1,25(OH)2D3对卵巢癌细胞HO8910生长的抑制作用

为探讨1,25-二羟维生素D3[1,25-dihydroxy vitamin D3,1,25(OH)2D3]对人卵巢癌细胞HO8910生长和增殖的作用,选用人卵巢癌细胞HO8910进行体外培养。培养时添加不同浓度的1,25-二羟维生素D3,采用MTT比色法测定细胞生长抑制率,采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)进行细胞周期及细胞凋亡分析。结果:不同浓度的1,25-二羟维生素D3对HO8910细胞生长均起到不同程度的抑制作用(P<0.05),并呈浓度和时间依赖关系;能使细胞周期时相发生改变,G1期细胞增多(P相似文献   

2-ME抑制人子宫内膜癌细胞株增殖的研究

目的　探讨2-甲氧雌二醇(2-ME)对人子宫内膜癌细胞株KLE细胞体外增殖和凋亡的抑制作用.方法选用人子宫内膜癌细胞株KLE进行体外培养,实验组加入不同浓度2-ME的培养液,对照组不含2-ME.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察2-ME对人子宫内膜癌细胞株KLE增殖的抑制作用;药物作用后的克隆形成实验;电子显微镜(电镜)观察细胞形态变化;流式细胞仪(FCM)观察细胞的凋亡率及细胞周期的变化.结果2-ME浓度为10.0～50.0μM时,明显抑制KLE细胞的增殖(P<0.01),并具有时间依赖性和剂量依赖性.2-ME作用后G0/G1期细胞增加,并伴随G0/G1期细胞的增加,出现细胞凋亡峰和凋亡率的升高(P<0.05).电镜下观察到KLE细胞染色体边集、核固缩、凋亡小体.结论2-ME对人子宫内膜癌KLE细胞株增殖有抑制作用,并能促进其凋亡.     

水飞蓟宾联合5-FU抑制胃癌MGC-803细胞增殖及机制

目的:研究水飞蓟宾联合5-氟尿嘧啶(5-FU)抑制胃癌MGC-803细胞增殖,探讨其协同增效作用及机制.方法:采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度的水飞蓟宾对人胃癌MGC-803细胞,人正常肝L02细胞的增殖抑制作用,并计算IC20,IC50;采用IC20浓度的水飞蓟宾联合不同浓度的5-氟尿嘧啶,观察对人胃癌MGC-803细胞增殖抑制作用;水飞蓟宾单独或联合5-FU作用于胃癌MGC-803细胞,碘化丙锭(PI)单染色检测细胞周期改变,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blotting检测细胞周期和凋亡相关蛋白的表达.结果:MTT法检测显示,水飞蓟宾对胃癌MGC-803细胞有增殖抑制作用,且呈剂量-效应关系,对人正常肝L02细胞增殖抑制作用较弱.水飞蓟宾作用于胃癌MGC-803细胞48 h的IC20、IC50浓度分别为144.6、214.7μmol/L;水飞蓟宾与不同浓度的5-氟尿嘧啶联合作用于MGC-803细胞48 h,可提高MGC-803细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性,增敏5.73倍.流式结果显示,无论是单独使用水飞蓟宾、5-氟尿嘧啶还是水飞蓟宾与5-氟尿嘧啶联合使用都能使细胞抑制在G0/G1期和出现凋亡细胞群;Western blotting结果显示,水飞蓟宾与5-氟尿嘧啶联合使用,能使细胞的细胞周期相关蛋白P15表达升高,CDK6表达下降,Bcl-2蛋白家族中抗凋亡蛋白Bcl-2,Bcl-xL表达明显降低,促凋亡蛋白Bax表达基本不变,Casepase-9,Caspase-3活化降解.结论:水飞蓟宾提高胃癌MGC-803细胞对5-FU的敏感性,水飞蓟宾在联合5-FU之后能够使MGC-803细胞抑制在G0/G1期,并通过线粒体凋亡途径使细胞发生凋亡.     

几种新的植物甾醇类衍生物对人类癌细胞系增殖的影响

探讨几种新的植物甾醇类衍生物抑制人肝癌细胞系HepG2和人乳腺癌细胞系MCF-7生长及诱导其凋亡的生物学效应.采用形态学观察,溴化二甲噻唑二苯四氮唑(MTT)还原法和流式细胞仪(FCM)检测3种新的植物甾醇衍生物在不同作用时间、处理浓度时,对HepG2和 MCF-7细胞生长的影响.实验结果表明: 3种新的植物甾醇衍生物对2种细胞系的生长具有明显抑制作用,且呈现一定的对浓度和时间的依赖效应,并具有诱导细胞凋亡的功能.     

