种子蛋白电泳技术

种子蛋白电泳是指通过特定的电泳方法对种子蛋白进行分离和鉴别的一种技术,最常用的是酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。聚丙烯酰胺凝胶电泳作为一种高分辨率的分析鉴定技术,在蛋白质、多肽、核酸等生物大分子的分析中一直广泛使用,通过种子蛋白电泳获得的指纹图谱在测定良种质量(真伪、纯度)防止伪劣种子流入市场,保护我国名、优、特种质资源及育成的知识产权和育种家们的权益等方面,均具有重要意义。     

用蛋白质组学技术分析家兔MODS血清蛋白质组的方法初探

应用蛋白质组学技术比较家兔肠源性多器官功能障碍综合征(MODS)模型复制前后的血清蛋白质组表达差异,探索该技术在家兔肠源性MODS研究中应用的可能性.取家兔肠源性MODS模型复制前后血清各50 μL,去除高丰度蛋白后用丙酮将洗脱液中的蛋白沉淀,加入水化液使沉淀中的蛋白充分裂解,离心后取上清液上样.双向电泳后银染,用PDQuest7.4软件进行胶图分析,比较两组血清双向电泳图谱中的差异蛋白点.家兔肠源性MODS前后血清双向电泳图谱清晰,分辨率高,重复性好,可以满足进一步研究的需要.其中11个点在复制MODS后表达上调,8个点下调.复制家兔肠源性MODS前后血清双向电泳图谱存在显著差异;初步建立的家兔血清蛋白质双向凝胶电泳技术,将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础.     

大鼠(Rattusnorvegicus domestica)八种器官的蛋白质图谱分析

用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS -PAGE)技术分析了大鼠脑、心脏、肺、肝脏、胃、肾脏、脾脏和肌肉的蛋白质图谱 ,为以大鼠为材料的实验研究提供了一些基础资料。     

蛋白质组学及其相关技术的研究进展

对蛋白质、蛋白质组、蛋白质组学、蛋白质组学相关技术(尤其是双向凝胶电泳技术)作以简要介绍，并对孽领域近年来的发展动态进行了综述．     

蛋白质组研究进展

蛋白质组学是在基因组研究由结构基因组学转入到功能基因组学的背景下产生的．蛋白质组是指一个有机物所有的全部蛋白质．蛋白质组研究中使用双向凝胶电泳技术分离蛋白质，质谱技术鉴定蛋白质．蛋白质组研究可应用于基础研究和应用研究，尤其在生物医学领域前景美好．蛋白质组研究将带来生命科学的巨大变化，并将深刻地影响和改变人类的生活．     

沉默Vsx1基因后金鱼胚胎的差异蛋白质组学研究

Vsx1基因是与金鱼眼睛空间模式形成相关的调控基因和二倍体依赖型机制的候选目标基因.为进一步探究Vsx1在金鱼胚胎发育过程中的功能及其调控方式,采用反义寡核苷酸技术抑制Vsx1的表达,应用双向凝胶电泳(2-DE)进行蛋白分离,经PDQuest软件图谱分析,质谱分析初步鉴定,获得了Vsx1沉默引起的13个差异蛋白质.如Prohibidn-2(PHB2)、Nme2 protein等,并对这些差异蛋白质可能直接或间接地受到Vsx1的调控机理和Vsx1在金鱼胚胎发育过程中的功能进行了初步的理论分析,为进一步阐明Vsx1的功能和调控机制奠定了良好的基础.图3,表2,参17.     

杨树接种溃疡病菌Botryosphaeria dothidea 后蛋白质表达差异分析

应用双向凝胶电泳技术,分析了抗病毛白杨和感病北京杨接种溃疡病菌Botryosphaeria dothidea前后的蛋白质表达差异。通过比较两个树种接菌前后的双向凝胶电泳图谱,结果得到在两树种之间共有35个3倍蛋白质差异点,其中接种前毛白杨与北京杨相比上调蛋白4个,下调15个;接种后相比则上调蛋白7个,下调9个。同一树种内,毛白杨接种后与对照相比检测到8个上调蛋白,6个下调蛋白;北京杨接种后与对照相比有8个上调蛋白、10个下调蛋白。对这些差异蛋白产生条件及含量进行分析,笔者认为接菌前抗病毛白杨与感病北京杨相比上调蛋白可能与杨树抗溃疡病的组成型抗病机制有关,接菌后抗病毛白杨与感病北京杨相比上调蛋白可能与杨树对溃疡病的诱导型抗病机制密切相关。最后利用质谱技术鉴定出其中的4个差异蛋白分别是核酮糖二磷酸羧化酶小链、预测蛋白、过氧化物歧化酶、异戊烯二磷酸-异构酶,这些差异蛋白可能与杨树对溃疡病的抗性有一定关系。     

