龙葵碱对HepG2细胞磷脂酰丝氨酸及断裂DNA研究

研究龙葵碱对肝癌细胞HepG2的诱导凋亡作用.采用倒置显微镜观察形态学变化,Annexin V-FITC联合PI双染法和Tunel法检测龙葵碱诱导人肝癌HepG2细胞凋亡作用.结果发现龙葵碱作用24 h后,贴壁细胞数量减少、体积缩小,变圆等明显凋亡形态;在激光共聚焦显微镜下观察到AnnexinV-FITC阳性信号为绿色荧光,PI为红色荧光;Tunel阳性信号为绿色荧光.表明龙葵碱通过诱导HepG2细胞凋亡达到抗肿瘤的作用.     

介绍一种简易“双盖片”培养瓶

<正> 本文介绍一种简易“双盖片”培养瓶的制作与使用。倒装相差显微镜观察培养的活细胞有许多优点。例如可长时间连续观察和分析细胞的动态,并能同时拍摄显微照片或缩时电影等。但是对培养瓶要有一定的要求,如瓶底和瓶顶玻璃要求平坦,特别是瓶底要求不要超过1.2mm,瓶体本身也不宜过厚,便于更换培养液等。近年国内多采用“双盖片”培养瓶,我们曾见到几种样品,但是多是不能令人满意的。大多     

河蚬提取物对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用

以河蚬(Corbicula fluminea)为材料,经过甲醇抽提,乙酸乙酯萃取等方法得到河蚬提取物(CFE).用MTT法检测其对肝癌细胞株的抑制作用,借助光学倒置显微镜以及流式细胞术考察CFE对细胞的形态及细胞周期的影响.实验结果表明:CFE对肝癌细胞SMMC-7721有增殖抑制作用,处理72 h细胞形态发生了明显变化,其IC50值为70 μg/mL.FMC的结果显示,经CFE处理后的肝癌SMMC-7721细胞出现明显的凋亡峰.这说明CFE有效抑制了体外培养的肝癌细胞增殖,并且能够改变癌细胞的形态及细胞周期的分布,诱导癌细胞出现凋亡.     

近红外荧光染料对胃癌细胞的特异性识别*

测试近红外荧光(near infrared fluorescence,NIRF)染料IR-783对胃癌细胞的特异性识别。将转染荧光素酶luciferase的人胃癌传代细胞SGC-7901皮下移植于裸鼠,7 d后分别使用NIRF染料IR-783和荧光素酶底物进行活体荧光成像和生物发光,测定肿瘤部位ROI(region of interest)值,连续检测并绘制NIRF强度与生物发光强度相关性曲线;选择前期建立的胃癌PDX(patient-derived tumor xenografs,PDX)模型免疫组织化学检测肿瘤组织中CEA与CK8/18的表达,确定移植瘤与原发肿瘤病理学一致性;将SGC-7901细胞和来自PDX模型的胃癌细胞分别培养24 h,分别加入线粒体示踪剂(mito-tracker)或溶酶体示踪剂(lyso-tracker),30 min后加入IR-783染料,在荧光显微镜下观察近IR-783染料在胃癌细胞中的结合部位;将正常胃上皮细胞分别与转染GFP的SGC-7901细胞和来自PDX模型的胃癌细胞共培养24 h后,加入IR-783染料,在荧光显微镜下观察近IR-783染料对胃癌细胞的特异性识别。活体成像结果显示,IR-783染料能够特异性的聚集于人胃癌裸鼠移植瘤部位;NIRF强度与luciferase强度的相关性达99%以上;PDX肿瘤与原发肿瘤中CEA与CK8/18表达均呈强阳性;荧光显微镜下检测到NIRF染料不仅能够特异性识别传代胃癌细胞,同时也能识别来自PDX模型的肿瘤细胞,并优先集聚在肿瘤细胞的线粒体与溶酶体中。近红外荧光染料IR-783能够特异性识别胃癌细胞,可用于胃癌模型的成像研究,是肿瘤治疗的一种潜在工具。     

IGF-ⅡP3脱氧核酶对人肝癌细胞凋亡作用的影响

目的 研究IGF-ⅡP3DRz对肝癌细胞生长的抑制作用.方法 用噻唑蓝比色法(MTT)检测DRz对肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用;流式细胞技术检测分析细胞凋亡;倒置显微镜、光镜Giemsa染色观察细胞形态.结果 DRz作用SMMC-7721细胞24 h后,细胞存活率明显下降,而且脱氧核酶的浓度增加,抑制作用增强(P＜0.01);DRz可诱导SMMC-7721细胞凋亡,细胞形态结构呈现典型的凋亡特征.结论 DRz可通过阻滞细胞周期发展发挥抑制SMMC-7721细胞增殖的作用,DRz还可诱导细胞发生凋亡.     

