嗜盐嗜碱菌的研究新进展

嗜盐嗜碱菌是嗜盐古菌中重要的组成类群,不仅为微生物生理,遗传和分类及生命科学和相关学科许多领域的研究提供新的课题,也为生物进化,生命起源的研究提供新的材料.文章主要讨论了嗜盐嗜碱菌的分类和嗜盐嗜碱机制方面的研究进展.     

嗜盐嗜碱菌的研究进展

嗜盐嗜碱菌是嗜盐古菌中重要的组成类群,不仅为微生物生理,遗传和分类及生命科学和相关学科许多领域的研究提供新的课题,也为生物进化,生命起源的研究提供新的材料。文章主要讨论了嗜盐嗜碱菌的分类和嗜盐嗜碱机制方面的研究进展。     

1株嗜碱克氏菌属菌株的分离及系统发育分析

从埃及盐碱土样分离得到1株革兰氏阳性的兼性嗜碱菌株YIMT0003，不产荚膜和芽孢，不具游动性．生长温度范围为室温(约20℃)到37℃，最适生长温度为28℃，生长的pH值范围为pH5～12。对NaCl的耐受范围为1％～5％，DNA的G C mol％为69．44％．16S rRNA全序列分析的结果表明，该菌株与Kocuria polaris CMS76^T亲缘关系最近，但两者在形态、生理生化特征上有差异。有可能是克氏菌属的一个潜在新种。     

克雷伯氏菌产物耐受突变株的发酵工艺

克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)是1,3-丙二醇(1,3-PD)生产菌。研究了经60Co诱变获得的一株产物耐受突变株KpA6010进行了发酵初期供氧时间、供氧与否和发酵过程中后期维持甘油浓度对1,3-PD生产及副产物形成影响。结果显示,采取全厌氧发酵和中后期维持甘油质量浓度20 g/L的工艺对1,3-PD生产有利。5 L罐全程厌氧补料分批培养结果表明,1,3-PD的产量、摩尔得率和生产强度分别达到70.81 g/L、0.649和2.083 g/(L.h),较出发菌分别提高了54.3%、52.0%和50.7%。     

含有嗜杀质粒的核融合缺陷突变株原生质体制备及再生条件的研究

利用由藤黄节杆菌(Arthrobacter latevs)分泌的,以β—1.3葡聚糖酶为主的酵母细胞壁溶解酶(Zymolyase),对含有嗜杀质粒的核融合缺陷突变株5045(α,his4,karl—1[KIL—K_1]rho~+)进行破壁,得到该菌株破壁,再生的最佳条件。为嗜杀酵母原生质体融合育种提供了依据。     

真养产碱杆菌H16突变株利用葡萄糖为碳源高产聚—β—羟基丁酸 …

利用常规紫外诱变技术,处理真养产碱杆菌Ｈ１６,采用葡萄糖为碳源的选择培养基进行筛选,获得了能高效利用葡萄糖为原高产聚－β－羟基丁酸的突变菌株。摇瓶试验表明,该突变株能利用多种碳源积累ＰＨＢ,ＰＨＢ积累量达６．７ｇ／Ｌ。     

吉它霉素产生菌阻断突变株的筛选

吉它霉素产生菌ＳＫ４－２经亚硝基胍诱变处理，经过分离培养和多次筛选，获得了吉它霉素生物合成阻断的突变株，用生物发酵测定，化学薄层分析及生理特性分析测定，确定了突变株的吉它霉素的生物成途径被阻遏，从而失去了产生抗生素的能力。     

