Plcd1转基因小鼠的制备

通过制备Plcd1转基因小鼠研究Plcd1基因功能.首先逆转录PCR获得约2.2kb的Plcd1基因全长,T载体克隆后测序验证;以pMD19-T-Plcd1为模板,通过设计引物及PCR扩增引入酶切位点,与pEF6/V5-His同时进行酶切、连接,构建pEF6/V5-His-Plcd1表达载体;经真核表达验证后,酶切获得目标片段,显微注射681枚受精卵,在82只仔鼠中获得转基因阳性首建鼠15只,其中13只稳定遗传并建系.PLCD1-HIS融合蛋白在睾丸组织中表达,在皮肤组织中无表达.Plcd1转基因小鼠为Plcd1功能研究奠定了基础.     

拟南芥CGP1基因启动子克隆及其GUS转基因植株的构建

前期研究发现一个功能未知基因响应植物镉胁迫,将之命名为CGP1。文章为探究植物基因CGP1的表达模式及其在响应镉胁迫中的表达变化情况,以野生型拟南芥为实验材料构建CGP1基因启动子接pART7-GUS载体及其转基因植株。通过提取野生型拟南芥的DNA,并以DNA为模板利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)技术克隆得到CGP1基因启动子序列,将启动子序列和GUS载体双酶切后进行连接,并转化到大肠杆菌感受态细胞中,通过测序获得构建成功的ProCGP1-GUS载体。利用浸染花序法将ProCGP1-GUS载体转入野生型拟南芥中,并通过抗性筛选获得ProCGP1-GUS转基因阳性植株,为研究镉胁迫下CGP1基因的功能奠定了基础。     

外源hDAF基因对转基因猪影响的初步研究

应用显微注射方法将外源hDNA基因导入湖北白猪的受精卵,获得了相应的转基因猪,4．2,8．0kb两种导入外源基因片断移植后死胎率分别为20．00％,39．71％,差异不显著,8．0kb基因产仔畸形率为11．76％,而4．3kb基因无畸形,结果表明,原核基因对转基因猪有明显的致畸作用,G0代转基因猪60日龄重,6月龄重对照组差异均不显著,表明外源基因的整合位点较理想。     

Vill转基因小鼠的制备

摘要:目的　通过制备Vill转基因小鼠研究该基因的功能。 方法与结果　首先由RT-PRC方法获得全长约2605bp的Vill基因;经T载体克隆测序验证后,以克隆载体pMD19-T-Vill为模板,设计引物并引入酶切位点,将PRC扩增产物与pEF6/V5-His-LacZ同时进行酶切、连接,构建表达载体pEF6/V5His-Vill;经真核表达验证后,酶切获得含Vill基因的显微注射DNA构件;显微注射390枚受精卵后,在出生存活的77只仔鼠中获得转基因阳性GO代小鼠19只,其中16只能够稳定遗传并建系,转基因阳性小鼠外观未有明显改变。 结论　Vill转基因小鼠为该基因的功能研究准备了实验材料。     

拟南芥HKT1基因pCAMBIA载体构建及转基因材料筛选

探索盐胁迫作用机理并将其运用到农业生产领域中,对培育耐盐作物具有非常重要的现实意义.土壤环境中过量的Na+会干扰植物根对其他离子的吸收,导致植物生理代谢紊乱、离子失衡.在拟南芥中,已有研究证明HKT1基因在盐胁迫信号通路中扮演十分重要的角色,控制着Na+的吸收、转运和储存.文章通过正向和反向遗传学手段,发现一个转录因子...     

检测细胞色素P-450基因族中CYP1A1基因表达的一个简捷方法

NMR1系雄性小鼠被用来研究肺微粒体细胞色素P450家族中一个同功基因CYPlAl在香烟烟雾的诱导下表达．双轮回‘聚合酶链式反应’(PCR)和‘反向转录酶-聚合酶链式反应’(RT-PCR)被用来检测基因CYP1Al的转录水平．代表CYPlAl蛋白活性的7-乙氧基试卤灵-0-去乙基酶(EROD)的活性被用来检测基因CYPlAl的表达．双轮回‘聚合酶链式反应’(PCR)和‘反向转录酶-聚合酶链式反应’(RT-PCR)被用来检测基因CYPlAl的转录水平．测试结果表明在吸入香烟烟雾的情况下。小鼠肺微粒体EROD的活性和基因CYPlAl的转录水平是同步增加的．这个结果不同于以前在同样实验条件的一个自相矛盾的结果，即在CYPlAl蛋白增加时，基因CYPlAl的转录水平却是下降或不变．这说明本文所使用的方法可能要优于以前的实验方法.     

