复制酶基因介导的抗病毒烟草植株的研究

将构建的携带烟草花叶病毒（ＴＭＶ）５４ＫＤ蛋白基因及黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）３’端缺失０．９Ｋｂ的１．６Ｋｂ片断复制酶基因植物表达载体ｐＢＩＣＴ，导入根癌农杆菌３１１ＳＥ系，用叶圆盘法转化烟草，在含有卡那霉素的选择性培养基上诱导生芽、生根，得到２８株成活苗．移入大田后，随机挑选４．株植物，提取植物总ＤＮＡ，经ＰＣＲ扩增、Ｓｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测，结果４株植物中都有复制酶基因的整合，而未经转化的对照组植物则没有．转基因植株在大田试验中表现了良好的抗烟草花叶病毒及黄瓜花叶病毒能力．     

山东省科技成果选介

TS制剂能有效地防治植物病毒病,促进植物生长,提高产量。特别对烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒、番茄花叶病毒、麦子黄矮病毒、玉米谷子红叶病等病毒病害防治有特效;对牧草、林木、果树等病毒病害防治效果也显著。TS粉剂为白色粉末,具有可湿性,其有效成份含量为2.5％,技术指标符合国家鉴定推荐标准.     

苜蓿花叶病毒RNA_23′端cDNA转基因烟草及其抗病性研究

将本室克隆的编码复制酶基因3′端约1/2序列及其3′端非编码区的苜蓿花叶病毒中国分离株(AlMV-Ch)RNA23′端cDNA,重组到植物表达载体pROKII中,通过致瘤农杆菌(A-grobacteriumtumefaciens)介导,以叶圆片为转化材料,转化普通烟草,并获得了转基因植株.经卡那霉素抗性选择、PCR检测目的基因证明AlMVRNA23′端基因已整合到转基因烟草的基因组DNA中.转基因植物的攻毒试验表明转基因植株对苜蓿花叶病毒产生高水平的抗性.     

芜菁花叶病毒崇明大白菜Y_(12)分离株的生物学鉴定

上海郊区青菜上流行的病毒病,经过近几年的研究,初步明确病毒主要属于以下三个类群:烟草花叶病毒(群)(TMV)、芜菁花叶病毒(T_PMV)和黄瓜花叶病毒(CMV).1980年前徐来升等已自青菜上分离出属于TMV群的长叶车前花叶病毒上海分离株(RMV(?));1980～1981年徐来升等又自崇明大白菜上分离出芜菁花叶病毒崇明分离株     

用斑点免疫结合法检测转化的烟草植株中的TMV—CP和CMV—CP

1982年,Hawkes 等人仿照分子生物学中点杂交(dot hybridization)的方法发展了斑点免疫结合测试技术(DIBA)用于检测单克隆抗体。本实验就 DIBA 应用在检测转基因烟草。烟草用发根农杆菌 Ri 质粒介导,将烟草花叶病病毒外壳蛋白基因(TMV—CP)和黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因(CMV—CP)导入烟草的叶片外植体中,通过对外植体的培养,得到愈伤组织,从愈伤组织进而获得了再生植株,对再生植株进行检测导入的外壳蛋白基因的表达量。     

苜蓿花叶病毒RNA2 3''''端cDNA转基因烟草及其抗病性研究

将本室克隆的编码复制酶基因3′端约1／2序列及其3′端非编码区的苜蓿花叶病毒中国分离株(AIMV-Ch)RNA：3′端cDNA，重组到植物表达载体pROKⅡ中，通过致瘤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导，以叶圆片为转化材料，转化普通烟草，并获得了转基因植株．经卡那霉素抗性选择、PCR检测目的基因证明．AIMV RNA：3′端基因已整合到转基因烟草的基因组DNA中．转基因植物的攻毒试验表明转基因植株对苜蓿花叶病毒产生高水平的抗性．     

基因工程与农业（一）

80年代起,基因工程陆续在培育抗病毒植物、抗虫植物、抗除草剂植物,创造植物的雄性不育、培育生产医用蛋白的植物和其他有重要价值的蛋白质的植物以及改变植物的质量性状等方面初露头角,为高产、优质、高效农业的发展展示了诱人的前景。 时至今日,通过向植物转入人类所需要的基因(转基因),得到了一系列符合人类要求的植物(转基因植物)。 一、转基因植物抗病毒 病毒病是植物病害中的一类严重病害,不仅会造成产量大幅度下降,也会影响质量。1986年,美国科学家Beachy等从烟草花叶病毒(TMVUI)株中分离出病毒的外壳蛋白基因,当把这     

