水稻petH基因启动子的克隆及其转化载体的构建

以水稻幼嫩叶片为材料,提取基因组DNA;根据GenBank公布的该启动子序列设计引物,克隆了水稻的petH启动子,并构建了用于植物转化的双元载体p1391Z-OsR-petH-pro,为进一步研究该启动子在植物体中表达调控模式提供了试验条件。     

小鼠IL—6基因的克隆及表达载体的构建

采用常规的分子生物学技术,从小鼠骨髓细胞中克隆了含信号肽序列的IL－6,并构建了表达载体,序列分析表明所克隆的IL－6序列与献已报道的一致,构建的表达载体经鉴定正确。     

大鼠神经突起因子的克隆及表达载体的构建

从成年SD大鼠脑组织分离提取总RNA，反转录PCR扩增出鼠神经突起因子(neuritin)cDNA的最大开放阅读框(opening reading frame，ORF)后，重组于克隆载体pGEM3z上，经PCR、限制内切酶鉴定和DNA测序鉴定，扩增出的cDNA426bp全部核苷酸序列与国外文献报道的完全一致；在已构建好的重组克隆载体neuritin-pGEM3z基础上，将该neuritin ORF亚克隆到原核表达载体pQE30上，为获取具有天然活性的neuritin蛋白及其功能研究提供了基础。     

构建T载体用于PCR克隆

通过克隆甘露聚糖酶基因到pMD-18T载体构建了质粒pMD-18Tman2XcmI,克隆的甘露聚糖酶基因两侧各引进了一个特定的XcmI酶切位点;用XcmI酶切质粒pMD-18Tman2XcmI可以制备T载体．因为甘露聚糖酶基因作为填充片段和筛选标记受半乳糖苷酶基因启动子的控制,甘露聚糖酶能够表达,从而水解甘露聚糖产生水解圈,指示转化了部分酶切质粒的背景菌落．此外,在甘露聚糖酶基因中存在第3个不同序列的XcmI酶切位点,因此残余的甘露聚糖酶基因引起的背景可以进一步降低．抽提大量质粒贮存,随时制备T载体使用,增加了克隆的稳定性．该T载体克服了一般T载体质量不稳定,费钱,克隆效率低,假阳性高的缺点．使用构建的T载体完成了10个基因的克隆,结果表明重组效率达到了90％～100％．     

水稻精细胞基因RSSG58启动子的克隆分析及表达载体构建

根据分布的水稻基因组测序的比较和水稻精细胞优势表达的RSSG58基因cDNA序列，以水稻品种“桂朝2号”黄化苗组DNA为模板，用PCR方法克隆出RSSG58在起始密码子以前的上游调控序列Pr58，经过Pr58启动子进行的鉴定和分析表明，具备大多数高等植物启动子的保守元件，预计它的RSSG58基因在特异表达方面具有一定的作用。为了鉴定RSSG58基因的基本启动子元件，将RSSG58基因5′侧翼序列做缺失片段分析，由PCR从Pr58中得以3个不同大小两端带有HindⅢ，BamHⅠ酶切位点的片段Pr58Ⅰ，Pr58Ⅱ和Pr58Ⅲ，定向插入载体pMGFP4(pBI221改建，报告基因为GFP）中，取代原有的CaMV35S启动子，构建了由驱动报造基因GFP的植物表达载体pRGFPⅠ，pRGFPⅡ和pRGFPⅢ，用于农杆菌介导法水稻遗传转化。其目的是为进一步在模式植物中研究其表达功能奠定基础。     

中性蛋白酶基因的克隆与表达载体的构建

中性蛋白酶是指其最适作用pH为6－7．5的一类蛋白酶，其主要作用为皮革脱毛、毛皮软化、制蛋白胨、 酵母膏、肝宁及用于食品工业等。我们从枯草杆菌中克隆出中性蛋白酶基因，并成功构建了中性蛋白酶基因表达载体，为下一步实现蛋白酶的高效表达奠定了基础。     

水稻中受硝酸盐诱导的基因启动子的克隆与植物双元表达载体的构建

为克隆水稻中受硝酸盐诱导的基因启动子,从GeneBank中找到了6组水稻中受硝酸盐诱导的特异cDNA片段,结合已发表的硝酸盐诱导的相关基因,经过序列比对确定特异片段所在的基因.电子克隆出对应基因的5′侧翼约1 500 bp的序列.以总DNA为模板利用PCR技术克隆出了对应的5′侧翼序列.经过测序分析,该序列具有许多启动子特征的顺式作用元件,加TA-box,CpG岛等.将这些启动子序列连接到pCAMBIA1391Z双元载体中,构建植物双元表达载体以进行启动子活性检测.     