应用比较蛋白组学技术筛选乳腺癌血清标志物

 为了寻找乳腺癌血清标志蛋白标志物,本研究用试剂盒去除血清样品中的高丰度蛋白,通过固相pH梯度双向凝胶电泳分离乳腺癌病人血清和非乳腺癌血清,银染显色,分析比较电泳图谱寻找差异蛋白.用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱测定差异蛋白的肽指纹图谱,MASCOT软件分析确定为何种蛋白,然后用蛋白印迹验证与乳腺癌发生关系密切的差异蛋白.本研究获得了分辨率高、重复性好的双向电泳银染图谱,得到3个差异明显的蛋白,经肽指纹分析并结合数据库查询,初步鉴定为人血凝级联反应中的关键酶、人体细胞凋亡蛋白抑制剂样蛋白ILP-2、人体HP蛋白.蛋白印迹研究表明ILP-2在乳腺癌血清中的含量明显高于非乳腺癌血清样本,该蛋白有可能是乳腺癌标志物.     

变性梯度凝胶电泳技术在海洋微生物分子生态学中的应用

变性梯度凝胶电泳技术是近年来研究微生物分子生态学的有利工具,因其具备可靠、简便、可重复等优势,被广泛应用于海洋微生物群落的多样性和动态性分析。文章综述了基于PCR的变性梯度凝胶电泳技术的基本原理、技术步骤、影响因素及其在海洋微生物群落多样性和动态性研究的应用现状。     

COC1/DDP亚细胞中波形纤维蛋白的肽质谱指纹分析

目的寻找与鉴定卵巢癌耐药株中的差异表达蛋白质。方法应用高分辨二维凝胶电泳分离卵巢癌细胞中差异表达的波形纤维蛋白,并通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对其进行分析与鉴定。结果获得了分辨率和重复性均较佳的凝胶电泳图谱,图像分析显示波形纤维蛋白表达明显下调。结论与其他方法相比,应用凝胶电泳和生物质谱联用技术分析与鉴定未知蛋白具有简单快捷的特点。     

拟南芥全细胞蛋白质样品制备及其双向电泳条件的优化

对双向电泳方法进行了改进, 包括对样品的制备、 双向电泳参数的选择等关键步骤进行优化. 实验发现, 采用乙酸铵 甲醇沉淀拟南芥全细胞蛋白质, 同时结合高伏时、 长时间的等电聚焦可以获得高分辨率、 重复性好的蛋白质双向电泳图谱. 银染后, 经Phoretix 2D v2004软件分析可分辨出1 000以上蛋白点.     

双向电泳检测技术综述

目前蛋白质组学（proteome）正在成为分析化学的研究热点，双向聚丙烯酰胺凝胶电泳（2-DE）以其高通量和极高的分辨率成为蛋白质组学的核心技术，本文综述了不同类型的双向电泳检测技术的原理，比较分析了各种技术的优势和不足，并对双向电泳技术在蛋白质组学中今后的发展作了展望．     

一种适合杨树叶片的蛋白质提取方法

高质量的蛋白样品制备是进行双向电泳的前提条件.杨树叶片中因含有丰富的多酚、色素、多糖等物质,给蛋白质的提取带来了困难.为了找到一种适合杨树叶片的蛋白质提取方法,以南林895杨为实验材料,采用三氯乙酸-丙酮沉淀法对杨树叶片蛋白质进行提取.对所提取的蛋白分别用考马斯亮蓝染色法和银染法进行检测,得到了良好的双向电泳图谱.     

小鼠肝组织可溶性蛋白质双向电泳条件的建立

研究的主要目的是建立小鼠肝组织可溶性蛋白质组的双向电泳技术,以等点聚焦为第一向,垂直SDS-PAGE为第二向进行双向电泳,并对样品处理方式、蛋白上样量、凝胶浓度和染色方法等关键因素和环节进行了比较研究,通过实验条件的筛选和优化获得了较满意的双向电泳图谱。采取的方法具有较高的分辨率和重复性,为进一步实验打下良好基础。     

Two-dimensional gel electrophoresis analysis of the proteomes expressed in the human hepatoma cell line BEL-7404 and normal liver cell line L-02