绿豆胰蛋白酶抑制剂BBI诱导肺腺癌A549细胞凋亡的研究

研究了绿豆胰蛋白酶抑制剂BBI对人肺腺癌A549细胞增殖抑制作用和对肺腺癌A549细胞凋亡的影响.采用MTT法检测绿豆BBI对人肺癌A549细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测和光镜观察绿豆BBI诱导A549细胞凋亡;Western-Blot检测凋亡蛋白Caspase3表达情况.结果显示:绿豆BBI对人肺腺癌A549细胞的增殖有明显抑制作用;绿豆BBI可以促使人肺腺癌A549细胞出现明显的染色质浓缩和凋亡小体,诱导人肺腺癌A549细胞的凋亡.说明绿豆BBI能抑制人肺腺癌A549细胞增殖、诱导人肺腺癌?A549细胞凋亡,实验为绿豆BBI抗肿瘤效应提供了依据.     

2-α-羟基熊果酸对人白血病细胞HL-60的周期阻滞及凋亡作用

利用台盼蓝法、吖啶橙/溴乙锭双染检测法和流式细胞术检测了2α-羟基熊果酸对人急性早幼粒白血病细胞株HL-60的增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果表明,在低浓度（15-30μmol.l-1）时药物抑制HL-60细胞的生长,高浓度（30,35μmol.l-1）对细胞有致死效应,且呈现剂量依赖和时间依赖性;双染分析表明,药物能够诱导细胞凋亡,随着药物浓度增加和处理时间的延长,细胞凋亡率上升,并且伴有少量细胞坏死;进一步用流式细胞术检测,发现在20μmol.l-1时,2α-羟基熊果酸引起明显的G1期阻滞,随着药物浓度升高,周期阻滞作用明显加强。因此,细胞周期阻滞可能是药物抑制细胞增殖进而引起凋亡的原因。     

水飞蓟宾通过上调P15~(INK4B)和P21~(WAF1/CIP1)活化JNK诱导人胰腺癌细胞G1期阻滞及细胞凋亡

目的:探讨水飞蓟宾对胰腺癌As PC-1细胞的增殖抑制作用及其作用机制.方法:MTT法和克隆形成抑制实验观察水飞蓟宾对人胰腺癌As PC-1细胞的增殖抑制作用,碘化丙锭(PI)单染色检测细胞周期改变,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blotting检测细胞周期及细胞凋亡相关蛋白的表达.结果:不同浓度的水飞蓟宾对胰腺癌As PC-1细胞的生长均有抑制作用,且呈剂量-效应和时间-效应关系(P0.05),水飞蓟宾作用于As PC-1细胞48、72 h的IC50浓度分别为224.20、87.25μmol/L;克隆形成抑制实验显示,随着水飞蓟宾浓度增加,As PC-1细胞克隆形成逐渐减少.细胞周期检测结果显示,随着水飞蓟宾浓度的增加,胰腺癌As PC-1细胞出现明显G1期阻滞;水飞蓟宾处理组细胞的周期蛋白Cyclin D1、Cyclin E2、Cyclin A、Cyclin B1表达下降,细胞周期蛋白激酶CDK4、CDK6表达不变,细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制蛋白P15INK4B、P21WAF1/CIP1表达升高,与流式检测的结果相一致.不同浓度水飞蓟宾作用48 h后,出现明显的凋亡细胞群;同时发现Caspase-9、Caspase-3活化降解,Caspase3下游效应蛋白PARP出现切割条带.JNK蛋白表达增加并磷酸化活化,Bcl-2蛋白家族中抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-x L、Mcl-1表达明显降低,促凋亡蛋白Bax表达基本不变,BH3-only蛋白Bclxs、Bid、Bim表达增加.结论:水飞蓟宾明显抑制胰腺癌细胞增殖,通过诱导P15INK4B、P21WAF1/CIP1表达阻滞细胞周期在G1期,并通过诱导JNK活化激活线粒体细胞凋亡途径,进而诱导胰腺癌As PC-1细胞凋亡.     

