卵黄缓冲液4℃保存人精液后的精子存活时间变化

探讨了卵黄缓冲液4℃保存后人类精子存活时间的变化。结果表明，经卵黄液处理24h，复温后在第6、12h观察，精子活动率迅速降低，存活时间缩短。提示卵黄液在改善穿卵率的同时，亦存在使精子丢失存活趋于同步的效应。     

冷藏于4℃的小鼠卵母细胞的受精能力研究

本研究探讨了冷藏于4℃的小鼠卵母细胞的受精能力，NIH雌鼠用10单位的PMSG和10单位的HCG进行超排。卵母细胞和卵丘细胞复合物（OCC）从小鼠输卵管收集，然后，OCC团块转移到Whittingham’s液进行体外受精，或移入Whitten’s液进行冷藏。精子从成熟的雄性小鼠的附睾尾挤出并孵育在37℃中获能。用于体外受精的卵子分为3组。新鲜的卵子是注射HCG后13h收集而得。19h的卵子是注射HCG后19h收集的。冷藏的卵子是在注射HCG后13h收集，并藏存于4℃水浴中6h。授精后观察卵子的结构形态、极体和卵裂情况。授精后次日卵发生卵裂作为受精发生…     

金黄地鼠卵冷冻保存的初步研究

人精子一去透明带地鼠卵穿透试验（HOPT）在国内外广泛应用于评价人精子的生育潜力,但实施检测尚存在实验周期长,动物超排获得卵子往往难与精子完成制备的时间相一致等问题。为此,应用冷冻保存的金黄地鼠卵可以克服这些不足。本研究应用程序控制生物冷冻仪,探讨金黄地鼠冷冻保存的可行性。冷冻保护剂为二甲基亚砜（DMSO）,降温冷冻为5步程序。卵子解冻后用渗透压递减洗涤脱除DMSO。冷冻保存卵采用卵子形态学和精子穿卵率评价。结果表明,冷冻保存后约47％的卵子保持近似对照组的形态,53％的卵子表现出细胞结构损伤或异常。与对照…     

受精的分子生物学研究

随着分子生物学的发展，人们在揭示受精现象的分子生物学机理方面，有新的发现，例如，在小鼠卵子外层鉴定出一种特异的分子结构，即精子受体蛋白，它在整个受精的过程中起着非常重要的作用，人类的受精过程与其它哺乳动物很相似，其基本模式是初期大量精子在卵子表面疏松的粘附，其次是与外层受体结合，卵子表面的精子受体蛋白是位于卵子外层一种透明的非细胞性糖蛋白结构中，称之为卵透明带结构，而每一精子表面，也具有一种特异的卵子结合蛋白，这种特异的卵子结合蛋白与卵表面的精子受体蛋白结合，即精卵结合，它是有种类特异性的，卵表…     

合浦珠母贝受精细胞学观察

用醋酸－地衣红染色制片的方法对合浦珠母贝卵子减数分裂和受精过程进行了详细的细胞学观察。精子入卵前，卵子停留于第一次减数分裂中期。精子入卵后，卵子开始成熟分裂，在海水温度２２℃的条件下，授精后２２ｍｉｎ及３９ｍｉｎ绝大部分卵子分别完成第一次减数分裂和第二次砬数分裂，排出第一极体和第二极体，雌雄原核分别形成，其染色体逐渐凝集，形成两组染色体，最后在卵裂的赤道板上联合，７１ｍｉｎ后，大部分卵子完成第一次     