新型双抗虫基因植物表达载体的构建及其在转基因烟草中的表达

用一个合成的编码完全活化的苏云金芽孢杆菌(Bt)Cry1Ac的嵌合蛋白基因BtS29K与慈菇蛋白酶抑制剂A和B的融合蛋白基因API-BA构建了双抗虫基因植物表达载体pBS29K-BA.通过农杆菌介导法将该双抗虫基因转入烟草,获得了一批可同时表达两个抗虫蛋白的转基因植株.Western blot分析结果表明Cry1Ac和API-BA蛋白的表达量分别达到3.2μg/g鲜叶重和4.9μg/g鲜叶重.用棉铃虫进行的杀虫试验表明,在中～高抗虫(70%以上的昆虫死亡率)植株中,表达双抗虫基因的植株百分数较仅表达Bt基因的高10%,比仅表达API-BA的高25%.证明用完全活化的Bt蛋白编码序列与蛋白酶抑制剂基因构建双抗虫基因表达载体可以确保两个基因抗虫功能的充分发挥.     

小鼠吸入香烟烟雾染毒过程的标准化和使用酶活检测在烟熏小鼠中基因CYP1A1的表达

建立了一个通过测定茄尼醇的含量来确定小鼠吸入香烟烟雾浓度的方法，因而使得来自不同实验室的相关数据的比成为可能，同时，对香烟烟雾务诱导雄性小鼠NMR1的肺微粒体中细胞色素P450异构基因CPY1A1的表达在蛋白质的水平上进行了测试，测试结果表明，代表CYP1A1蛋白活性的7-乙氧基试卤录-O-去乙基酶的活性在小鼠的肺中随着吸入香烟烟雾的增加而上升，由此可知，香烟烟雾诱导了小鼠肺中基因CYP1A1的表达。     

BnGID1基因干扰载体的构建和对甘蓝型油菜的转化

BnGID1基因是本实验室克隆到的AtGID1基因在甘蓝型油菜(Brassica nupus L.)中的同源基因.为了验证该基因在甘蓝型油菜中的功能,我们利用pFGC5941双元载体构建了BnGID1基因的干扰载体并将其转化入甘蓝型油菜野生型“3529”中,得到了BnGID1基因表达被部分抑制的转基因植株.性状观察证明,在BnGID1基因表达被部分抑制后,植株表现出明显的矮化特征,高度显著降低,叶片产生皱缩.与水稻,拟南芥中的GID1基因缺失突变体的性状比较证明BnGID1基因具有与OsGID1,AtG     

水稻LEC1A基因过量表达载体的构建及其转化

拟南芥的LEC1基因是胚胎发生的一个重要调控因子,控制着胚胎发育的多个不同方面.水稻的LEC1A基因与拟南芥的LEC1基因有比较高的同源性.利用RT-PCR克隆到水稻LEC1A基因并构建了该基因的过量表达载体,经农杆菌介导法将其导入水稻幼胚诱导的胚性愈伤组织,经组织培养和抗性筛选获得再生植株.经PCR鉴定成功获得了22株转基因水稻,为进一步研究水稻LEC1A基因的功能奠定了基础.     

蜘蛛拖牵丝蛋白基因转家蚕表达质粒的构建

利用DNA重组技术对络新妇蛛(Nephila clavipes)拖牵丝蛋白基因MaSp1高度重复序列进行多次重组,人工构建成1.6 kb的蜘蛛拖牵丝蛋白人工基因Sil-E,DNA序列分析证明了人工基因序列的正确性.将家蚕L链基因启动子片段、L链cDNA、L链基因终止子融合在一起,构建成丝腺特异性表达单元.再与Sil-E融合构建成蜘蛛拖牵丝蛋白基因家蚕丝腺特异表达单元.将该表达单元克隆到转座子piggyBac的转基因载体中,获得了蜘蛛拖牵丝蛋白转基因表达载体.采用显微注射法将其与辅助质粒共导入到家蚕蚕卵中.筛选转基因阳性个体,经PCR和Southern杂交鉴定,结果表明目的基因整合到家蚕基因组中,为进一步研究家蚕作为生物反应器表达蜘蛛拖牵丝蛋白基因奠定了基础.     

转基因小鼠乳腺表达人乳过氧化物酶的初步研究

从人基因组PAC文库中筛选出人乳过氧化物酶（hLPO）基因,利用长片段PCR的方法获得hLPO基因5’端约3kb片段,通过酶切方法获得hLPO基因3’端约27kb片段,将这两部分拼接并克隆到乳腺特异性表达载体pBC1上,构建以山羊β-casein启动区指导的hLPO的转基因表达载体pBC1-hLPO。利用显微注射的方法获得28只FO代小鼠,经PCR检测和Southerm杂交分析证实,有5只小鼠（4♂,1♀）为整合hLPO基因的转基因阳性小鼠,整合率为17.86％,整合拷贝数在1至5之间。利用SDS-PAGE凝胶电泳和Western blot印迹分析FO、F1代共3只雌性转基因小鼠乳样,结果表明hLPO重组蛋白的特异条带不明显。     

