抗药标记酿酒酵母菌株间原生质体融合的研究

酵母属中的一些种是生产单细胞蛋白的主要菌株,通过遗传工程选育高赖氨酸酵母有重要的理论意义和价值,采用100mg/ml蜗牛酶制备亲株的原生质体,在35%聚乙二醇(MW6000)的作用下,成功地获得了酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的株间融合重组子,融合频率为10~(-8)-10~(-7),经过五代的移接验证,融合子稳定,融合子抗药性产生叠加效应,个体形态发生了变化,DNA含量加倍,赖氨酸含量有所提高.     

利用原生质体融合提高酿酒酵母赖氨酸含量的研究

以酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae)为出发菌株，经N-甲基-N‘-亚硝基胍（NTG）和紫外线（UV）诱变，选育出抗S-（2-氨基乙基）-L-半胱氨酸（AEC）和抗氯化理（LiCl)的抗药性菌株作为融合新株的细胞质基因标记。用100mg/ml蜗牛酶制备亲株的原生质体，两亲株的原生质体在35%PEG（MW6000），0.01mol/L CaCl2条件下被诱导融合，融合频率为10^-6 - 10^-7。试验表明，这些融合菌株具有杂种性质。其中一株产胞外赖氨酸的能力比亲株明显增强。     

酿酒酵母与扣囊拟内孢霉属间原生质体融合的研究

通过原生质体融合技术,在酿酒酵母与扣囊拟,内孢霉属间原生质体融合产物中,获得兼有两亲株遗传特性的融合子Ｐ５０１和Ｐ５１９,对两融合子进了木薯粉液化物的发酵试验,结果显示乙醇含量分别达６．９％（体积比和７．７％（体积比）,比亲本提高５３．３％和３７．５％,酒精得率分别提高７．４８％和１０．８９％,提示该技术可用于筛选优良菌株。     

灭活酵母细胞原生质体融合技术的研究

报道了将单一亲株灭活的原生质体融合方法.融合体细胞形态大小、同化和发酵淀粉的能力均与双亲株不同,多数融合体的DNA含量是二亲株之和,推测为三倍体.融合体的细胞生物量比亲株高,发酵酒精能力增强,具有一定的生产应用价值.     

黑曲霉和假丝酵母属间原生质体融合的研究

用ＰＥＧ促融剂使经硫酸二乙酯灭活的黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ）Ｗ２５原生质体与假丝酵母（Ｃａｎｄｉｄａｓｐ．）Ｙ００２原生质体融合，在选择性培养基上获得能利用羧甲基纤维素作唯一碳源生长的杂种酵母ＦＡＣＣ．经遗传特性、碳源同化及ＤＮＡ含量等项目分析，表明杂种菌株ＦＡＣＣ与双亲菌株有区别，并进行酶活与ＳＣＰ产量的比较．     

淀粉直接发酵酒精的菌株选育──内孢霉酵母与酿酒酵母属间原生质体融合

本研究旨在构建直接发酵淀粉生产酒精的酵母菌．选择具α－淀粉酶和葡萄糖淀粉酶活性的Ｅ．ｆｉｂｕｌｉｇｅｒａＥ１１灭活的原生质体，与耐高温产酒率高的Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＨＢ－６－９单倍体进行属间原生质体融合．经３５％ＰＥＧ－５０ｍｍｏｌ／ＬＣａＣｌ２诱导，在再生选择培养基上融合率１．０～１．５×１０－６，获得１２个性能稳定的融合株．部分融合株生长速度、淀粉水解能力、可溶性淀粉直接发酵酒精的能力明显高于两亲株．     

酿酒酵母的双亲株原生质体灭活融合研究

把两株酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)S_1、S_2的原生质体分别用紫外线(U.V)和碘乙酰胺灭活或只用紫外线灭活,经PEG诱导融合后,在完全培养基上得到了融合子。融合频率为(0.98-2.13)×10~(-7)。融合子的细胞形态、DNA含量等都和亲株有明显差别,并在生产特性上有某些改进。     