国外撷英

植物也会发烧一位名叫克莱恩的比利时科学家最近发现，植物在受到病毒感染时，叶子和小树枝等部位的温度会上升，出现“发烧”症状。这一现象与人在流感等疾病发作前体温升高颇为相似。比利时根特大学植物研究所的研究人员介绍说，他们用红外摄像仪对感染了的花叶病毒的烟草进行了研究，发现在烟草表现出任何可分辨的外在感染症状前至少８ｈ，烟草叶子上实际上还有局部“热点”出现。这些“热点”温度上升幅度可达０.３℃至０.４℃。研究人员认为，植物之所以会“发烧”，很可能与其叶子表面气孔的关闭有关。植物受病毒感染后，其体内水杨酸…     

苜蓿花叶病毒复制酶基因全长cDNA植物表达载体的构建和对烟草的转化

将苜蓿花叶病毒中国分离株(Alfalfa mosaic virus Chinese isolate，A1MV-Ch)的复制酶P2亚基(90 kD蛋白)基因的全长cDNA构建到植物表达载体pROKⅡ中，得到重组植物表达载体pAIMV-FL．用三亲融合法导入农杆菌LBA4404，并转化烟草，经PCR检测，获得了含全长cDNA的转基因烟草植抹．     

邻联茴香胺—H2O2—辣根过氧化物酶伏安酶联免疫分析检测四种 …

将邻联茴香胺（ＯＤＡ）－Ｈ２Ｏ２－辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）伏安酶联免疫分析体系于测定南芥菜花叶病毒、黄瓜花叶病毒、南方菜豆花叶病毒和芜菁地病毒等四种重要植物病毒,其灵敏度高地酶联免疫吸附显色光度法（ＥＬＩＳＡ）。     

苜蓿花叶病毒RNA_23′端cDNA转基因烟草的研究

将克隆的苜蓿花叶病毒中国分离株(AlMV-Ch)RNA23′端cDNA重组到植物表达载体pROKII中,用三亲融合法导入农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)LBA4404,采用叶圆片法转化普通烟草,诱导再生小植株.经卡那霉素抗性筛选和PCR检测,证明AlMVRNA23′端基因已整合到转基因烟草的基因组DNA中.     

N-(1,4-二取代吡唑基)-1,2,3-噻二唑酰胺类化合物的抗植物病毒活性研究

[目的]吡唑和噻唑类化合物是一类具有广泛生物活性的化合物,为了寻找到高活性的杂环酰胺类化合物,对此类化合物做进一步研究.[方法]对已合成的16个N-(1,4-取代吡唑基)-1,2,3-噻二唑酰胺类化合物分别进了抗烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMV)生物活性测试.[结果]初步生物活性表明,部分目标化合物在500 μg/mL浓度下对烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMV)有一定的治疗活性,其中化合物TM-1在浓度为500 μg/mL时,对TMV和CMV的治疗抑制率分别为41.75％和41.25％;化合物TM-13在浓度为500 μg/mL时,对CMV的治疗抑制率分别为45.72％,比对照药剂宁南霉素58.72％略低,具有进一步研究的价值.     

一种快速检测植物病毒RNA蓄积量的竞争PCR方法

用Oligo6.6软件在pUC18上设计1对比目的基因多100～200 bp的内参引物,摸索了目的基因和内参共同扩增的竞争PCR反应条件,测定了嘧肽霉素处理对烟草组织中烟草花叶病毒RNA相对含量的影响,同时用间接ELISA方法验证了该方法.试验结果表明:竞争PCR的方法能够快速、相对准确的测定植物组织中病毒RNA蓄积量的变化情况.     

双抗转CP基因线辣椒对非克隆病毒的抗病性

本试验以转化黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因 (CMV- CP)和烟草花叶病毒外壳蛋白基因(TMV- CP)的线辣椒纯合系作试材 ,比较了转化植株对接种 CMV非克隆株系后抗病性的变化以及转化植株对接种 PVX,PVY和 TEV等非克隆病毒后的抗病性变化 .结果表明 :转化线辣椒能抵抗 CMV非克隆株系的侵染 ,抗病表达特点为系统症状延迟出现 ,显症株率和病害严重度级别大幅度降低 ,接种叶片与新生叶片中的病毒含量明显减少 .对 PVX,PVY和 TEV等非克隆病毒也表达了相同的抗病特点     

植物基因工程：希望与风险并存

如果说,1985年获得的抗除草剂转基因烟草为植物基因工程拉开了序幕,那么,10多年来,植物的基因工程已取得了令人震惊的成果。一批具有抗虫、抗病毒、抗除草剂和其他特殊性状的转基因植物相继问世,玉米、棉花、大豆等主要作物的转基因品种,已从实验室和试验田走向了日常耕作的大田。科学家们预言,植物的基因工程必将带来农业领域的“第二次绿色革命”。然而,和许多科学技术成果一样,转基因植物在给人类带来喜悦的同时,也使人们产生了忧虑。今年2月28日～3月1日,世界经济合作发展组织在英国爱丁堡召开的基因改性食品安全国际论坛上,与会各国的专     