Mcl-1反义寡核苷酸对肝癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨髓样细胞白血病-1(Mcl-1)反义寡核苷酸(ASODN)对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法:将Mcl-1 ASODN转染入体外培养的肝癌HepG2细胞。用WST-8法检测不同浓度的Mcl-1 ASODN对HepG2细胞增殖抑制率;用流式细胞仪检测Mcl-1 ASODN对HepG2细胞周期和凋亡的影响,用Hoechst33258染色在荧光显微镜下观察HepG2细胞凋亡的形态学改变。结果:Mcl-1 ASODN作用HepG2细胞48 h后,与空白对照组(blankcontrol)和随机寡核苷酸(RODN)对照组相比,Mcl-1 ASODN组能明显抑制肝癌HepG2细胞的增殖和诱导其凋亡(P<0.05),Mcl-1 ASODN组细胞出现S期明显的阻滞;Hoechst33258染色可见大量的细胞核固缩,核碎裂。结论:Mcl-1 ASODN能抑制肝癌细胞的增殖,诱导细胞凋亡。     

佛手叶挥发油对HeLa细胞形态与结构的影响

探讨了佛手叶挥发油对HeLa细胞形态与结构的影响.采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,倒置显微镜、荧光显微镜和电子显微镜观察细胞形态与结构的变化,免疫荧光结合激光共聚焦显微镜观察微管的分布.结果表明:佛手叶挥发油能够抑制HeLa癌细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;不同浓度的佛手叶挥发油处理HeLa癌细胞24 h后,低剂量(200μg/mL)佛手叶挥发油使HeLa细胞皱缩,染色质凝集,出现凋亡小体,微管解聚,表现为典型的凋亡特征;中、高剂量(400和800μg/mL)佛手叶挥发油使HeLa细胞膜裂解,内容物外泄,细胞碎片增多,表明细胞已坏死.     

碳源饥饿对癌细胞和正常细胞增殖的影响

研究了共培养条件下碳源饥饿对癌细胞和正常细胞形态、生长和凋亡的影响.采用细胞体外共培养的方法,实验分4组:对照组(25 mmol/L葡萄糖)及5,1和0 mmol/L葡萄糖组,分别处理共培养条件下的HeLa癌细胞和人脐带正常细胞,在倒置显微镜下观察细胞的形态与生长,吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)双重荧光染色检测凋亡细胞的形态及数量.结果表明:对照组HeLa癌细胞和人脐带正常细胞都分布均匀,贴壁性好,形态饱满,多呈规则的梭形或多角形,折光性好,AO/EB双染绿色荧光分布均匀;实验组糖浓度越低,细胞存活时间越短,细胞收缩变圆并逐渐凋亡,AO/EB双染细胞由绿色荧光逐渐变为橙黄色荧光;相同糖浓度条件下人脐带正常细胞比HeLa癌细胞存活时间更长.说明碳源饥饿使癌细胞先于正常细胞死亡.     

聚乙烯亚胺介导生存素反义核酸体外投递肝癌SMMC-7721细胞的条件优化

目的:探讨聚乙烯亚胺(polyethylene im ine,PEI)作为生存素(survivin)反义核酸(anti-sense oligodeoxynuc leotides,ASODN)的载体投递肝癌SMMC-7721细胞的条件。方法:凝胶阻滞实验筛选PEI与survivin ASODN形成静电复合物的最佳质量比;W ST-8法检测PEI对肝癌细胞的毒性;流式细胞仪及W ST-8法筛选荧光标记的PEI与ASODN在不同质量比时的瞬时转染效率及48 h转染效率;流式细胞仪及荧光显微镜分别检测荧光标记的ASODN以及PEI-ASODN复合物进入细胞的情况;W ST-8法检测血清对PEI转染效率的影响。结果:m(PEI)∶m(ASODN)为0.625∶1~2.5∶1时可以形成电中性状态的静电复合物;PEI终质量浓度≤4μg/mL对肝癌细胞的毒性较小;m(PEI)∶m(ASODN)为0.75∶1时转染效率最高;血清存在对PEI转染效率无明显影响。结论:PEI是一种低毒的ASODN投递载体,其终质量浓度≤4μg/mL可作为肝癌细胞的转染载体,血清条件下m(PEI)∶m(ASODN)为0.75∶1时,PEI携带sur...     

