豌豆胰岛素基因克隆、表达及融合蛋白纯化

将人工合成的豌豆胰岛素(PAlb)基因寡核苷酸片段,通过PCR扩增得到PA1b基因,将此基因克隆到原核表达载体pMAL-p2x中,然后将重组质粒pMA1-p2X-PA1b转化大肠杆菌DH5a,经IPTG诱导进行可溶性表达．以Amylose Resin亲和层析,纯化出融合蛋白MBP-PA1b．经SDS-PAGE及Western印迹证明,融合蛋白MBP-PA1b在大肠杆菌中表达成功,为深入研究PA1b的功能作了准备．     

皮肤特异表达钙调素类蛋白研究进展

钙调素是广泛存在于各种动植物细胞的信号转导分子,近年在皮肤中发现了一些钙调素类蛋白,其分布、特征、功能都与钙调素不同,在表皮的分化发育中发挥重要作用。本文就此作一简单介绍。     

皮肤特异表达钙调素类蛋白研究进展

钙调素是广泛存在于各种动植物细胞的信号转导分子,近年在皮肤中发现了一些钙调素类蛋白,其分布、特征、功能都与钙调素不同,在表皮的分化发育中发挥重要作用。本文就此作一简单介绍。     

重组抗栓人胰岛素基因工程菌高密度发酵研究

通过重组DNA技术构建抗栓人胰岛素突变体基因,并转化入大肠杆菌宿主菌,构建基因工程菌株.通过高密度发酵技术对重组菌株进行大规模培养.通过对培养条件包括温度、溶氧量、pH值、补料等的调整,达到最佳培养状态,进而获得高产量的重组大肠杆菌菌体.检测大量培养重组大肠杆菌的表达率,并对表达产物进行纯化与进一步的理化分析鉴定.     

重组融合蛋白GST-SLT-ⅡeB表达条件的研究

通过在不同温度、不同诱导时间、不同异丙基硫代βD半乳糖苷（IPTG）诱导浓度条件下,对重组大肠杆菌PPSLT-ⅡeB表达的谷胱甘肽S转移酶（GST）与类志贺氏菌毒素Ⅱ型变异体B亚单位（SLT-ⅡeB）的融合蛋白（GST-SLT-ⅡeB）的分析,结果表明在所试条件中,温度是影响表达的主要因素,重组大肠杆菌（PPSLT-ⅡeB）在28℃温度条件下,可以明显表达融合蛋白GST-SLT-ⅡeB. 在IPTG为1mmol     

重组羧肽酶B在胰岛素原C肽制备工艺中的应用

用RT-PCR方法克隆了大鼠羧肽酶原B的cDNA编码序列,将其重组到原核表达质粒pT7-473中,并在大肠杆菌中以包涵体方式获得高表达。SDS-PAGE电泳及灰度扫描显示表达量达菌体总蛋白的35％,表达产物融合了表达质粒上的6His。在变性条件下,经Ni-NTA柱纯化,得到羧肽酶原B,在复性液中进行稀释复性后,胰蛋白酶切得具酶活性的羧肽酶B,然后经DEAE-FF分离纯化获得较纯的羧肽酶B(28．5mg／L),比活为13．5u／mg。用RP-HPLC分析胰蛋白酶 羧肽酶B酶解胰岛素原C肽三聚体的酶解产物,证明该重组的羧肽酶B可替代提取的羧肽酶B应用于胰岛素原C肽的制备工艺中。     

人胰岛素原基因在大肠杆菌中的表达和纯化

将人胰岛素原基因序列(human proinsulin, PI)经密码子优化后与TrxA蛋白融合表达,构建原核表达载体TrxA-PI转入不同大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)、TransB(DE3)和Rosetta-gami(DE3)中。SDS-PAGE显示融合蛋白在3种表达菌株中均有表达,在Rosetta-gami(DE3)中表达量最高,是普通大肠杆菌BL21(DE3)表达量的10倍。通过优化诱导温度等发酵条件,可溶性重组融合蛋白TrxA-PI在Rosetta-gami(DE3)菌株中表达量为3.5 g/L,比未优化时提高约10倍。TrxA-PI用肠激酶酶切后,利用HisTrap FF柱分离纯化PI,经Western-blot检测重组PI具有免疫原性。     