苜蓿花叶病毒RNA23''''端cDNA转基因烟草的研究

将克隆的苜蓿花叶病毒中国分离株(AIMV—Ch)RNA23′端cDNA重组到植物表达载体pROKⅡ中，用三亲融合法导入农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404，采用叶圆片法转化普通烟草，诱导再生小植株．经卡那霉素抗性筛选和PCR检测，证明AIMV RNA23′端基因已整合到转基因烟草的基因组DNA中．     

表达千穗谷Ah-AMP基因的转基因烟草抗病性研究

通过PCR从苋属植物千穗谷(Amarathus hypochondriacus)的总DNA中扩增出苋菜抗菌肽(Ah-AMP)的核基因片段,序列分析结果表明该基因长261bp,编码一个由86个氨基酸组成的Ah-AMP前体多肽.在构建Ah-AMP基因的植物表达载体pBinAH916后,通过根癌土壤杆菌介导方法转化了烟草.转化再生植株和T 1 代转基因烟草的PCR和Southern blot分析表明,Ah-AMP基因已整合到烟草的染色体中,并为单拷贝整合.T 1 代转基因烟草的Northern blot分析结果表明,Ah-AMP基因在转基因烟草中至少在mRNA水平上能正常表达.对T 0 代转基因烟草进行烟草青枯病的抗病性试验,筛选出两株抗性较强的植株.对T 1 代抗青枯病的统计分析发现,其抗病性比起始品种SR1分别提高了2.24和1.62个级别;其病情指数比起始品种降低49.6%和37.3%.对黑胫病也表现一定的抗性,主要表现在推迟发病时间,减缓发病速度上.这些结果表明Ah-AMP基因在植物抗病基因工程研究中可能是一个有潜在应用价值的基因.     

国外撷英

让植物快速生长的方法英国科学家最近发明了一种新的基因工程技术。它通过加快植物细胞分裂速度来促使植物更快地生长。有朝一日，这种技术会导致农作物产量增加，生长期缩短，并减少除草剂的使用。发表在最近一期《自然》杂志上的这项实验是由英国剑桥大学的一个研究小组进行的。他们先从拟南芥属植物──一种经常被用于基因实验的会开花的野草中，提取了一种会促进细胞分裂的基因，然后把基因移殖到一种烟草作物里。这种基因在烟草作物里特别有效，它能大量制造某种蛋白质，这种蛋白质和烟草里原有的其他化学物质一起使烟草根尖和芽尖的细…     

感染烟草花叶病毒烟叶超微病理结构的观察

烟草花叶病是云南省烟草几种最严重的烟草病害之一，为了探索其防治策略，我们从植物超微病理学角度对其进行了研究，酶联免疫及免疫电镜观察表明，我们所采样品的花叶病征是由烟草花叶病毒引起的；在超薄切片中，我们观察到大部分细胞结构结构受到不同程序的破坏，其中尤以叶绿体，线粒体最明显，病变严重的叶片样品中，叶绿体瓦解，基质外流，基粒片层溶解，消失，在其上有大量大小不等的脂质球及淀粉粒沉积和大量的小泡结构，有时     

手性膦酸酯硫脲的抗TMV活性及作用机制研究

采用半叶枯斑法,测定了手性膦酸酯硫脲化合物的抗烟草花叶病毒(TMV)活性,化合物Ⅰ3和Ⅰ14在体积质量分数为500mg/L时对TMV的治疗效率分别为53.2%和56.7%,接近或超过对照药剂宁南霉素(治疗效率为54.3%);通过抗黄瓜花叶病毒(CMV)活性筛选还发现,Ⅰ3和Ⅰ14对CMV的治疗效率分别为53.4%和54.6%,接近对照药宁南霉素(56.3%).在化合物Ⅰ3的作用下,研究了烟草叶片中叶绿素质量分数和3种防御酶(PAL,POD和SOD)活性的变化趋势,结果表明经化合物Ⅰ3处理后烟草植株体内能产生与抗病机制相关的信号,从而启动植株体内一系列的抗病因子,促进烟草体内防御酶系产生,增强了植物的系统抗病性而达到抗TMV的效果.同时,通过分子对接考察了化合物Ⅰ3和Ⅰ14作用于病毒大分子TMV可能的活性靶标,说明氢键在抗病毒活性中发挥重要的作用.