嗜热侧孢霉2441纤维素酶产酶条件优化及突变株选育

为了提高嗜热侧孢霉2441纤维素酶的产量,对产酶条件进行了优化,测定了酶的特性,对选育抗葡萄糖效应突变株和中温型突变株进行了探索.实验中酶活力测定以微晶纤维素、CMC-Na和水杨苷为底物,DNS法测定还原糖;产酶条件优化采用正交试验设计,以微晶纤维素酶活为指标;通过NTG诱变和UV诱变选育抗葡萄糖效应突变株和中温型突变株.结果表明:产酶条件优化后,嗜热侧孢霉2441的纤维素酶活极显著提高(P0.01);2441的微晶纤维素酶、CMC-Na酶和β-葡萄糖苷酶的最适作用温度分别为60℃、65℃、70℃,最适作用pH值均为5.5,温度高于70℃及碱性条件下,酶活力显著下降;选育的抗葡萄糖效应突变株N20-01,微晶纤维素酶活提高13.203%,CMC-Na酶活提高47.176%,β-葡萄糖苷酶活提高119.517%;选育的中温型突变株U40-03,在32℃培养时与2441在45℃培养时相比,微晶纤维素酶活提高11.411%,CMC-Na酶活提高29.484%,β-葡萄糖苷酶活提高54.759%.     

真养产碱杆菌H16突变株利用葡萄糖为碳源高产聚-β-羟基丁酸的研究

利用常规紫外诱变技术〔１〕，处理真养产碱杆菌（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｅｕｔｒｏｐｈｕｓ）Ｈ１６，采用葡萄糖为碳源的选择培养基进行筛选，获得了能高效利用葡萄糖为碳源高产聚－β－羟基丁酸（ＰＨＢ）的突变菌株。摇瓶试验表明，该突变株能利用多种碳源积累ＰＨＢ，ＰＨＢ积累量达６．７ｇ／Ｌ。     

大肠杆菌嗜盐α-淀粉酶基因的分子改造及其酶学特性

【目的】对大肠杆菌Escherichia coli嗜盐α-淀粉酶基因进行改造,并探索嗜盐α-淀粉酶的嗜盐特性。【方法】从非嗜盐的大肠杆菌JM109中克隆到一个嗜盐α-淀粉酶基因k6并进行重组表达。通过同源建模,确定Na+结合位点上的氨基酸残基,并对相应位点进行定点突变。最后对突变酶的酶学性质进行研究。【结果】相对于野生酶,突变酶更加嗜盐,其最适NaCl浓度由2mol/L增加到3mol/L,最适pH值为7,最适温度为50℃,酶活力为4 831U/mg,提高近4倍。经HPLC检测,突变酶与2%(W/V)可溶性淀粉反应后的产物为葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖的混合物。【结论】嗜盐α-淀粉酶基因k6的嗜盐特性与Na+结合位点具有直接联系。     

5种黄精属植物的蛋白指纹分析

本文用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ—ＰＡＧＥ）技术分析了５种黄精属植物根状茎和叶的蛋白指纹．结果表明：（１）它们的根状茎均含有３８．５、２８、１８．６ｋＤ蛋白质;（２）根状茎和叶的蛋白质种类有很大差异;（３）５种黄精属植物各含有自己特有的蛋白质,它们在本属植物物种鉴定中一定参考价值．     

银杏叶片蛋白质含量动态变化的电泳分析

利用单向电泳和双向电泳技术，以及考马斯亮蓝染色法研究了银杏雌、雄株叶片中的营养贮藏蛋白质组分和不同季节叶片的可溶性蛋白质含量。结果表明：银杏叶片中可溶性蛋白质含量在生长旺季较高，10月下旬开始下降，至11月中旬降至最低，表明叶片脱落时养分发生了转移。电泳图谱的分析发现，随叶片可溶性蛋白质含量的变化，银杏叶片中的几种蛋白质发生变化。单向电泳结果表明，55kD蛋白在银杏雌株中表现为11月初消失，在雄株中表现为11月中旬消失，32kD蛋白在雌雄株中都表现为11月后消失；而双向电泳的研究除证实55kD蛋白、32kD蛋白发生类似变化，还发现18kD蛋白也发生变化，即11月中旬在雌株中发生明显减少现象，在雄株中明显减少则出现在11月初。     