啤酒酵母和异常汉逊酵母属间原生质体融合

本文探索了用不可逆生化抑制剂(碘乙酸)抑制—亲株细胞某些酶活性的同时,利用两亲株细胞生理性差异作为啤洒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和异常汉逊酵母(Hansenula anomala)原生质体融合选择性标记的可行性。结果表明这一选择系统简便、可靠和适用。属间原生质体融合率为1.48-2.25×10~8。经菌落形态比较,碳化合物的发酵和同化,DNA含量测定,酯酶型分析,细胞核染色和自然核分离实验,结果表明从选择性培养基上筛选到的菌株分为三种类型:84.4％异常汉逊酵母型:10.4％啤酒酵母型:5.2％是真正核融合子型。本文还讨论了三种类型菌株出现的机理。     

酵母菌种的单倍体分离及其原生质体的再生、融合的研究

采用酶法和复合作用法对酵母菌株 13 0 0 (2N)和 2 0 10 (2N)的单倍体细胞 (1N)的获得率分别为3 0 %和 2 0 %左右 由实验确定脱子囊壁的最佳条件为采用生理盐水 ,pH5 .4 ,温度为 2 7℃ ,获得A型 ,B型两种单倍体细胞 (IN) 通过群体杂交法 ,从 75个平板上 ,挑选出 14 5个小菌落 ,得到 5个营养缺陷型菌株 ,该菌株的原生质体在 3 5 %PEG的作用下进行原生质体的融合 ,获得成功 但是仍需进一步对融合体进行生理、生态的研究     

复合诱变和原生质体融合选育S-腺苷甲硫氨酸酿酒酵母高产菌株

对生产S-腺苷甲硫氨酸（SAM）的酿酒酵母（S.cerevisiae）菌株R1进行复合诱变和原生质体融合。采用酶解法获得出发菌株S.cerevisiae R1的单倍体菌株hR10,对其进行UV和DES复合诱变,筛选出了4个单倍体正突变株DR1-3、NM14、NM39和NM45。制备了单倍体正突变株的原生质体,采用热灭活和UV灭活法灭活双亲原生质体,在聚乙二醇（PEG）的诱导下进行原生质体融合,筛选得到融合子F35,其生产 SAM的产量为22.5 mg/L,与出发菌株R1（11.1 mg/L）相比,提高了103%,并且能够稳定遗传。采用正交试验优化了F35发酵生产SAM的培养基和发酵时间,优化了的培养基配方为麦芽糖100 g/L,蛋白胨10 g/L,NH₄H₂PO₄4g/L,NH₄Cl₅g/L,MgSO₄0.1g/L,KH₂PO₄6 g/L,发酵时间为72h。     

含有嗜杀质粒的核融合缺陷突变株原生质体制备及再生条件的研究

利用由藤黄节杆菌(Arthrobacter latevs)分泌的,以β—1.3葡聚糖酶为主的酵母细胞壁溶解酶(Zymolyase),对含有嗜杀质粒的核融合缺陷突变株5045(α,his4,karl—1[KIL—K_1]rho~+)进行破壁,得到该菌株破壁,再生的最佳条件。为嗜杀酵母原生质体融合育种提供了依据。     

利用原生质体融合技术选育高产菌株

以龟裂链霉菌(Sterpomyces rimosus)98#和76#为出发菌株,分别用溶菌酶制得2个亲本的原生质体,其中76#采用15 W紫外灯下30 cm照射25 min,100 %灭活,用PEG诱导进行了原生质体的融合.通过比较菌落外观、颜色挑选融合子328株,结合前期代谢情况进一步筛选高单位的融合菌株8株,经反复传代考察融合子的稳定性后得到1株新菌株102#,其发酵单位比亲本提高了13.0%.     

