小鼠结核分枝杆菌感染模型用于评价重组HBHA疫苗免疫效果的实验研究

目的通过复制小鼠结核病模型评价重组HBHA疫苗的免疫效果。方法将重组肝素结合血凝素(HBHA)疫苗接种BALB/c小鼠,观察其诱导的细胞免疫应答水平,并以MTB H37Rv毒株攻击免疫小鼠,研究重组疫苗诱导的保护力。结果重组HBHA免疫BALB/c小鼠后可诱发细胞毒作用,将体内MTB裂解。重组疫苗不仅能刺激CD4+T,CD8+T增殖、活化,还可诱导脾细胞分泌IFN-γ、IL-2等细胞因子。H37Rv毒株攻击后,被免疫小鼠的组织病理学症状减轻。结论本研究通过检测小鼠体内细胞免疫应答和肺脏组织病理学改变等指标,客观的反映了重组疫苗免疫小鼠结核模型的保护效果。     

分枝杆菌重组疫苗rBCG-Sj26GST对小鼠的保护作用

为了研究分枝杆菌重组疫苗rBCG-Sj26GST对小鼠的保护作用,用分枝杆菌重组疫苗rBCG-Sj26GST免疫雄性BALB/c,结核杆菌H37Ra进行攻击,检测小鼠淋巴细胞刺激指数(SI),腹腔巨噬细胞培养上清释放NO量,小鼠血清IFN-γ、IL-2的含量,并计数小鼠肝、肺活细菌数.rBCG-Sj26GST疫苗免疫的小鼠,其脾淋巴细胞刺激指数(SI)为4.12±1.11,与对照组(2.63±0.47)、载体组(1.06±0.08)和BCG组(1.50± 0.41)相比,差异具有显著意义(P＜0.05);rBCG-Sj26GST组巨噬细胞释放的NO量明显高于对照组(P＜ 0.05).小鼠血清IFN-γ的浓度较对照组高33?%,但差异无显著意义(P＞0.05);与载体组相比,差异具有显著意义(P＜0.05).血清白介素-2的浓度较对照组高43?%,较载体组高38?%,但差异无显著意义(P＞ 0.05).经rBCG-Sj26GST免疫的小鼠受结核杆菌攻击后其肺、肝脏结核菌数较对照组少.分枝杆菌重组疫苗rBCG-Sj26GST免疫小鼠后能提高小鼠淋巴细胞刺激指数,刺激IFN-γ、IL-2的分泌,说明此疫苗能诱导CD+4Th1和CD+8CTL的细胞免疫反应,增强小鼠细胞免疫功能,并使小鼠能抵抗结核杆菌的攻击.     

猪瘟基因疫苗在小鼠肌肉中的免疫病理学观察

应用细胞免疫组化法肌肉注射猪温基因疫苗pcDST,pcDSW后,对基因疫苗在小鼠胫前肌组织中的表达及组织病理学进行了动态观察。结果为：pcDST质粒肌注后第3天,pcDSW质粒肌肉注后第5天,在胫前肌肌肉中可检测到表达产物,持续表达20天以上,初期肌肉表现为机械性损伤性炎症变化,中期在炎症区有CD^8 免疫细胞的浸润性损伤性变化,后期恢复,表明基因免疫部位的免疫损伤及非炎症对促进免疫水平有积极的意义。     

鸡传染性法氏囊病基因疫苗的研制进展

从重组体的构建、保护性等方面综述了传染性法氏囊病基因疫苗的国内外近期研究情况。     

树突状细胞在抗结核分枝杆菌感染中的作用

树突状细胞（Dendritic cells,DCs）是最有效的抗原呈递细胞.DCs能够摄取外来物质,包括结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）,并将其呈递给效应性淋巴细胞,激发宿主对抗病原微生物感染的免疫反应.因此,树突状细胞与结核分枝杆菌的相互作用在感染初期机体发动免疫应答中十分重要.研究树突状细胞和结核分枝杆菌间的相互作用,有利于从根本上了解细菌-宿主作用机理,为阐明结核分枝杆菌逃避免疫的机制提供依据.     

