低温对中缅树鼠句肝脏、BAT总RNA含量的影响

肝脏和BAT是小型哺乳动物体内重要的产热器官。中缅树Qu肝脏、BAT重量及肝脏和BAT总RNA含量在冷驯化过程中出现先降低再增加的趋势。冷驯化4h-7d肝脏总RNA含量与对照组相比，变化均不显著，但冷驯化14d时显著上升；BAT总RNA含量从1h到8h有下降趋势，从24h开始显著上升并持续至14d。在冷驯化过程中，中缅树Qu肝脏RNA含量较BAT的增加快，但BAT RNA含量的增幅较肝脏大。表明中缅树Qu肝脏对急性冷暴露的反应要比BAT快，但其BAT的拉产热能力强于肝脏。文章的实验结果表明，低温能够诱导中缅树Qu BAT和肝脏重量和总RNA含量增加，从而使其适应性产热增加，能够更好地适应其生存环境。     

富含多糖番茄果实组织中总RNA的有效提取方法

本文介绍了一种从富含多糖的番茄果实组织中提取总RNA的有效方法,其产率约为每200 m g组织80μg RNA,并且RNA的吸光值的比值A260/A230在1.5~2.0之间,A260/A280在1.6~1.9之间.提取的RNA能够用于RT-PCR反应.这种方法也能有效地应用于富含次级代谢产物的真菌总RNA提取.     

白刺总RNA提取方法的研究

以不同西伯利亚白刺组织为材料 ,利用TRIZOL试剂快速提取法、异硫氰酸胍法、苯酚法和CTAB法提取白刺总RNA ,通过RNA的产率、纯度、电泳图谱等分析来确立适用于白刺总RNA分离的方法 研究结果表明 ,CTAB法提取的RNA具有 2 8SrRNA、 18SrRNA和 5SrRNA三条较清晰的条带 ,很少有降解 ,其A2 6 0 /A2 80为 1.893～ 1.90 1,A2 6 0 /A2 30为 1.80 7～ 2 .4 87 具有较高的纯度 其他三种方法获得的RNA纯度较低 ,降解严重 ,有较多小分子和盐存在 ,RNA无明显条带出现 ,而是以小分子RNA弥撒状分布 将CTAB法提取的RNA逆转录成cDNA ,使用随机引物进行PCR扩增 ,PCR条带清晰 ,分布均匀 ,背景小 该结果进一步证明了CTAB法提取的RNA具有很高的质量与纯度 ,可以满足下一步的研究     

荷花花瓣总RNA的提取方法

以荷花花瓣为材料,在比较CTAB-LiCl法和Trizol法的基础上,针对荷花花瓣富含多糖、多酚的特点,在RNA提取过程中加入去多糖步骤,改良了CTAB-LiCl法.结果表明,改良CTAB-LiCl法能有效地去除多糖,提取到的RNA 28 SrRNA亮度约为18SrRNA的二倍,A260/A280比值为1.98,A260/A230比值为2.36,RNA产率为685.3ng/μL,说明利用改良CTAB-LiCl法从荷花花瓣中提取的RNA质量好、产率高、完整性好.     

香花槐各组织总RNA提取方法的改良和优化

为探索香花槐各组织总RNA提取的最佳方法,以实验苗圃中的香花槐为实验材料,在比较了Trizol试剂法和常规CTAB法的基础上,建立了香花槐不同组织的最适提取方法.改良CTAB法利用高质量浓度的β-巯基乙醇和合适质量浓度的聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)来防止RNA提取过程中多酚的氧化,然后增加苯酚/氯仿抽提次数来去除香花槐叶片和茎皮过多蛋白质.改良Trizol试剂法在根皮中加PVP研磨成白色粉末,可以有效地防止反应液褐化.各组织优化方法经琼脂糖凝胶电泳检测,所提取的总RNA的28S、18S条带清晰明亮,无降解;其A260nm/A280nm值为2.0,表明提取的总RNA质量较好.     

日本沼虾血淋巴RNA提取方法的改进

介绍了一种提取日本沼虾(Macrobrachium nipponensis)血淋巴RNA的改进方法.针对日本沼虾血淋巴中RNA含量较少,易被降解的问题,比较了常规的血淋巴RNA提取方法和改进后的RNA血淋巴提取方法,并进行了血淋巴酚氧化酶的扩增.结果表明,用改进的方法提取的RNA降解少,含量多,纯度高,可用于进一步分子生物学的操作,有着重要的实际意义.     

DNA聚合与RNA转录联用分子机器的改进

建立了一个集成DNA聚合和RNA转录过程,能够重复产生RNA适体片段,并结合孔雀石绿产生荧光信号的分子机器,并探索了此分子机器在检测DNA方面的应用.转录产生的大量孔雀石绿适体序列被释放到溶液中,并可以与孔雀石绿结合产生荧光,实现信号的放大.85μL体系中的聚合转录的最适条件为：DNA聚合酶10 IU（0.118 IU·μL-1）,RNA聚合酶60 IU（0.706 IU·μL-1）,反应时间为3h.在上述条件下,荧光信号随着引发DNA用量的增加而增大.     