蚯蚓钙调素结合蛋白的研究

以赤子爱胜蚓(Eisenia Foetida)为材料,通过DEAE-Fast Flow离子交换层析、CaM-Sepharose亲和层析,分离纯化得到蚯蚓钙调素结合蛋白(CaMBPs)。纯化的CaMBPs对CaM激活的环核苷酸磷酸二酯酶活性有抑制作用,而且这种抑制作用可通过加入过量的CaM达到完全恢复。SDS-PAGE显示CaMBPs有3条明显主带,在EGTA存在时表现分子量分别为62, 49和30kD。紫外扫描测定含量分别为7.17%,7.31%和51.8%。用生物素-CaM覆盖法检测到3种CaM结合蛋白,与SDS-PAGE结果一致。酶活性测定实验表明在蚯蚓CaMBPs中有Ca²⁺-ATPase活性,但无NAD激酶活性。     

钙调素-人胰岛素原融合体的酶切加工

通过基因工程方法将人胰岛素原突变体偶联钙调素形成融合态重组蛋白质,在该重组蛋白质中设计具有PRESCI蛋白酶酶切位点.制备PRESCI蛋白酶并对钙调素-人胰岛素原突变体重组蛋白质进行酶切加工.研究表明,该重组融合蛋白质可被有效切割,通过蛋白质纯化手段能够有效地将切割后的钙调素与人胰岛素原突变体进行纯化.     

胸腺素α原基因的克隆及在大肠杆菌中的融合表达

胸腺素α原(ProTα)作为一种免疫增强剂,对各种免疫缺陷疾病、病毒感染以及肿瘤都具有一定的作用.此外ProTα可以作为核蛋白参与细胞增殖,在肿瘤的预测、诊断及治疗中有一定应用.根据人胸腺素α原已发表的核苷酸序列,设计了一对特异性引物(P1/P2),应用RT-PCR法从中国人外周血中克隆到ProTα基因,将扩增产物连接到pMD18-T载体中并转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性重组质粒进行序列测定;同时用EcoRI和BamHI双酶切PCR产物,将该基因片断插入经同样双酶切的质粒pGEX 6P-1中,转化大肠杆菌BL21中进行表达.结果表明,克隆到的ProTα基因与参考的氨基酸同源性为99.70%;原核表达产物经过SDS-PAGE电泳分析,融合蛋白分子量为37 ku,主要以可溶形式存在.     

信息融合技术在油气勘探开发中应用浅析

信息融合技术作为一种能够综合分析多源信息的手段,其应用范围越来越广.随着油气勘探开发的进展,应用常规方法很难应对日趋复杂的地面和地下条件.信息融合技术通过对多信息源、多媒体、多格式信息进行综合处理,提供及时、可靠、高效的信息,在油气勘探开发中发挥越来越重要的作用.本文就其基本原理、方法以及在勘探开发中的应用进行了阐述.     

异种钢熔焊接头特征的分形探讨

以异种钢熔焊接头为研究对象 ,探讨了用分形描述熔焊接头特征的可能性 ,结果表明是可行的 .对接头中的熔合线和垂直熔合线的元素分布曲线进行了分形描述 ,并提出综合分维这一新概念     

AhAO2融合蛋白表达、纯化与抗体制备

构建AhAO2基因片段原核表达重组质粒pPROEX-Hta-AhAO2,表达质粒在E.coliBL21中诱导表达,获得His-AhAO2融合蛋白,采用亲和层析与电泳纯化His-AhAO2免疫,新西兰大白兔,获得抗His-AhAO2抗体,West-ern blot检测显示其只与His-AhAO2融合蛋白结合.实验成功制备了抗AhAO2特异抗体.     