藏药材纤毛婆婆纳乙酸乙酯提取物的抗癌活性及其机制研究

采用MTT法检测纤毛婆婆纳(Veronica ciliata Fisch.)乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract,VEAE)对五种不同癌细胞(A549,Hela,U20S,MCF-7和SMMC-7721)的增殖抑制作用,筛选出对VEAE最敏感的细胞,并进一步运用DAPI染色、Annexin V/PI双染及荧光定量PCR(qRT-PCR)来探究其作用机制.MTT结果显示,VEAE对五种癌细胞的增殖均有抑制作用,并呈现时间和剂量的依赖效应,其中对MCF-7细胞的抑制作用最为显著,处理48h后其IC50达到最低,为63.42±0.19μg/mL;DAPI染色和Annexin V/PI双染结果发现,VEAE处理MCF-7细胞后,细胞皱缩变圆,凋亡细胞的数量增加,从对照组的5.00%上升到47.45%;qRT-PCR结果表明;VEAE处理MCF-7细胞后,凋亡基因Caspase-3,Caspase-9和Bax的表达上调,抗凋亡基因Bcl-2的表达下调.由此表明VEAE能抑制癌细胞的增殖,诱导细胞发生凋亡,其机制可能是通过调控与细胞凋亡相关基因的表达来实现.     

壳寡糖对Hela细胞的增殖抑制与诱导凋亡

为了明确壳寡糖(COS)对Hela细胞的增殖抑制作用及对凋亡的影响,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测增殖抑制作用,Wrights-Giemsa及吖啶橙-溴乙锭(AO-EB)染色观察凋亡细胞的形态,Annexin V-FITC/PI法检测凋亡率,免疫组化法分析Bax,Bcl-2和Survivin表达量变化.结果显示:不同浓度COS处理Hela细胞均能抑制增殖,5.0mg/mL并作用24h对其增殖抑制率为52.15%(P0.01).Wrights-Giemsa染色显示细胞形态趋近圆形,贴壁能力减弱,出现凋亡小体.AO-EB染色时细胞出现早期和晚期凋亡现象.AnnexinV-FITC/PI检测细胞凋亡率为31.75%(P0.05).免疫组化分析细胞内Bax表达量增加,Bcl-2和Survivin表达量降低.表明COS能够抑制Hela细胞增殖并诱导凋亡,其原因与Bax的上调和Bcl-2与Survivin的下调相关.     

青龙衣中胡桃醌对A-549细胞周期及凋亡影响

探讨青龙衣中胡桃醌（Juglone）对体外培养的人肺癌细胞A-549生长抑制作用及对细胞凋亡和周期的影响.采用MTT法检测青龙衣中胡桃醌对A-549细胞的生长抑制作用,采用激光共聚焦扫描显微镜观察凋亡形态,流式细胞仪分析胡桃醌对A-549细胞周期的影响.MTT法试验结果显示,胡桃醌对体外培养的人肺癌细胞A-549具有明显的生长抑制作用,处理24、48、72 h的IC50值为分别为3.4×10^-5、1.8×10^-5、2.6×10^-6mol/L.凋亡形态观察结果显示,胡桃醌能诱导A-549细胞的凋亡,同时胡桃醌能剂量依赖性的降低A-549细胞的G1期细胞的比例,升高G2期和S期细胞比例,呈G2期和S期阻滞作用.胡桃醌对A-549细胞具有明显的生长抑制作用,阻止周期进程,诱导A-549细胞凋亡.     

Epigallocatechin-3-gallate affects the growth of LNCaP cells via membrane fluidity and distribution of cellular zinc

Objective: To evaluate effects of epigallocatechin-3-gallate (EGCG) on the viability, membrane properties, and zinc distribution, with and without the presence of Zn²⁺, in human prostate carcinoma LNCaP cells. Methods: We examined changes in cellular morphology and membrane fluidity of LNCaP cells, distribution of cellular zinc, and the incorporated portion of EGCG after treatments with EGCG, Zn²⁺, and EGCG+Zn²⁺. Results: We observed an alteration in cellular morphology and a decrease in membrane fluidity of LNCaP cells after treatment with EGCG or Zn²⁺. The proportion of EGCG incorporated into liposomes treated with the mixture of EGCG and Zn²⁺ at the ratio of 1:1 was 90.57%, which was significantly higher than that treated with EGCG alone (30.33%). Electron spin resonance (ESR) studies and determination of fatty acids showed that the effects of EGCG on the membrane fluidity of LNCaP were decreased by Zn²⁺. EGCG accelerated the accumulation of zinc in the mitochondria and cytosol as observed by atomic absorption spectrometer. Conclusion: These results show that EGCG interacted with cell membrane, decreased the membrane fluidity of LNCaP cells, and accelerated zinc accumulation in the mitochondria and cytosol, which could be the mechanism by which EGCG inhibits proliferation of LNCaP cells. In addition, high concentrations of Zn²⁺ could attenuate the actions elicited by EGCG.     