结核分枝杆菌HSP65-IL-2融合基因疫苗的构建及表达

构建结核分枝杆菌HSP65-IL-2融合基因疫苗,并对其在体外真核细胞中进行表达。用EcoRV和Hindm双酶切合HSP65-IL-2融合基因的pPaO-hsp65-IL-2载体,回收目的基因片断HSP65-IL-2,并将其亚克隆入同样双酶切的真核表达载体pcDNA3．1（-）中,重组质粒酶切鉴定正确后以脂质体瞬时转染COS-7细胞,并通过间接免疫荧光技术检测目的蛋白的表达。重组真核表达质粒酶切后可获得约2067bp的融合基因HSP65-IL-2片段,间接免疫荧光检测重组质粒转染的COS-7细胞,可在细胞胞浆中看到特异性的绿色荧光。成功地构建了结核分枝杆菌HSP65-IL-2融合基因的真核表达载体,且该重组载体可在体外真核细胞中获得特异性的表达。     

奶牛机体对环形泰勒虫疫苗的免疫应答

奶牛注射环形泰勒梨形虫疫苗后，会引起白细胞以及淋巴细胞中Ｔ细胞百分率的上升，而对红细胞数、血红蛋白的含量无明显影响。实验结果表明，环形泰勒虫疫苗的注射会引起奶牛机体细胞介导免疫的增强。     

基因免疫防治疾病的新途径

基因疫苗的研究经历了以理论提出到进入临床试验的发展过程,人们已获得了不少宝贵的知识和经验。     

基因疫苗及影响其免疫效果的因素

基因疫苗被视为“第3代疫苗“,是目前疫苗研究领域的热点.本文回顾了基因疫苗的诞生,阐述了其优越性,重点讨论了增强其免疫效应的策略包括合理的载体设计、细胞因子及共刺激因子与抗原的共表达及适宜的接种途径等.     

LAGE-1DNA肿瘤疫苗的抗肿瘤治疗效果研究

以LAGE-1转染EMT6构建小鼠乳腺癌肿瘤模型;将BalB/c小鼠随机分为4组,以pcDNA3.1/LAGE-1及对照pcDNA3.1分别接种实验组和对照组各三次.于末次免疫后10 d在小鼠左背部、右背部皮下分别种植EMT6肿瘤细胞和EMT6/LAGE1肿瘤细胞．荷瘤后观察成瘤时间、肿瘤大小,并对小鼠脾细胞进行CTL细胞杀伤活性实验来观察DNA疫苗引起的免疫反应.结果显示LAGE-1DNA疫苗在体内能诱导有效的特异性肿瘤免疫应答,该疫苗简便有效.     

结核分支杆菌Ag85B DNA疫苗构建、免疫原性及其保护效力

构建结核分支杆菌分泌蛋白Ag85B编码基因的DNA疫苗,研究其免疫原性和保护效力.构建该DNA疫苗并经鉴定后,应用Qiagen试剂盒大量纯化无内毒素的质粒DNA.将C57BL/6小鼠随机分为4组,分别3周间隔3次用生理盐水（A）、载体质粒（B）、卡介苗（C）、Ag85B DNA疫苗（D）免疫小鼠,通过ELISA方法检测血清中抗Ag85B抗体及其亚型.第三次免疫后28 d用结核分支杆菌H37Rv攻击,观察小鼠体重变化,攻击4周后检测细胞因子IFN-γ、IL-12,进行肺组织病理检查及菌落计数等.经Ag85B DNA疫苗免疫的小鼠特异性抗体IgG均显著高于对照组,而且IgG2b均高于IgG1和IgG2a.结核分支杆菌攻击后各组小鼠体重变化呈现不同趋势,A、B组小鼠体重从第3周开始下降;C组体重总体呈上升趋势;D组体重第2周开始下降,之后维持不变.MTT法检测脾淋巴细胞增殖实验中D组的刺激指数显著高于其它组;D组小鼠脾淋巴细胞转化率也显著高于A、B组.肺组织菌落计数C组最低,其次是D组.大体病理结果显示C组和D组肺组织病变较A、B组轻.A、B组肺泡腔内有较多渗出液,肺泡壁充血、水肿.C组肉芽肿数目最多.上述结果表明Ag85B DNA疫苗具有较强的免疫原性,呈TH1型细胞介导的免疫应答.Ag85B DNA疫苗的免疫保护效力不如BCG,有待进一步研究其应用价值.     

