ｌ搅拌式生物反应器中进行了细胞高密度培养,经２０ｄ培养,细胞干重超过２５ｇ／Ｌ。在反应器培养中,次生代谢产物紫杉烷的产量较低。通过高密度培养,明显增加了细胞量,还可以提高反应器中紫杉烷的产量。