保存液及保存条件对中华绒螯蟹精子存活率的影响

以精子存活率和精子密度作为判据，研究了低温（4 ℃）条件下6种保存液体外保存中华绒螯蟹精子的效果.精子存活率采用伊红染色法检测，六种保存液分别为无钙离子人工海水I、无钙离子人工海水II、海水等渗NaCl溶液、无菌中华绒螯蟹生理盐水、海水等渗KCl溶液和海水等渗葡萄糖溶液.结果显示，六种保存液中海水等渗KCl溶液和海水等渗葡萄糖溶液的保存效果最差，保存2 d后精子即全部死亡，而两种无钙离子人工海水的保存效果较好，其中以无钙离子人工海水II的效果尤佳，其保存6 d后的精子存活率达92.19%，精子密度亦保持较高水平；故无钙离子人工海水II是中华绒螯蟹精子短期体外保存的理想保存液.在此基础上以无钙离子人工海水II作保存液，研究了精子密度、保存液pH值和渗透压对保存效果的影响.结果显示，不同精子密度的保存效果差异显著，其中以106～107个/mL的保存密度效果最好，在保存2 d后精子存活率仍保持在95 ％以上；在7~10的范围内保存效果较好，保存15 d后精子存活率均在90%以上；在以NaCl配制的渗透压范围为500～1 000 mOsmol/kg H2O的10个梯度保存液中，渗透压在750～850 mOsmol/kg H2O的范围内保存效果最好，该条件下保存15 d后精子存活率仍在75 ％以上.以上结果证实，中华绒螯蟹精子适宜的保存条件为：精子密度为106～107个/mL，渗透压范围为750～850 mOsmol/kg H2O，pH值为pH 7~10.     

近江牡蛎受精细胞学研究

用醋酸－地衣红染色的方法对近江牡蛎人工授精的卵子减数分裂和受精过程进行了详细细胞学观察。精子入卵前，卵子处于第一次减数分裂的前期（胚泡期），精子入卵后，胚泡消失，然后进行两次减数分裂，在海水温度为２８．８℃的情况下，授精后３３ｍｉｎ和４５ｍｉｎ，绝大部分受精卵已排出第一极体和第二极体，雄原核可在第一极体排出后及第二极体排出前任何时期内形成，雌雄原核以联合的方式将两组染色体合并，授精后１ｈ，大部分卵     

人工四倍体鲤鲫成熟卵受精过程的扫描电子显微镜观察

以人工四倍体鲤鲫卵子和普通红鲤精子为材料进行人工受精，在受精后的不同时间以扫描电子显微镜观察卵子对精子的应答反应、受精孔形态、数量与大小以及受精过程等超微结构特征. 结果表明，四倍体卵子动物极的卵壳上仅有一个受精孔,但受精孔区域有5—6个似小山丘状的嵴状结构，而鲤却完全没有这种结构. 研究证实：四倍体鲤鲫成熟卵属单受精孔、单精受精类型，其特异的嵴状形态结构可作为区分普通鲤的标记表型.     

黄腹角雉精液的低温保存

1999— 2 0 0 3年从 17只笼养黄腹角雉 (Tragopancaboti)采集精液 ,稀释后分别保存于 4℃的冰箱和 - 196℃液氮中 .在 4℃条件下 ,保存于生理盐水、C 2液、Lake液、Beltsville液等不同稀释液中的精液 ,其精子存活状况相差很大 ,其中保存于Beltsville液中的精子存活率 (S)最高 ,4 8h后仍有 6 0 %以上的活精子 .在精液的冷冻保存方面 ,受降温过程中精子内外渗透压的变化和结晶的影响 ,且对于冷冻保护剂 (二甲基亚砜 ,DMSO)的体积分数 (φ)以及降温速度的选择非常重要 :DMSO的 φ过高 (如 10 % )或过低 (如 1% ) ,都会大幅降低冷冻后精子的S ,实验发现 φ为 4 %的DMSO最适于黄腹角雉精液的冷冻保存 ;以不同的速度降温 ,也显著地影响着精液的保存效果 (P <0 .0 5 ) .     