类人胶原蛋白对BHK-21细胞生长的影响

目的研究类人胶原蛋白HLC（Human—like Collagen）对于细胞生长、细胞凋亡、细胞生长周期及细胞形态的影响。方法用体外细胞培养法，选用BHK-21细胞系为实验对象，进行MTT检测、LDH测定、流式细胞分析、形态学观察及统计学分析。结果MTT检测表明0．2，0．3g／LHLC对于细胞生长有显著的促进作用；HLC对于细胞培养液中LDH浓度无显著性影响；经0．1，0．2，0．3g／LHLC作用后的细胞凋亡百分数变化不大，进一步作周期分析，也无显著影响；形态学观察表明0．3g／LHLC对于细胞形态有加长作用。结论HLC可能通过影响细胞膜、增强细胞贴壁生长而促进细胞生长。     

人肝癌细胞骨架网络系统的初步研究

利用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００及其联合（ＮＨ４）２ＳＯ４的抽提技术与ＣｏｏｍａｓｉｅｂｌｕｅＲ２５０染色、免疫酶标技术相结合，体外实验比较研究人肝癌细胞系（ＨｅｐＧ２）细胞骨架网络的分布构像及其中间纤维蛋白构型。结果：人肝癌细胞系（ＨｅｐＧ２）显示其细胞骨架网络的分布构像及其中间纤维对Ｖｉｍｅｎｔｉｎ、Ｋｅｒａｔｉｎ两种抗体均呈现阳性反应。结论：恶性肿瘤细胞的中间纤维蛋白构型可能具有异质性的蛋白分子共表达，这对仅以ＴｒｉｔｏｎＸ－１００加（ＮＨ４）２ＳＯ４的抽提技术进行恶性肿瘤细胞中间纤维蛋白构型分析，是一个必需考虑的问题。     

依地福新抑制Jurkat细胞生长机制的研究

目的观察依地福新对体外培养的Jurkat细胞的生长抑制作用,并进一步探讨其作用机制。方法应用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞周期分布;Annexin V—FITC染色法检测细胞凋亡率。结果不同浓度依地福新处理Jurkat细胞24～96h后,细胞增殖显著受到抑制,并呈现浓度及时间依赖性;1．0μmol／L、5．0ymol／L、10．0μmol／L依地福新处理72h后,Jurkat细胞G0／G1期细胞数量显著增加,S期细胞数量显著降低（P〈0．01）;各浓度组细胞凋亡率均显著增加（P〈0．01）。结论依地福新对Jurkat细胞具有生长抑制作用,其机制与阻滞细胞周期及诱导凋亡有关。     

缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液对Hep G2细胞缺氧耐受性的影响

目的:探讨缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液(HP)对Hep G2细胞缺氧耐受性的影响.方法:用4种浓度的HP作用于缺氧(2%O2)培养HepG2细胞,以同浓度正常小鼠脑匀浆提取液(NP)作对照,检测了在缺氧培养后,Hep G2细胞的MTT值、早期凋亡率(Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测)、晚期凋亡率(Hoechst33258染色荧光显微镜检测).结果:低浓度HP对Hep G2细胞有保护作用,而高浓度HP对Hep G2细胞有损伤作用.结论:HP的作用有浓度依赖性和时间依赖性.     

三维培养体系下EGCG对乳腺癌干细胞迁移性和自我更新的抑制效应

以乳腺癌细胞三维培养体系为基础,探究(-)-表没食子儿茶素-3-没食子酸酯((-)-Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对乳腺癌干细胞(BCSCs)的药理学作用.细胞迁移性实验结果发现,20和80μmol/L EGCG能显著抑制迁移性基因的转录水平,降低通过Transwell穿膜细胞的数量,延缓癌细胞划痕修复时间,抑制癌细胞迁移性.在对BCSCs自我更新研究中,EGCG通过下调干细胞关键基因的转录而抑制癌细胞单克隆形成和克隆形成能力,抑制癌细胞自我更新,并有效降低CD24-亚群BCSCs含量.研究结果表明,在三维培养条件下,EGCG对BCSCs的迁移性和自我更新具备显著的抑制效应.     