文蛤多肽对体外培养人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用

研究了文蛤多肽对体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用,结果表明,经5.0μg/mL文蛤多肽处理的体外培养的人肝癌细胞(SMMC-7721)生长缓慢,倍增时间延长,细胞生长抑制率达89.4%;处理后的癌细胞形态发生明显改变,处于G0/G1期的细胞明显增多,而S期和M期细胞减少,出现明显的凋亡峰,凋亡率为22.3%.实验结果表明,文蛤多肽能有效地抑制体外培养肝癌细胞的增殖活动,可通过改变肝癌细胞的形态及细胞周期而明显抑制细胞的增殖.     

游泳运动对增龄小鼠肾脏细胞凋亡和自由基代谢的影响

为探讨游泳运动和增龄对小鼠肾脏细胞凋亡及一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性的影响.本实验采用8月龄昆明种系健康小鼠为研究对象,随机分为2组：运动组、增龄对照组,另设2月龄青年对照组.运动组的运动方式为游泳,共训练6周.结果显示,增龄小鼠肾组织中SOD活性与青年对照组相比下降,MDA含量升高,肾脏细胞水平凋亡升高,游泳运动可明显升高增龄小鼠肾组织SOD活性,抑制增龄小鼠肾组织细胞凋亡水平.由此认为,增龄可改变小鼠肾脏细胞凋亡及自由基代谢水平,游泳运动可改善小鼠肾脏随增龄而出现的退行性变化.     

药物依赖性便秘大鼠大肠杯状细胞及5-HT变化的实验研究

目的研究药物依赖性便秘大鼠大肠杯状细胞、免疫反应(immunoreactive,IR)细胞5-羟色胺(5-HT)的形态分布及数量的变化,探讨大鼠大肠杯状细胞、5-HT在药物依赖性便秘的可能作用。方法建立大鼠药物依赖性便秘模型,再采用普通组织学、免疫组织化学SABC法和细胞计数研究大鼠大肠杯状细胞、5-HT免疫反应细胞所发生的形态分布及数量的变化。结果与正常对照组比较,模型组大肠杯状细胞、5-HT细胞数量均减少,且后者免疫染色强度减弱。结论药物依赖性便秘大鼠肠道杯状细胞、免疫反应细胞5-HT的形态分布和数量发生了改变。提示大肠杯状细胞、免疫反应细胞5-HT的改变可能是产生药物依赖性便秘的重要因素。     

应用相差显微镜和扫描电镜对离体培养的大白鼠甲状腺滤泡上皮细胞的研究

利用 Ham's F_(12)培养液对大白鼠甲状腺细胞进行了原代细胞培养,在相差显微镜下观察了培养的甲状腺细胞贴壁及生长情况,还对甲状腺的组织小块贴壁实验进行了反复观察,结果证明,在我们的试验条件下组织块贴壁细胞培养技术有利于大白鼠甲状腺细胞的培养.我们还把甲状腺组织小块接种在玻璃盖片上,并用相差显微镜及扫描电镜对培养的甲状腺细胞表面形态进行了观察,发现在 Ham's F_(12)培养液内加入15%胎牛血清,甲状腺细胞生长良好,细胞呈园形而小,核内有1-2个核仁,还能见到细胞分裂的图像.     

莪术油对人胃腺癌SGC-7901细胞形态的影响

研究莪术油(Zedoary Turmeric Oil,ZTO)对体外培养的人胃腺癌SGC-7901细胞形态变化的影响。不同浓度的ZTO作用人胃腺癌SGC-7901细胞24 h后,通过普通光学显微镜、荧光显微镜、透射电镜观察细胞形态变化情况。光学显微镜和荧光显微镜下可见未加药物组细胞呈梭形,胞浆丰富,核质均匀,核仁呈现黄色荧光,加药组细胞体积变小,胞浆浓缩、胞膜有起泡脱落现象,胞膜崩解,部分细胞核破碎或消失,细胞核呈现绿色或亮黄色荧光。透射电镜下可见未加药组细胞呈圆形,细胞核较大,胞浆较多,细胞器丰富,加药组细胞积明显变小,核固缩,微绒毛消失,部分坏死细胞的胞核溶解,细胞器结构崩解消失。ZTO作用人胃腺癌SGC-7901细胞24 h能致见未加药组细胞胞浆较多,细胞器丰富,加药组细胞体积明显变小,坏死细胞的胞使细胞发生明显的形态改变,且具有剂量依赖性。     