以抗生素抗性为选择标记的毛壳菌种间原生质体融合

以抗生素抗性为选择标记进行角毛壳菌和球毛壳菌种间原生质体融合。角毛壳菌CH21-I-402菌株对潮霉素有抗性、对G418敏感,球毛壳菌CH08对潮霉素和G418敏感。根癌农杆菌介导的新霉素磷酸转移酶基因转化球毛壳菌,得到成功转化新霉素磷酸转移酶基因的球毛壳菌菌株,转化子对G418抗性提高3~4倍,对潮霉素仍然比较敏感。以耐潮霉素、不耐G418的角毛壳菌和不耐潮霉素、耐G418的球毛壳菌为出发菌株,以PEG6000为助融剂进行原生质体融合,用G418和潮霉素抗性进行筛选,获得再生菌株。经AFLP分析表明:再生菌株PF1、PF26为融合菌株,融合菌株菌落形态均与亲本存在明显差异。     

降解聚乙烯醇菌株原生质体的制备及融合

从自然界中分离得到 4株能降解聚乙烯醇 (PVA)的细菌 ,经紫外线诱变 ,得到两株具有单重抗药性的突变菌株S7(Strr,Kans)和K15 (Strs,Kanr) .系统分析了各种因素对原生质体制备率以及再生率的影响 ;将S7和K15作为亲本菌株进行原生质体融合 ,并通过正交试验 ,对原生质体融合的条件进行优化 ,使融合率达到 4 .6 0 3× 10 - 5.融合子F4菌株培养成活性污泥后 ,PVA降解率可达 87% ,是普通活性污泥的 3～ 4倍     

利用原生质体融合技术筛选红霉素优良菌株

以红霉素高产菌HE-08-6及低产优组分菌HA-08-20为出发菌株,其原生质体经紫外诱变后在适宜条件下进行融合,再生培养后挑取融合子89株,经筛选得到3株具有二亲本优良性状的高产菌株HEA-08-01,HEA-08-02,HEA-08-03.其化学效价较出发菌株HA-08-20提高约25%,产品的红霉素A组分含量较出发菌株HE-08-6提高约26%.传代培养证明该菌株具有一定的遗传稳定性,在50L-Fus智能发酵罐上连续3批发酵结果表明,该优良菌种在提高红霉素产品质量及效价上取得较大进展,具有推广应用价值.     

啤酒酵母原生质体融合育种及性能检验

介绍啤酒酵母原生质体融合的杂交方法。通过对重组体的培养观察，检查其形态并测定其生理特性，以选择优良重组体。     

烟草种间叶肉原生质体融合方法的研究

利用PEG法、高Ca2 高pH法和PEG-高Ca2 高pH法等三种原生质体融合方法,对普通烟草K326和黄花烟草叶肉原生质体进行融合,结果表明,PEG-高Ca2 高pH法的有效融合率最高,融合效果最好.并同时对影响烟草叶肉原生质体融合的其它因素进行了研究和探讨.     

链霉菌种间原生质体融合的研究(Ⅱ)——融合子56-2菌株的鉴定

通过金霉素链霉菌和龟裂链霉菌原生质体融合选育出的融合子５６－２菌株，其酯酶同工酶谱与双亲有显著差异，产抗生素能力及遗传稳定性均优于金霉素链霉菌３＃，发酵产物四环素符合中国药典的各项指标，并具有抗噬菌体Ｐ５，Ｐ８的能力。     

平菇与香菇原生质体融合新菌株的生物学特性研究

以平菇与香菇的原生质体进行融合,经初筛获得5个新菌株,其茵丝生长速度、纤维素酶活力(FPA酶活、CMC酶活)、木质素酶活力(漆酶酶活)得到明显提高,其中R23菌株在26℃下培养茵丝生长速度最快,且漆酶产酶能力显著高于亲本,R8茵株最耐高温,R24菌株的纤维素酶活力表现最优;酯酶同工酶谱分析结果显示R4、R15、R24新菌株含有香菇和平菇双亲的酶谱条带.