百草枯对人肝HepG2细胞生长和周期的影响

为全面理解百草枯(PQ)对人肝的毒性效应,寻找新的方法增强肝对PQ的解毒能力,本文采用显微观察和流式细胞术分析了PQ处理24h对人肝HepG2细胞生长和周期的影响.结果显示,7.21mg/L的PQ处理即可抑制部分HepG2细胞的生长,23.36mg/L的PQ可导致HepG2细胞周期停滞,S期细胞明显减少、G1和G2期细胞明显增多,且细胞生长抑制和周期受阻程度与PQ处理浓度呈正相关.该结果表明,PQ对HepG2细胞的生长和周期具有明显阻滞作用,生长因子类或促增殖类药物可能有助于增强人肝对PQ的解毒能力.     

Quantification of mRNA by RT-competitive-PCR and high performance liquid chromatography

The use of RT-competitive-PCR with high performance liquid chromatography (HPLC) detection to quantify the absolute number of mRNA copies in mammalian cells is reported. As an example, the glutathione transferase (GST)-α mRNA in human hepatoma Hep G2 cells has been estimated. A PCR-generated internal standard was used as a competitor, co-amplified with the GST-α target sequence. The RT-competitive-PCR method was improved by designing target and competitor molecules which differed in only 30 base pairs. This allowed the two sequences to be co-amplified with the same efficiency. This improvement also facilitated a wider ratio to be used than previous methods (target:competitor ratio between 0.2 and 5). Products were baseline separated by HPLC using an ion-exchange column readily quantified at 260 nm. To validate the improved methodology, the effect of a known GST-α inducer, the anticancer drug oltipraz, was shown to induce GST-α mRNA up to 3-fold in Hep G2 cells. The RT-competitive PCR-HPLC method provides a reliable and sensitive way to quantify the amount of specific mRNA with 0.1 ng of total RNA.     

Synergic Inhibition of Lung Carcinoma 95-D Cell Proliferation and Invasion by Combination with(—)-Epigallocatechin-3-Gallate and Ascorbic Acid

In this study, the anti-invasion effects of(-)-epigallocatechin-3-gallate(EGCG) mixed with ascorbic acid(Vc) on human lung carcinoma 95-D cells in vitro were examined and the synergism of the combination of EGCG and Vc was evaluated. Soft agar colony formation assay, cell migration assay, invasion assay, western blot analysis of NF-κB, in situ detection of cellular oxidative stress, and statistical analysis were assessed. The results showed that combining EGCG with Vc could inhibit clone forming rate of 95-D cell by 73.2%, reduce the migration ability of 95-D cell by 65.9%, and decrease the intracellular reactive oxygen species(ROS) level by 76.8%. The results of western blot proved that Vc enhanced the activity of EGCG in inhibiting NF-κB localization. It is speculated that the combination of EGCG and Vc can strongly suppress the proliferation and metastasis of lung carcinoma cells in a synergic manner, possibly with a mechanism associated with the scavenging of reactive oxygen species.     

HMBA对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖和相关基因表达的影响

研究了环六亚甲基双乙酰胺对人成骨肉瘤MG-63细胞的增殖和相关基因表达的影响.实验结果表明HMBA可明显抑制MG-63细胞的增殖,细胞生长抑制率达50.69%,分裂指数抑制率达58.8%,增殖细胞核抗原的表达降低,细胞周期被阻滞在G0/G1期.免疫细胞化学染色结果显示,经HMBA处理之后,与增殖分化调控有关的癌基因c-myc、c-fos、c-erbB-2、mtp53的表达降低、抑癌基因p21WAF1/CIP1、p16、rb的表达升高.研究结果表明,HMBA能够有效抑制人成骨肉瘤MG-63细胞的增殖活动,其对细胞增殖的抑制作用与HMBA下调c-myc、c-fos、c-erbB-2、mtp53等癌基因以及上调p21WAF1/CIP1、p16、rb等抑癌基因的表达,从而调控细胞周期有重要关系.