核糖核酸及其降解物对小鼠发育、免疫调节以及镇静催眠作用的影响

本研究以灌胃法分别以RNA及其降解物溶液饲养小鼠,比较观察了RNA及其降解物对小鼠生长发育、免疫调节和镇静催眠作用的影响.实验发现,饲养RNA的小鼠的毛色、体重和睾丸较对照有明显的促进作用;饲养RNA降解物的小鼠对毛色有明显的促进作用,但对体重和睾丸增重不显著;RNA具有显著的镇静催眠作用,RNA降解物镇静催眠作用不显著;RNA及其降解物具有显著的免疫促进作用,RNA降解物在增强小鼠腹腔巨嗜细胞的吞噬功能和血清溶血素的溶血能力方面更优于RNA,而在促进体内淋巴细胞转化方面,RNA显著增加淋巴母细胞数,RNA降解物的作用不显著.以上试验结果证明,RNA促进小鼠的生长发育,显著提高免疫机能,具有显著的镇静催眠作用;RNA降解物对机体机能的影响与RNA不完全相同,提示RNA可能对机体有两种作用方式一是未经消化道酶解就通过某种途径起调节促进作用;二是通过肠道的消化吸收作为机体合成自身RNA的原料,促进个体生长发育和免疫机能的提高.     

适于cDNA-AFLP的黑木相思组培苗总RNA快速提取方法的建立

针对黑木相思富含多酚、多糖等次生代谢物质的特点,以其组培苗为试材,采用改良CTAB裂解法、硼砂-SDS裂解法、改良异硫氰酸胍裂解法、CTAB-异硫氰酸胍裂解法、改良CTAB-异硫氰酸胍裂解法等5种不同的提取方法提取其总RNA.结果发现:改良CTAB-异硫氰酸胍裂解法能有效地控制多酚、多糖、蛋白质以及DNA等对所提取总RNA的污染,所得总RNA质量高、完整性好.紫外分光光度检测,A260/A280比值为1.96～2.00,A260/A230比值1.98～2.20,总RNA得率为118.4～213.6μg.g-1,电泳检测,28SrRNA亮度约为18SrRNA的2倍,所提RNA质量可以满足dscDNA合成和cDNA-AFLP等后续分子操作要求.     

香蕉不同组织中总RNA提取方法的研究

针对香蕉组织中多糖、多酚等次生物质含量高的特点，以香蕉根、茎、叶、果实为试材，对其总RNA提取进行研究．比较了SDS法、改良SDS法、改良CTAB法和Trizol试剂盒法提取总RNA的效果，结果分析表明：改良SDS法能从香蕉根、茎、叶中获得质量高、完整性较好的总RNA，而改良CTAB法对果实的提取效果较佳，所得A260／A280均高于1．8，A260／A230大于2，0，28 S rRNA带的亮度约是18 S rRNA的2倍．其产率在根、茎、叶中均在400μg·g^-1以上，果实中可达49．34μg·g-^1.以上2种方法所得的总RNA均能满足RTPCR、Northern blot和cDNA文库建立等分子生物学研究，且具有快速、简便易行、成本较低的特点，适合于富含多糖、多酚的植物材料．     

调节circRNA内的miRNA结合位点以提高其翻译效率（英文）

环状RNA(circRNA)是具有共价闭合的环状结构的RNA，其中有些circRNA具有翻译能力。然而，调节circRNA翻译效率的方法及其应用仍需我们进一步探索。本文利用T7 RNA聚合酶和优化的PIE方法，转录形成含有CVB3 IRES翻译起始元件和荧光素酶蛋白编码序列的RNA，并在体外环化形成环状RNA。我们将环状RNA转染到细胞中，并成功翻译成具有活性的荧光素酶。在荧光素酶编码序列两侧插入miRNA结合位点显著降低了circRNA的翻译效率。随后萤火虫荧光素酶编码序列中的miRNA结合位点的同义突变导致体外合成的circRNA翻译效率增加。我们还证明了特定miRNA结合位点的突变也可以增强合成circRNA的翻译效率。进一步的体内实验通过生物发光成像表明，miRNA结合位点的同义突变促进了体外合成circRNA在体内的翻译。本研究表明，调节circRNA内的miRNA结合位点影响了circRNA的翻译效率，这有望作为未来临床成像应用的多功能工具。     

皂土对RNA的有效分离和保护作用的初步研究

皂土-SDS RNA提取方法,是一种能广泛应用的RNA提取方法,能从富含多糖多酚的麻疯树,富含RNase 的动物肝脏,以及霉菌等多种RNA提取困难的动、植物与微生物材料中,成功提取出高质量的RNA,A260/A280在1.8以上．皂土对RNA酶具有高效吸附效应,与RNAsin比较,发现皂土抑制RNA酶强度比进口的同类产品更佳。同时,实验表明此皂土RNA酶抑制剂对RT-PCR等分子生物学后续实验的并无影响。结论：皂土成本低廉,可作为一种有效的RNA抑制剂.     