青虾精子超低温冷冻保存技术的研究

本文对青虾精子的超低温冷冻保存技术进行了研究.采用台盼兰染色法检测低温冷冻后青虾精子的活力,研究了3种稀释液(壬氏液,Kurokura extender,D-20)和3种冷冻保护剂(8%DMSO,12.5%甘油,10%甲醇)对青虾精子在超低温冷冻保存时的保护效果,以及不同保存时间后青虾精子活力的变化.结果表明,青虾精子以壬氏液为稀释液,添加8%DMSO作为抗冻保护剂,4℃平衡30 min,-20℃平衡15 min,-80℃平衡15 min后投入液氮中保存,解冻时将冷冻管浸入55℃水浴中10~15 s至半融取出自然解冻,精子能维持60%的存活力.本研究为青虾精子冷冻保存库的建立提供了实验依据和理论基础.     

条石鲷精子诱导大黄鱼减数分裂雌核发育

为了探究条石鲷精子最适紫外灭活剂量及其诱导大黄鱼雌核发育的效果,利用Ringer氏液将条石鲷精子稀释40倍后,置于辐射强度1 330～1 350μW·cm-2的紫外灯下进行灭活,然后与正常大黄鱼卵子进行人工授精和冷休克处理(水温3℃,受精2 min后,冷休克10 min)。结果表明:条石鲷精子最适紫外灭活剂量为80 mJ·cm-2,随着照射剂量的增加,条石鲷精子表现出典型的Her-twig效应。利用流式细胞仪检测倍性,未经冷休克处理的受精卵全部为单倍体,冷休克处理的均为二倍体,表明精子灭活有效。性腺组织切片结果显示了雌核发育群体的全雌性。实验结果表明:条石鲷精子可作为一种合适的激活源,诱导大黄鱼的雌核发育。     

运用计算机辅助分析检测超低温保存的真鲷（Pagrosomus major）精子的质量

采用电脑辅助分析（CASA）检测二甲基亚砜(DMSO)作为抗冻剂超低温保存的真鲷精子运动特征及总运动率与受精率、孵化率的关系.以12%—21% DMSO作为保护剂超低温保存2周的精子解冻激活10s后，运动精子百分率与鲜精的没有显著的差异，而且超低温保存过程没有明显的改变其运动速度和运动方式.然而超低温保存却显著地降低了冻精运动持续的时间，激活后30s冻精总运动率显著低于鲜精，激活后60s降至（52.1±9.2）%.我们以标准化的最佳精卵比500∶1对超低温保存的精子进行人工授精实验，发现冻精总运动率与受精率（r=0.869）、孵化率（r=0.826）呈显著的正相关.实验结果显示CASA系统可以客观地检测超低温保存的真鲷精子质量，进一步证明了CASA在精子质量检测中简单、快速、准确的优点，因此该方法在鱼类精子超低温保存研究中具有广阔的应用前景.     

短额负蝗的饲养

对短额负蝗的饲养方法进行了研究，包括卵的获得、卵的越冬保存、卵化及室内外饲养。卵的越冬保存采用3种方法，（1）将卵保存于花盆土中，室温下越冬；（2）卵在室外土中越冬；（3）将卵保存在4℃的冷藏箱中越冬。于第二年3月中旬将卵转入25℃恒温箱中进行孵化，孵化率分别为99．2％、98．5％和92．1％。3种方法无明显区别。孵化后以天然饲料饲养。     

不同保存液对兔门静脉收缩力的影响

将去除和保留内皮细胞的门静脉，分别置于4℃的UW（University of Wisconsin）液和Krebs液中保存，在36℃ Krebs液和去甲肾上腺素作用条件下观察不同保存时间对门静脉收缩力的影响。结果表明：去除内皮细胞的门静脉，无论是在Krebs液中还是在UW液中保存，其收缩力均随保存时间的延长而下降，72h分别为30%和65%；而保留内皮细胞的门静脉，其收缩力均随保存时间的延长而增大，Krebs液中保存优于UW液,72h后分别为213%和213%和118%，无论有无内皮细胞，门静脉在UW液和Krebs液中保存，其收缩力以UW液中保存的最接近刚离体时的水平。     