rhBMP-6的表达和纯化

骨形态发生蛋白(bone　morphogenetic protein，BMP)—6属于转化生长因子(transforming growth fac-tor)—β超基因家族，在骨的形成中具有重要作用，并受雌激素选择性上调．本研究利用RT—PCR从人胎盘组织中扩增BMP—6成熟肽的DNA片段，克隆到pGEx—5x—1中，构建GST—BMP6融合蛋白表达载体pGEx—BMP—6，转化E.coli DH5a．克隆质粒转化的工程菌，经IPTG诱导4h后，高效表达GST—BMP6融合蛋白，在SDS—PAGE上出现一新蛋白带，分子量约为42kD，约占总蛋白的25％，表达产物以包涵体形式存在．菌体超声破碎，经0．3％N—十二烷基肌氨酸钠(SKL)溶解包涵体，离心后的上清液加入0．6％　Triton　x—100整合SKL，然后利用谷胱甘肽Sepharose—4B亲和层析纯化．结合GST—BMP6的介质经洗涤、xa因子酶切得到纯度达95％的rhBMP—6蛋白。     

一种基于多信息融合的环境探测方法

阐述了一种用于移动机器人导航的采用多信息融合技术进行环境探测的方法,讨论了这种方法的容错能力,并给出了计算机仿真结果．     

盐源山蛭抗凝血蛋白的分离及抗凝血特性分析

以肝素琼脂糖亲和层析和超速离心分离了盐源山蛭的抗凝血蛋白,抗凝血活性试验证明,该蛋白不抑制凝血因子Ｘａ的活性,而显著抑制凝血酶的活性,亲和层析的蛋白洗脱峰与抗凝血酶的活力峰相吻合,因此,盐源山蛭抗凝血蛋白属于凝血酶特异性的抗凝血蛋白。     

蚌蛙蛭抗凝血蛋自的分离及抗凝血特性(英文)

以超速离心和肝素琼脂糖亲和层析从蚌蛙蛭（Batracobdellakasmiana）的粗提取液中分离到2种抗凝血蛋白．抗凝血活性测定证明,这2种蛋白具有显著抑制凝血酶的活性而不具有抑制凝血因子Xa的活性．亲和层析的蛋白洗脱峰与抑制凝血酶的活力峰相吻合;因此,蚌蛙蛭的抗凝血蛋白是属于凝血酶特异性的抗凝血蛋白．这为进一步研究蚌蛙蛭抗凝血蛋白的抗凝血机理及其应用打下了基础．     

斑马鱼GAPDH蛋白片段的原核表达差异分析

为了分析斑马鱼GAPDH基因不同区域原核表达构建的诱导效应差异,应用生物信息技术分析斑马鱼GAPDH分子结构,通过定向删除技术,构建表达部分斑马鱼GAPDH蛋白片段的质粒。通过IPTG诱导,SDS-PAG检测,分析GAPDH基因不同区域构建的蛋白表达差异。结果:引物对ZGCKF/ZGCXR构建的GAPDH重组表达质粒具有IPTG诱导表达效应,而引物对ZGNKF/ZGNXR构建的质粒则不具有IPTG诱导表达效应。因此,为了在原核表达真核蛋白时应考虑过表达的真核蛋白是否会影响宿主的代谢以及是否会导致宿主的抵抗,设计引物时应当选择合适的区域构建重组质粒才能获表达产物。     

人心脏特异性同源异型框基因在大肠杆菌中的表达

Ｈｕｍａｎｃａｒｄｉａｃ ｓｐｅｃｉｆｉｃｈｏｍｅｏｂｏｘｐｒｏｔｅｉｎ (ｈＣｓｘｏｒＮｋｘ2 .5 )ｅｎｃｏｄｅｓａｈｏｍｅｏｂｏｘｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｏｆ32 3ａｍｉｎｏａｃｉｄｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｓｉｘｃｙｓｔｅｉｎｅｓ ,ａｎｄｉｓｃｏｍｐｏｓｅｄｏｆｔｈｒｅｅｄｏｍａｉｎｓ :ｔｈｅＴＮ ｄｏｍａｉｎ ,ｈｏｍｅｏｂｏｘ ｄｏｍａｉｎａｎｄＮＫ2ｂｏｘ[1] .ＨＣｓｘｉｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｈｅａｒｔｉｎａｔｉｓｓｕｅ ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄｍａｎｎｅｒｔｈｒｏｕｇｈｏｕｔｄｅｖｅｌｏ…