牛乳脂球膜蛋白的研究

中国黑白花奶牛鲜乳及麦洼牦牛干乳期乳腺分泌物，高速离心后得到乳脂．以０．９％ＮａＣｌ振荡洗涤３次后，分别用３ｍｏｌ／ＬＫＣｌ、０．２％ＳＤＳ和５ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｔｏｎＸ－１００增溶乳脂球膜蛋白，以ＰＥＧ６０００浓缩，采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分离膜蛋白，结合银染色方法，获得了分子在１２～９２ｋｄ的几种膜蛋白组分。     

一种分析有丝分裂期蛋白的新方法

介绍了一种分析细胞有丝分裂任一时期蛋白质组成及各时期蛋白动态变化的方法，该法将细胞的显微分离，微量蛋白电泳和银染结合起来，通过显微分离可以获得无期它时期细胞污染的任一时期细胞，通过微量蛋白电泳和银染，可以分析其蛋白组成，并通过显微分离100个小麦根尖末期细胞证明了其可行性。     

一株具有群体感应的膜污染层优势菌分离鉴定

利用膜生物反应器(MBR)对模拟生活污水进行处理,随着反应器的运行,系统膜污染不断加剧,膜通量逐渐下降,运行15 d后已无法维持膜通量的稳定状态.从MBR膜污染层分离得到37株优势菌株,以紫色杆菌Chromobacterium violaceum 026为报告菌,其中1株菌能够产生短链酰基化高丝氨酸内脂(AHLs)群体感应信号分子.经薄层层析(TLC)和高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)检测进一步表明该菌株所产生的信号分子为C4-HSL,经16S r DNA测序比对,初步鉴定为Aeromonas hydrophila.     

血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的影响因素分析

血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳常因多种因素影响而出现区带分离不清晰、拖尾、区带歪斜、区带呈锯齿状或弯曲等现象。该文结合教学实践,对造成不理想电泳图谱常见影响因素进行分析,提出相应的解决方法,有助于改进实验教学效果。     

膜污染机理及其控制技术

综述了膜污染的定义,膜污染机理、预防膜污染和清洗的方法,介绍了膜污染控制技术的进展及展望。     

超氧阴离子自由基(O_2~-)导致红细胞膜蛋白交联作用的机理探讨

用邻苯三酚在碱性条件下自氧化产生的超氧阴离子自由基(O_2_~-)处理人红细胞膜导致膜蛋白交联形成高分子聚合物(HMP)。用一定量的超氧化物歧化酶(SOD)预处理红细胞膜,HMP明显减少。用巯基抑制剂N-乙基马来酰胺(NEM)预处理红细胞膜,则HMP几乎消失。用特异性标记巯基的荧光探针N-(3-芘)马来酰胺(N-[3-P]NEM)来研究经不同浓度邻苯三酚处理的红细胞膜的荧光强度。结果表明,随着邻苯三酚浓度增高,荧光强度相应降低。上述结果提示,O_2~-可能主要是通过氧化巯基导致膜蛋白交联并形成HMP。     

高核酸高蛋白酵母选育及发酵生态学研究

通过紫外线嘧啶复合处理选育到一株高核酸高蛋白酵母，并进行了营子及其它培养条件的选择性试验，确定了优化的培养条件，摇瓶培养核酸１４．７５％，蛋白质含量达６３．６７％。１．５Ｌ发酵罐发酵试验能很好地重现摇瓶效果及冰箱保存活试验证明该菌株有好的遗传稳定性。     

超氧阴离子自由基(O_2~-)导致红细胞膜蛋白交联作用的机理探讨

用邻苯三酚在碱性条件下自氧化产生的超氧阴离子自由基(O_2~-处理人红细胞膜导致膜蛋白交联形成高分子聚合物(HMP).用一定量的超氧化物歧化酶(SOD)预处理红细胞膜,HMP明显减少.用巯基抑制剂N-乙基马来酰胺(NEM)预处理红细胞膜,则HMP几乎消失.用特异性标记巯基的荧光探针N-(3-芘)马来酰胺(N-[3-P]NEM)来研究经不同浓度邻苯三酚处理的红细胞膜的荧光强度.结果表明,随着邻苯三酚浓度增高,荧光强度相应降低.上述结果提示,O_2~-可能主要是通过氧化巯基导致膜蛋白交联并形成HMP.