饥饿对日本沼虾代谢及SOD活性的影响

在20℃条件下,对日本沼虾进行了不同时间的饥饿处理,研究饥饿对日本沼虾代谢及免疫水平的影响,探讨日本沼虾对饥饿的适应对策.结果表明,日本沼虾代谢率在饥饿处理的2~4 d和8~10 d分别出现2个相对的代谢稳定区,即饥饿适应代谢区和饥饿存活代谢区,SOD比活力在饥饿处理期间显著下降.     

Hg2+对日本沼虾的毒性作用

研究了Hg2+对日本沼虾的急性毒性,在24℃下,测定了Hg2+对日本沼虾(Macrbrachium nipponnensis)的24,48,72和96 h的LC50值分别为60.2,52.4,47.6和38.0μg/L.在几个Hg2+质量浓度梯度胁迫下,超氧化物歧化酶(SOD),Na+-K+ATPase,谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)活性均受到不同程度的抑制,随Hg2+质量浓度的升高,抑制作用越明显.     

不同波长光照对日本沼虾视觉的影响

被剪去触角的日本沼虾经过暗适应12h后，在不同波长的红光(750nm)，黄光(580nm)蓝光（400nm)，绿光(560nm)下，其平均摄食量差异极显著。在红光和绿光光照区域内的平均摄食量为65．71％和61．15％，远大于蓝光和黄光光照区域内的41．86％和33．08％。同样经过12h的暗适应后，在无饵料的情况下，日本沼虾的趋光行为为红光的频次最高。     

饲料中锰对日本沼虾抗氧化酶活性的影响

研究了日本沼虾(Macrobrachium nipponense)饲料中不同含量的Mn对虾体抗氧化酶活性的影响,以及在低氧胁迫下Mn对抗氧化酶的激活效果.结果表明,在投喂Mn的质量分数为150 ?g/g的饲料后,日本沼虾的超氧阴离子(O2·-)值降低,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性升高.Mn对虾体内SOD,CAT和GPX的激活作用表现出明显的剂量效应,饲料中Mn的缺乏或过量都使它们的活性受到影响.在低氧胁迫下,饲料中适量的Mn在一定程度上可提高虾体对低氧环境的耐受力.     

饥饿时间对日本沼虾能源物质利用和能量收支的影响

研究饥饿时间对不同体重的日本沼虾(Macrobrachium nipponense)能源物质利用和能量收支的影响.结果表明:饥饿初期日本沼虾主要依赖脂肪和碳水化合物供能,随着饥饿时间增加,开始部分消耗体内的蛋白质,最后完全依赖蛋白质作为能量来源,虾体营养组成和含量影响供能物质的利用.能量收支方程表明,在饥饿状态下日本沼虾代谢活动减弱,代谢能(R)逐渐降低,而排泄能(U)逐渐增加,体重对日本沼虾能量收支不产生影响.     

日本沼虾基因片段PCR扩增的条件优化

以日本沼虾肌肉组织为材料,提取其基因组DNA,研究了该虾16S rRNA基因片段扩增的PCR反应条件.经对扩增反应体系中各因子和扩增程序的梯度实验,确定优化反应条件为: 在25μL反应体系中,10×Buffer 2.5 μL,DNA模板200～300 ng,4×dNTP 0.2 mmol/L,Mg²⁺1.5 mmol/L,引物0.4μmol/L,Taq DNA聚合酶1 U,95 ℃预变性5 min;接着35个循环包括95 ℃变性1 min,56 ℃复性50 s,72 ℃延伸1 min;最后72 ℃延伸10 min.应用此优化体系扩增日本沼虾18S rRNA,细胞色素氧化酶亚基I (cytochrome oxidase subunit I, COI),NADH脱氢酶亚基V (NADH dehydrogenase subunit 5, ND5)等基因片段均获得了稳定而理想的效果.研究结果为深入探讨日本沼虾种群的遗传和变异,以及开展其种质鉴定和分子标记等研究提供了参考.     