Proteome analysis technology has been used extensively in conducting discovery research of biology and has become one of the most essential technologies in functional genomics. The proteomes of the human hepatoma cell line BEL-7404 and the normal human liver cell line L-02 have been separated by high resolution two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) with immobilized pH gradient isoelectric focusing (IPG-IEF) in the first dimension and sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) in the second dimension (IPG-DALT). The resulting images have been analyzed using 2-D analysis software. Quantitative analysis reveals that 7 protein spots are detected only in hepatoma BEL-7404 cells, 14 only in L-02 cells, and 78 protein spots show significant fluctuation in quantity in both cell lines (P< 0.01). These protein spots have been displayed on a proteome differential expression map. Analysis for the reproducibility of 2-DE indicates that the positional variability in the IEF dimension is 0.73 mm, while the variability in the SDS-PAGE dimension is 0.44 mm, and the quantitative variability is 17.6%–19.2%. These results suggest that the reproducibility of 2-DE has been suitable for the study of differential expression of proteomes. Proteome differential expression maps can be useful tools for disease diagnosis, drug-target validation analysis and biological process elucidation.     

运动发酵单胞杆菌蛋白质双向电泳技术的建立

运动发酵单胞杆菌(Zymomonas mobilis)具有高乙醇耐受力和高乙醇转化率,产醇率也较高,是一种很好的生物能源.运用双向电泳技术对运动发酵单胞杆菌蛋白质组进行了一系列单因子实验,经过验证获得了重复性好、分辨率高的双向电泳图谱,为该菌的比较蛋白质组学的研究,发现并克隆产乙醇率高的基因奠定了基础.     

适用于小麦叶片总蛋白分析的双向电泳技术

双向电泳技术越来越成为植物蛋白质组研究中的关键技术,样品制备、固相预制胶条水化、等电聚焦及SDS—PAGE都是影响双向电泳结果的重要步骤,本研究以晋麦47号小麦叶片为研究材料,在样品除盐、预制胶条水化方式、第二向SDS—PAGE电压选择方面进行了探索与优化,通过比较双向电泳图谱,建立适用于小麦叶片总蛋白质分析的双向电泳技术体系．结果表明：样品经多步除盐并加长除盐时间后进行双向电泳,蛋白能较好地被分离,2-DE图谱蛋白点较多,分辨率较高;IPG胶条先后经被动水化与主动水化比仅主动水化的2-DE图谱蛋白点损失少;第二向SDS—PAGE中电压选择120V较200V的2．DE图谱蛋白点拖尾少,纹理现象少．     

Proteomics of a toxic dinoflagellate Alexandrium catenella DH01: Detection and identification of cell surface proteins using fluorescent labeling

Alexandrium catenella DH01 is a toxic dinoflagellate species that is able to not only produce paralytic shellfish toxins,but also cause harmful algal blooms along the coast of China.In this study,we presented a new protocol for specific labeling and detection of the cell surface proteins(CSPs) of A.catenella DH01 cells using CyDye difference gel electrophoresis(DIGE) fluor minimal dyes.CSPs were identified using two-dimensional gel electrophoresis(2-DE) and MALDI TOF-TOF mass spectrometry(MS).The results showed that the fluorescent cyanine dye Cy3 could specifically label the CSPs of A.catenella DH01,with minimal labeling of intracellular proteins.Among three protein extraction methods evaluated,the Trizol method was the most efficient to extract CSPs with respect to protein spot number and resolution.Forty-one CSPs were separated and identified from A.catenella DH01 by 2-DE,in which 14 were identified in the protein database using MALDI TOF-TOF MS analysis.This work represents the first attempt to investigate the CSPs of A.catenella using the CyDye DIGE fluor dyeing method that provides a potentially important tool for future comprehensive characterization of CSPs and elucidation of the physiological functions of CSPs in dinoflagellates.     

双向凝胶电泳分析动脉粥样硬化大鼠心肌蛋白表达图谱

采用双相凝胶电泳分离大鼠冠状动脉总蛋白，胶态考马斯亮蓝G-250染色，GS-800凝胶扫描仪获取凝胶图像，并用PDQUEST软件分析，检测出2626个蛋白质斑点，并且得到不同条件下的蛋白质组的差异图谱，在相同的参数设置下，不同谱图间的匹配斑点数为1841，匹配率达70．1％以上，测量了凝胶蛋白斑点的在IEF、和SDS—PAGE方向上的位置偏差；对比分析了两种心肌组织的差异蛋白，发现33个蛋白质斑点只在正常大鼠心肌蛋白检测到表达；46个蛋白点在两种细胞中表达量上有显著变化，为从分子水平上理解心血管类疾病的发病机制，寻找防治药物和药物的构效关系的进一步研究开拓了新的途径，同时为深入研究AS的发病机制和药效研究提供参考数据。