日本用冷冻干燥的大鼠精子成功实现人工授精

日本京都大学研究小组日前宣布，他们在动物实验中，成功利用冷冻干燥技术，使在冰箱内保存5年的大鼠精子与卵子实现受精，并产下幼鼠。     

羔山羊的超数排卵及体外受精

以ＦＳＨ或ＦＳＨ－ＬＨ四种不同处理方法对２９只６８～１１０日龄羔山羊进行超排处理，结果共采集卵泡卵母细胞７０８枚，平均每只羔羊采卵２４．４枚．卵母细胞经体外培养２４ｈ后有８１．２％的卵发育为成熟卵．分别用经钙离子载体Ａ＿（２３１７８）或肝素进行获能处理的精子对体外培养成熟的卵子进行体外受精，结果精子穿入卵率分别为５４．８％和３４．４％，发育至２～４细胞胚的卵裂率分别为２８．６％和４１．９％．采用ＦＳＨ－ＬＨ（肌注）进行超排处理得到的卵子经体外受精处理后，其卵裂率明显高于采用其它超排方法得到卵子的卵裂率．     

生态因子对蚤状潘休眠卵萌发率的影响

蚤状(Daphniapulex)休眠卵在不同生态条件下累积萌发率的结果显示:萌发温度为20℃～25℃时萌发率较高,缺氧保存的休眠卵能够萌发,而有氧保存的不能萌发;曝气自来水作为萌发液萌发率较高,过滤池水较低,而曝气水和休眠卵形成时的原液居于二者之间;休眠卵缺光几乎不能够萌发,萌发率与光照时间长短无关(p>0 05);休眠卵保存大约1个月左右萌发率较高;带水低温萌发率较高,干燥低温次之,常温干燥保存最低.     

运用计算机辅助分析检测超低温保存的真鲷(Pagrosomus major)精子的质量

采用电脑辅助分析(CASA)检测二甲基亚砜(DMSO)作为抗冻剂超低温保存的真鲷精子运动特征及总运动率与受精率、孵化率的关系.以12%-21%DMSO作为保护剂超低温保存2周的精子解冻激活10 s后,运动精子百分率与鲜精的没有显著的差异,而且超低温保存过程没有明显的改变其运动速度和运动方式.然而超低温保存却显著地降低了冻精运动持续的时间,激活后30 s冻精总运动率显著低于鲜精,激活后60 s降至(52.1±9.2)%.我们以标准化的最佳精卵比500∶1对超低温保存的精子进行人工授精实验,发现冻精总运动率与受精率(r=0.869)、孵化率(r=0.826)呈显著的正相关.实验结果显示CASA系统可以客观地检测超低温保存的真鲷精子质量,进一步证明了CASA在精子质量检测中简单、快速、准确的优点,因此该方法在鱼类精子超低温保存研究中具有广阔的应用前景.     

黑眶蟾蜍(Bufo melanostictus)卵胶膜中乳酸脱氢酶同功酶的研究

本研究采用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,从黑眶蟾蜍的卵胶膜中检出了乳酸脱氢酶同功酶。本实验表明卵胶膜中的乳酸脱氢酶同功酶不参与卵子的糖代谢过程,但可能在精子穿透卵胶膜的过程中帮助精子糖酵解而获得ATP。这需要进一步的实验来证明。     

盐度及温度对红鳍笛鲷精子活力的影响

研究不同盐度和温度对红鳍笛鲷(Lutjarus erythopterus)精子活力的影响,并比较了室温保存和低温保存时精子的活力．实验共设置9个盐度梯度和5个温度梯度．结果表明,精子活力的最适盐度为32,此时,精子的快速运动时间最长8．50min,精子寿命也最长,为11．09min,在盐度低于15的情况下,精子活力丧失;最适温度为25℃,此时精子的快速运动时间最长7.72min,精子寿命也最长,为10．9min．在室温(25℃)条件下,红鳍笛鲷精子活力随保存时间的延长而下降,保存到15．5h后的精子失去快速运动的能力;在低温0～4℃条件下,红鳍笛鲷精子寿命可长达72h。