日本沼虾胚胎复眼发生的研究

应用光镜技术和透射电镜技术,研究了日本沼虾胚胎复眼的发生.在原肠期,胚区前端的外胚层细胞增殖形成视叶原基.发育至后无节幼体期开始形成视神经节.在前蚤状幼体早期胚胎出现复眼色素，同时构成复眼的细胞开始分化。前蚤状幼体晚期，复眼色素区扩大到复眼直径的一半。复眼由个眼构成，每个个眼由角膜、角膜生成细胞、晶锥、小网膜细胞等组成。超微结构显示，胚胎的复眼结构与成体的相似，但感杆束直径比成体小。至胚胎孵化，眼柄尚未发育完善。     

亚油酸对培养日本沼虾肝胰腺细胞的影响

对日本沼虾肝胰腺细胞进行培养,采用M199 (GIBCO BRL) 细胞培养基加质量分数为10%的胎牛血清,添加的补充成分有:NaCl,NaHCO3,MgCl2,CaCl2,葡萄糖,青霉素和链霉素.同时对pH和渗透压两因子进行了研究,结果表明pH 7.0～7.2、渗透压为600 μmol/g时,细胞长势最好.以此作为培养条件,在培养基中加入促细胞生长因子的亚油酸,发现其促生长作用明显,其中亚油酸浓度为16×10-5 mol/L时,促进作用最好.日本沼虾肝胰腺细胞共继代2次,存活时间约45 d.     

低氧胁迫对日本沼虾能量代谢和抗氧化代谢的影响

本实验对日本沼虾进行低氧(2±0.5mg/L,8h)胁迫和常氧恢复(7±0.5mg/L,2.5h)处理,通过测定能量代谢及抗氧化体系的相关酶活及其中间代谢产物的浓度,讨论低氧胁迫对日本沼虾能量代谢的影响机理及其抗氧化响应机制。结果显示:随着低氧胁迫时间的延长,肌肉乳酸含量显著高于对照组(7±0.2mg/L);肝胰腺和肌肉中糖原含量及精氨酸激酶(AK)活力则显著低于对照组(P0.05);肝胰腺和肌肉组织谷胱甘肽S-转移酶(GST)活力显著升高(P0.05)。恢复常氧阶段,肌肉中乳酸含量逐渐降低至常氧水平;肝胰腺和肌肉组织糖原含量及精氨酸激酶活力与对照组相比仍显著降低(P0.05);肝胰腺和肌肉组织GST活力逐渐下降,接近正常水平。结果表明:除进行氧代谢外,低氧胁迫和常氧恢复状态的机体也需要进行无氧酵解和磷酸精氨酸代谢为自身供能。日本沼虾抗氧化系统受到低氧胁迫的影响,机体脂质过氧化程度升高,说明机体受到氧化损伤。     

Cu2+对日本沼虾幼虾的急性致毒研究

Cu2+浓度为0.000 5 mg/L、0.005 mg/L、0.05 mg/L时,日本沼虾幼体在54 h内均能够正常存活;Cu2+浓度为0.1 mg/L时,只有部分沼虾幼体中毒致死.而当Cu2+浓度超过0.25 mg/L时,日本沼虾幼虾在48 h内致死,并出现鳃变兰、肝脏变黑的现象.随着Cu2+浓度增大,日本沼虾幼虾存活的时间变短,肝脏和鳃的中毒颜色变深.日本沼虾幼虾48 h的半致死浓度为0.268 mg/L,其安全浓度为0.026 8 mg/L.     

KK-42对日本沼虾蜕皮激素及其受体表达的影响

用1.95×10-4 mol.L-1的KK-42处理日本沼虾1min,不同时刻抽取血淋巴、解剖肝胰腺.HPLC测定血淋巴中20E滴度,RT-PCR测定EcR和RXR mRNA水平.结果:KK-42处理后3h,6h,20E滴度分别比对照组增加了121.71%(P<0.05)、268.96%(P<0.01);EcR mRNA水平在处理后6h,12h,分别比对照组提高了233.56%(P<0.01)、110.73%(P<0.05);RXR mRNA水平在处理后3h、12h,分别比对照组提高了195.53%(P<0.01)、80.83%(P<0.05).表明KK-42可显著提高血淋巴中20E的滴度,并诱导肝胰腺中EcR和RXR的基因转录.     