旱半夏组织培养及一步成种法研究

对半夏进行组织培养研究,半夏叶片为最佳外植体,最优培养基配方为MS＋6-BA0．5mg／L＋NAA0．1mg／L。研究发现半夏一步成种的方法,直接从叶片诱导形成小苗一步到半夏块茎进入大田移栽扩繁,规避了炼苗环节和解决了移栽成活率低的问题。     

法呢基焦磷酸合酶基因的克隆及双元载体的构建

以留兰香(MenthaspicataL)为材料,利用RT PCR方法克隆法呢基焦磷酸合酶基因(fps)的cDNA,核酸序列分析表明,该基因的编码区长1050bp,编码349个氨基酸.进一步将fps基因插入植物表达载体BinAR,酶切鉴定及测序结果都证明fps的植物双元表达载体构建成功,为fps基因在烟草中的异源表达奠定了基础.     

一种新型垂直搜索引擎构建方法

如何有效地构建面向领域的垂直搜索引擎,是信息检索领域众多研究者关注的问题．本文提出了一种通用的基于专业词汇表构建垂直搜索引擎的方法,通过分析网页特征,提出了基于链接结构和文本内容的启发式网页爬取策略．该策略结合网页的结构信息特征,在网页和主题相关度计算中考虑了特征词汇在网页中的权重,有效地提高了专业搜索引擎的查询效率．通过具体实现一个面向医疗领域的垂直搜索引擎,验证了本文所提出的方法的有效性．     

一步法合成甲基橙的实验改进

得出了一种速度快、产率高、省试剂合成甲基橙的实验方法．该法经学生微量化实验实践效果令人满意。     

构造向量值有理插值函数的一种方法

文章从实际应用出发,给出低阶的有理插值函数的简便构造方法;利用叠加思想及一元向量Lagrange插值公式,给出一种便于操作的有理插值函数方法;该方法灵活、简便,可根据需要构造所需要类型的有理插值函数。     

4N阶幻方构造方法的论证

在构造 n=4,8阶幻方的实践中 ,发现一种 4N阶幻方构造方法。将从两个方面进行4N阶幻方构造方法的证明 ,此外 ,还要通过 8阶及 1 2阶幻方构造实践 ,进一步证明本文方法的可行性     

构造切触有理插值函数的一种新方法

文章首先将插值节点进行分块,对每块节点作Hermite插值多项式,并利用其剩下的节点作最高次项系数为1的代数多项式;其次对分块Hermite插值多项式及相应的代数多项式,采用线性组合方法得到一般切触有理插值函数的表达式;最后通过引入参数方法,给出设定次数类型的切触有理插值问题有解的条件。实例表明所给方法直观、灵活。     

A novel method for purification of recombinant adenoassociated virus vectors on a large scale

A novel method for recombinant adeno-associated virus (rAAV) purification on large scale is described. The method involves three steps, including chloroform treatment, PEG/NaCl precipitation and chloroform extraction. The whole procedure can be performed in four hours. Using this purification method, we can reproducibly obtain, from 4×10⁹ of proviral cells cultured in roller bottles, purified rAAV-GFP stocks with titers of around 5×10¹³ particles/mL and purity greater than 95%. The infectious titers of the vector stocks were up to 2×10 TU/mL, thus particle-to-infectivity rate was about 25. Under an electronic microscope, most rAAV particles appeared full and a few were in intermediate form. Empty particles were rarely seen. The purified rAAV-GFP stocks have been successfully used in in vitro and in vivo transfection experiments. Therefore, this new method offers a simple, rapid and cost-effective way for large-scale rAAV purification.     

民间故事:现代小说的父体基因

现代小说的“本源”在哪里?本文从形态美学、虚构性要求、民间立场和“共相”四个方面论证了现代小说的父体基因是民间故事。     

“非个人化”：近年写实小说创作叙述话语的人文立场

通过对近年写实小说在创作上态度、方式、方法、模式等方面的分析,揭示出近年写实小说创作叙述话语“非个人化”的人文立场,并指出这种人文立场必将为当下中国文学创作的发展带来一次较大契机。     

三电平逆变器的直流侧电压平衡控制新方法

三电平逆变器应用于中高压游梁式抽油机变频驱动装置不仅可以节能降耗，而且能提高油井的采收率。然而，中点箝位式三电平逆变器的直流侧电压平衡问题直接影响逆变器及其电机调速系统的可靠性。在分析其产生原因的基础上，提出了一种压频转换式电压平衡控制新方法，并给出了利用87C196MC单片机实现的具体编程思路。该方法不受逆变器输出交流电压的影响和限制，实现简单，特别适合于单片机的控制，而且可以扩展到多于三电平的逆变器。仿真和实验结果证明了该方法的正确性。     

用样条有限条方法求解任意形状薄板的大挠度

本文采用映射的方法，将任意形状的薄板转化为正方形薄板，然后用样条有限条方法对方形板的大挠度问题进行求解，导出了样条有限条方法的计算公式．用这种方法计算了受均布荷载和集中荷载作用的矩形板、斜板、圆板、扇形板．数值结果表明，这种方法在求解薄板几何非线性问题时，具有计算量小、精度高、通用性强等优点．