小儿扁桃体淋巴细胞Poly（A）—RNA的制备及其cDNA的合成

采用盐酸胍法从经PHA诱导的小儿扁桃体淋巴细胞中提取总RNA,经Oligo(dT)-纤维素柱层析制备了Poly(A)-RNA。经蔗糖线性密度梯度超速离心步骤,富集了含IL-2mRNA的Poly(A)-RNA。经麦胚无细胞体系翻译实验表明,富集后的Poly(A)-RNA具有良好的模板翻译活性,其~3H-亮氨酸参入活性是对照的5.1倍。又以此富集了的Poly(A)-RNA为模板,按照Watson和Jackson的最新方法合成了小儿扁桃体淋巴细胞的双链cDNA。经碱性凝胶电泳检查,用此方法合成的cDNA长度最长的超过了IL-2的cDNA长度。     

He—Ne激光对小麦RNA及可溶性蛋白合成的影响

采用不同功率密度和辐照时间的He-Ne激光处理小麦萌动种子,研究了其早期的生物学效应,结果显示：一定剂量的He-Ne激光照能促进小麦的萌发,并使其中的可溶性蛋白合成及RNA含量增加,在辐照剂量相同条件下,以不同功率密度与辐照时间进行处理所产生的生物效应不同,其中功率密度的影响辐照时间大,He-Ne激光的最佳辐照功率密度为319mW/cm^2,最佳辐照时间为2min。     

改进TRIzol一步法提取中华绒螯蟹窦腺总RNA

中华绒鳌蟹窦腺组织个体很小,RNA含量较少,利用TRIzol一步法提取其总RNA效果较差,且解剖过程中RNA易降解.本文对TRIzol试剂盒说明书的提取过程进行了适当改进,有效提高了窦腺总RNA的产率,减少了RNA降解量,延长了RNA的储存时间.该方法对于低丰度RNA提取尤为有效.     

小RNA合成技术与小RNA药物研究进展

小RNA是一类长度20～24 nt、通过RNA-RNA相互作用调控目标基因的非编码RNA,其作用靶点广泛,能够多途径调节致病基因表达,已经成为新药研发热点。小RNA药物的研发依赖于RNA原料的获取,为此总结了化学合成、体外转录合成及体内生物合成3种小RNA合成方式,重点介绍了使用si-RNA结合蛋白表达siRNA、rRNA支架、tRNA支架及改良tRNA支架4种小RNA生物合成技术;提出利用杂合tRNA支架以生物发酵的方式能够大规模生产重组小RNA,该方法具有活性高、成本低、带有天然修饰、安全性高等优点,为临床RNA药物原料来源提供了备选方案。此外,归纳了美国食品药品监督管理局批准上市的14种小RNA药物以及当前在研小RNA药物的最新研究进展,分析了小RNA药物所面临的挑战及未来发展方向,以期加深对小RNA合成技术和小RNA药物研究进展的理解。     

Post-transcriptional gene silencing signal could move rapidly and bidirectionally in grafted Arabidopsis thaliana

RNA-MEDIATED GENE SILENCING IS A UNIVERSAL GENE- REGULATION SYSTEM FUNDAMENTAL IN BIOLOGICAL PROCESSESAND PHENOMENA OF THE DOUBLE-STRANDED RNA (DSRNA) TRIGGERED SEQUENCE-SPECIFIC MRNA DEGRADATION[1―3]. RNA SILENCING OCCURS IN A BROAD RANGE OF EUKARYOTIC …     

RNA研究的新进展

RNA研究的新成果不断出现和有关RNA操作新技术的应用是进入21世纪以来分子生物学研究的重要突破之一。依据国内外的大量最新资料,主要述评RNA研究中所揭示的新理念、反义RNA技术应用进展、RNA干扰等新突破和新技术的研究进展,包括植物、动物、医学等各个领域的内容。     

反义RNA

1981年美国NIH的Tomizawa在细茵中发现了一种新的RNA分子,即反义RNA。反义RNA是指其核苷酸序列可以与其靶RNA(主要是mRNA)互补杂交产生双链RNA,影响靶RNA的正常加工修饰、翻译等过程,从而调控基因的表达的一类RNA分子。后来的研究均证明在原核生物中普遍存在这种RNA。1984年,Izant和Weitraub将这种RNA定义为反义RNA。随后,1986年Williams发现,在真核生物细胞中也存在自然的反义RNA。不同的