转生长激素基因彩鲫(Colorful Curcain carp)的获得及检测

转基因育种技术加快了鱼类育种速度,已成为鱼类分子生物学研究的重点．以往用于转基因鱼研究的基因元件基本上都是来自哺乳动物,从基因安全的角度讲,构建全鱼“元件”的转基因鱼是转基因鱼市场化的前提．作为观赏鱼类的彩鲫,色彩丰富,体形优美,但其生长速度缓慢,通过转基因方法可望生     

MT—hGH基因注入小鼠受精卵的研究

用显微注射法，将MT－hGH融合基因注入昆明白小鼠受精卵雄原核中，受注的原核卵经体外培养发育的198枚2细胞胚、45枚桑椹胚和161枚胚泡，移植到54只假孕受体，其中16只妊娠产仔只，存活到供试的仔鼠25只，小鼠长到3个月后，切尾制备DNA，经DNA斑点杂交和Southern印迹杂交检测基因整合情况，25只小鼠中3只有融合基因整合，称为转基因小鼠，仔鼠21日龄离乳后饮水中加入锌（Za^ )，以诱导融合基因表达，85日龄时，转基因小鼠体重比对照组重32．0％，还讨论了基因整合方式对胚胎发育的影响。     

合系42号AGP转基因株系产量性状研究

粳稻品种合系42号经AGP基因导入后，得到性状稳定的转基因株系，经品比试验，有1个株系的产量高于对照且有显著差异，初步认为转基因水稻材料可能是通过提高结实率来提高产量。     

基因表达系统与转基因动物乳腺反应器

出于研究、医疗或工业目的，常常需要大量置备各种生物活性蛋白质，为此已经建立了多种基因工程表达系统，如微生物发酵系统、真核细胞培养系统、转基因植物表达系统和转基因动物表达系统等。近几年，利用转基因动物作为生物反应器由乳汁中生产蛋白药物的研究取得了很大进展，有多种动物可被用于转基因。基本过程是将基因构件显微注射到单细胞期受精卵，基因构件以一定几率整合到受体基因组中。通常转基因和其表达模式可忠实地遗传。许多蛋白将以高浓度低成本由转基因家畜的奶中生产。这些转基因动物与传统的动物细胞培养和细菌发酵技术相比尤显高效。乳腺能完成包括二硫桥形成、酰胺化、羧基化和糖基化在内的翻译后修饰，１头转基因羊就是１套发酵罐。据预测，到２０１０年由转基因动物生产的蛋白药物占全部基因工程药物的比率将增长到９５％以上。     

根癌农杆菌介导AtNHX1基因转化小麦

利用根癌农杆菌对 3种基因型小麦进行了转化研究 .发现基因型对转化有明显影响 .将小麦品种烟优 36 1、烟 10 3、核生 3号的胚性愈伤组织用含报告基因NPTⅡ和抗盐基因Na H 反向转运AtNHX1的农杆菌菌株pROK2AT GV310 1感染和共培养后 ,用巴龙霉素 5 0 - 15 0mg L筛选抗性愈伤组织及转化植株 .对抗性植株的总DNA用AtNHX1基因的特异引物进行PCR检测 ,目的基因的PCR阳性频率为 1.3(烟 10 3)和 2 .9% (核生 3号 ) .Southern杂交证实外源基因已经整合到小麦的基因组中     

HSV1-tk基因的部分DNA序列分析

采用ＰＣＲ技术从商品质粒ｐＨＳＶ１０６扩增出ＨＳＶ１－ｔｋ基因（１１２８ｂｐ）,ＰＣＲ产物用ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ双酶切后定向克隆至真核表达载体ｐｃＤＮＡ３,然后以重组质粒ｐｃＴＫ为模板ｔｋ基因的５端引物为ＤＮＡ测序引物进行部分ＤＮＡ序列分析,部分ＤＮＡ序列分析证明ＰＣＲ产物为ＨＳＶ１－ｔｋ基因正确无误,成功筛选到ＨＳＶ１－ｔｋ基因的真核表达载体ｐｃＴＫ,并为利用ｔｋ基因在实验动物体内进行自杀性基     

Tabtoxin Tolerance in Transgenic Tobacco Plant Expressing a Tabtoxin Resistant Gene

ＴａｂｔｏｘｉｎＴｏｌｅｒａｎｃｅｉｎＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＴｏｂａｃｃｏＰｌａｎｔＥｘｐｒｅｓｓｉｎｇａＴａｂｔｏｘｉｎＲｅｓｉｓｔａｎｔＧｅｎｅ＊ＹｅＺｈａｏｈｕｉ（叶朝晖），ＹｕＬｉｈｕａ（余荔华），ＺｈａｏＮａｎｍｉｎｇ（赵南明），ＱｕＣｈａｎ...