Chfr defines a mitotic stress checkpoint that delays entry into metaphase

Chemicals that target microtubules induce mitotic stress by affecting several processes that occur during mitosis. These processes include separation of the centrosomes in prophase, alignment of the chromosomes on the spindle in metaphase and sister-chromatid separation in anaphase. Many human cancers are sensitive to mitotic stress. This sensitivity is being exploited for therapy and implies checkpoint defects. The known mitotic checkpoint genes, which prevent entry into anaphase when the chromosomes are not properly aligned on the mitotic spindle, are, however, rarely inactivated in human cancer. Here we describe the chfr gene, which is inactivated owing to lack of expression or by mutation in four out of eight human cancer cell lines examined. Normal primary cells and tumour cell lines that express wild-type chfr exhibited delayed entry into metaphase when centrosome separation was inhibited by mitotic stress. In contrast, the tumour cell lines that had lost chfr function entered metaphase without delay. Ectopic expression of wild-type chfr restored the cell cycle delay and increased the ability of the cells to survive mitotic stress. Thus, chfr defines a checkpoint that delays entry into metaphase in response to mitotic stress.     

A role for the nuclear envelope in controlling DNA replication within the cell cycle

In eukaryotes the entire genome is replicated precisely once in each cell cycle. No DNA is re-replicated until passage through mitosis into the next S-phase. We have used a cell-free DNA replication system from Xenopus eggs to determine which mitotic changes permit DNA to re-replicate. The system efficiently replicates sperm chromatin, but no DNA is re-replicated in a single incubation. This letter shows that nuclei replicated in vitro are unable to re-replicate in fresh replication extract until they have passed through mitosis. However, the only mitotic change which is required to permit re-replication is nuclear envelope permeabilization. This suggests a simple model for the control of DNA replication in the cell cycle, whereby an essential replication factor is unable to cross the nuclear envelope but can only gain access to DNA when the nuclear envelope breaks down at mitosis.     

银杏雌配子体形成及颈卵器发育的细胞学研究

银杏的功能大孢子经１０多次游离核分裂,形成约２０００个核后,向心地形成细胞壁。雌配子体中游离核之间细胞壁还未完全形成时,在其近珠孔端表面可看到颈卵器线细胞发生。一个雌配子体中的颈卵器数目通常为２个,它们的发育最初不同步,以后逐渐趋向一致,在颈卵器的发育过程中的颈卵器颈细胞和中央细胞的形态及结构都发生了较大的变化。颈卵器的２个颈细胞的受精前进行一次斜向分裂形成４个颈细胞,此分裂一般早于中央细胞的分裂     

文殊兰弱碱性生物碱的抗肿瘤活性研究

研究文殊兰中弱碱性生物碱对不同肿瘤细胞的抑制作用,并筛选出敏感细胞株,观察凋亡形态;MCF-7细胞株、SMMC7721细胞株、SGC7901细胞株、HepG-2细胞株,MTT溶液,DMSO,Hoechst33258等;利用MTT法检测文殊兰弱碱性生物碱对上述肿瘤细胞的抑制作用以及Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡的形态学变化;文殊兰弱碱性生物碱对上述细胞株均有明显的抑制作用,对HepG-2细胞的抑制作用更为明显,给药72 h后测定IC50=9.374 323μg/mL;Hoechst 33258染色法观察细胞出现凋亡小体,有凋亡现象发生.文殊兰弱碱性生物碱MCF-7细胞株、SMMC7721细胞株、SGC7901细胞株、HepG-2细胞株具有不同程度的抑制作用,且呈现一定的剂量依赖性,对HepG-2细胞的抑制作用最强,表现出良好的抗肿瘤活性.     

Inhibition of mitosis by an antibody to the mitotic calcium transport system

Calcium ions are important in the regulation of mitotic apparatus assembly and in the control of chromosome movement. Changes in intracellular free calcium concentration, [Ca2+]i are achieved by an intracellular calcium-transport system which is highly conserved in different cell types. A membrane-bound protein of relative molecular mass (Mr) 46,000 (46K) is part of this transport system and has been implicated in the regulation of the [Ca2+]i changes associated with the course of mitosis. A monoclonal antibody against this 46K protein inhibits Ca2+-uptake into isolated Ca2+-sequestering membranes and specifically labels membranes associated with the mitotic apparatus of sea urchin embryos. Here we investigate the relationship between the intracellular calcium transport system and mitosis by injection of this monoclonal antibody into living mitotic sea urchin embryos. We find that after injection the intracellular free calcium increases up to 10(-6) M, the mitotic apparatus is rapidly destroyed and the cell is irreversibly blocked in its development.