KK-42对日本沼虾蜕皮前期外骨骼结构及NAGase活力的影响

近期研究发现,适宜浓度的KK-42处理能显著缩短日本沼虾幼虾蜕皮周期.新旧表皮的更替是蜕皮的重要事件,蜕皮前期是表皮外骨骼结构变化最剧烈的时期.据此,从组织学水平观察了幼虾头胸甲外骨骼结构以及KK-42的影响,定量分析了肝胰腺N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)在KK-42处理后不同时间的活力.将处于蜕皮前期(D1-4)、体长(3.3±0.5)cm的日本沼虾随机分为两组,分别用1.95×10-4 mol·L-1的KK-42溶液(实验组)或不含KK-42的溶液(对照组)浸泡处理1min,处理后不同时间,组织学方法观察头胸甲外骨骼结构,分光光度法测定肝胰腺NAGase活力.结果显示,KK-42处理后第3d,D3期和D4期幼虾头胸甲表皮厚度与对照组相比分别提高29.76%和35.23%(P0.01);KK-42处理后12h,D3期和D4期肝胰腺NAGase活力显著高于对照组.结果表明,KK-42处理可显著增加蜕皮前期日本沼虾头胸甲表皮外骨骼的厚度,并对肝胰腺NAGase活力具有诱导作用.     

切除眼柄对日本囊对虾亲虾摄食、性腺发育及能量转化的影响

在水温(22.5±2.50)℃,盐度30～32,pH 7.8～8.3,光照1 000 lx的条件下,分别对切除眼柄和未切除眼柄的台湾海峡日本囊对虾亲虾(平均体长(19.2 ±0.95) cm,平均体质量(82.7±10.57) g)进行为期30 d的摄食、性腺发育及能量转化的初步研究.结果表明:1)实验组(切除眼柄)日本囊对虾的摄食量与摄食强度均高于对照组(未切除眼柄),夜间摄食强度分别为白天的1.39倍和1.28倍(p＜0.01);促熟期间实验组亲虾摄食量保持上升之势,而对照组为上升与下降交替出现.2)实验结束时,实验组和对照组性腺指数(GSI)的增幅分别为504.07%和91.42%(p＜0.01);性腺的干/湿质量比值(G_d/m)亦为实验组高于对照组,但二者之间差异不显著(p＞0.05).3)实验结束时,实验组和对照组亲虾的躯体能值(E_b)均略有下降,性腺能值(E_g)实验组增幅大于对照组,且两组之间差异极显著(p＜0.01),从能值的角度来看,繁殖期间的亲虾表现为负生长;实验过程中,饵料转化效率(FCE)实验组和对照组分别为10.17%和1.76%,饵料能量转化效率(ECE)分别为14.30%和2.37%,均为实验组大于对照组. 说明切除眼柄可以提高日本囊对虾亲虾的摄食量和摄食强度、促进性腺发育并提高其能量转化效率,亲虾性腺发育期间的能量除主要由食物转化之外,还消耗了机体其它组织器官的储能.由此可以了解日本囊对虾亲虾繁殖期间的摄食规律、性腺发育情况和能量转化特点并为其养殖阶段的科学管理提供理论依据.     

日本沼虾表皮几丁质结合蛋白基因的克隆以及KK-42对其表达的影响

为探讨KK-42缩短日本沼虾蜕皮周期的可能机制,首次从日本沼虾步足表皮组织克隆了编码几丁质结合蛋白的一个新基因——MnCBP-1部分cDNA序列,对其序列进行生物信息学分析,qRT-PCR技术检测MnCBP-1基因的表达水平以及KK-42的影响.结果表明,MnCBP-1基因部分cDNA序列为1396bp,含有特征性的几丁质结合结构域(chitin-bind-4),经BLAST比对,MnCBP-1与蚤状溞相似性为44%.qRT-PCR结果显示,步足表皮组织内MnCBP-1基因表达量随着蜕皮前期(D0-2)的开始逐渐增多.KK-42处理后,蜕皮间期(C)幼虾内MnCBP-1基因表达水平分别在6、12、24和48h比对照组显著升高,而在D0-2期和D3-4期MnCBP-1基因转录物仅在个别时间点有所增多.研究表明,MnCBP-1基因表达与蜕皮周期有关,KK-42处理可显著诱导MnCBP-1基因表达,且表达的高峰提前至C期,这可能是KK-42缩短蜕皮周期的机制之一.     

日本沼虾表皮蛋白基因的克隆及表皮组织差异性表达分析

为探究日本沼虾表皮蛋白(Macrobrachium nipponense cuticle proteins,MnCPs)表达模式与表皮组织差异的关系,根据日本沼虾表皮组织转录组测序结果,从头胸甲中克隆到1个含几丁质结合-4(chitin_bind_4)结构域的表皮蛋白(cuticle proteins,CPs)基因,命名为MnCP-2,经BLAST检索,MnCP-2与远海梭子蟹(Portunus pelagicus,ABM54465.1)有50%的相似性.以健康幼虾(体长3.0~4.0cm)的头胸甲、尾扇、游泳足和步足4种厚度存在差异的表皮组织为材料,分别提取C期、D_(0-2)期、D_(3-4)期和A期的RNA,采用Real-time PCR技术,分析了MnCP-2在蜕皮周期不同阶段的相对表达量.结果显示,MnCP-2在头胸甲、尾扇和游泳足中表达水平的峰值出现在D_(3-4)期,而在步足中则出现在D_(0-2)期.提示MnCP-2编码的蛋白可能在新外表皮的形成中发挥重要作用,它在表皮组织不同部位的差异性表达可能是导致表皮结构差异的原因之一.     

低氧胁迫对日本沼虾呼吸代谢和抗氧化能力的影响

为阐明低氧胁迫对日本沼虾呼吸代谢和氧化代谢的影响,并初步探讨其作用机制及日本沼虾的抗氧化响应机制,将日本沼虾暴露于低氧((2±0.2)mg/L,8 h)而后恢复常氧水平((7±0.2)mg/L,2.5 h).结果显示:与对照组(保持常氧水平)相比,随着低氧暴露时间延长,日本沼虾肝胰腺和肌肉组织细胞色素氧化酶(CCO)和琥珀酸脱氢酶(SDH)活力显著下降(p0.05),延胡索酸还原酶(FRD)和乳酸脱氢酶(LDH)活力显著上升(p0.05);总抗氧化能力(T-AOC)和过氧化氢酶(CAT)活力显著上升(p0.05),超氧化物歧化酶(SOD)活力显著下降(p0.05).恢复常氧阶段,CCO,SDH,FRD,LDH,CAT和SOD活力逐渐恢复到正常水平,T-AOC在恢复常氧1 h时显著降低(p0.05),而后恢复到正常水平.低氧胁迫使得有氧代谢减弱,无氧代谢增强,以维持机体能量需求;T-AOC和CAT活力增加而SOD活力降低,是日本沼虾适应低氧环境所采取的一种抗氧化策略.     

饥饿补偿对日本沼虾生长及生化组成的影响

在(25.0±1) ℃范围条件下,对日本沼虾进行了不同时间的饥饿处理后再投饵的恢复生长实验.饥饿过程中,虾体水分、灰分含量略有上升,蛋白质和脂肪含量以及RNA/DNA值有不同程度下降.分别给饥饿处理0(对照),2,4,8 d的日本沼虾投饵,在恢复生长结束后,各饥饿处理组的虾体生化组成均接近并恢复到对照组水平.饥饿处理组在恢复生长中的特殊生长率、摄食率和食物转化率显著高于对照组,实验结果表明,日本沼虾继饥饿后再恢复喂食不仅食欲增加,而且摄食水平和食物转化率均有所提高,出现完全或部分补偿生长效应.     

养殖青虾“红鳃病”病原的研究

从养殖虾的肝、鳃分离的细菌进行生理生化鉴定、药物敏感及感染试验等 ,结果表明：经细菌学鉴定二株病原菌,均为嗜水气单胞菌 Aeromonas hydrophila;对虾的半数致死量 LD50分别为 1.68× 104个 /只、 3.95× 103个 /只;细菌对药物的敏感性有明显差异。