结核分枝杆菌esat6-cfp 10融合基因的克隆表达及纯化

获得esat6-cfp 10重组蛋白,为研究其在结核病诊断和预防中的作用奠定一定基础。以结核杆菌H37,Rv基因组DNA为模板,克隆cfp10基因,将其插入到pGEM-7ZF( )克隆载体后与esat6基因连接,构建含有esat6和cfp10融合基因的克隆载体esat6-cfp 10。酶切消化esat6-cfp 10重组质粒,将esat6-cfp 10基因亚克隆到pPROEX^TM HTb原核表达载体,经IPTG诱导后,可表达出分子量约28kD的esat6-cfp 10融合蛋白,重组蛋白经镍柱纯化后,得到了高纯度的esat6-cfp 10融合蛋白。Western blot证明表达重组蛋白有较好的免疫原性。     

结核杆菌Ag85B的表达纯化

为构建抗结核病新型疫苗，以结核杆菌标准毒力株H37Rv DNA为模板，用PCR法克隆抗原85B的编码基因，将该基因重组到表达型质粒pQE30中，表达的His6 Tag-Ag85B融合蛋白分子质量约32ku，用亲和层析一步法纯化的重组蛋白纯度好，得率高，为进一步的免疫研究创造了条件。     

双向电泳和肽质谱技术分析结核杆菌H37Ra感染巨噬细胞引致的差异表达蛋白

利用双向电泳及质谱技术对感染结核杆菌H37Ra株前后的巨噬细胞U937株的蛋白质组进行分离和比较分析．双向电泳后在分子质量20～200ku，等电点pI3～10范围内分离出1913个不同蛋白质斑点，肉眼可以明显看见4个蛋白质斑点在表达上的差异．对其中分子质量约75ku等电点约9．5的蛋白质斑点酶解后，进行质谱分析，鉴定为分子质量75．4ku、等电点9．52的蛋白DEAD／H Box Polypeptide 18．说明用蛋白质组学研究结核杆菌与巨噬细胞相互作用机理是可行的，所鉴定的蛋白质DEAD／H Box Polypeptide 18可能与巨噬细胞防御系统有关．     

结核杆菌19ku脂蛋白的表达与纯化

目的:通过基因工程技术获得重组结核分枝杆茵19 ku蛋白。方法:应用PCR技术扩增卡介苗的19 ku蛋白DNA序列;以质粒pET28a为表达栽体,构建19 ku重组质粒,然后转化大肠埃希菌BL21(DE3);在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下,分别对不同诱导时间的表达产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),凝胶经考马斯亮蓝染色检测蛋白。通过镍柱纯化后获得目的蛋白。结果:重组质粒pET28a-p19测序表明与报道的序列相同。它在大肠埃希菌BL21(DE3)细胞内以可溶性形式表达。不同IPTG诱导时间实验表明重组结核分枝杆茵l9 ku蛋白诱导4 h在大肠埃希菌中的表达量最高。结论:pET28a-p19大肠埃希菌工程株可高表达结核分枝杆菌重组19 ku蛋白。     

尘肺结核患者Mycobacterium tuberculosis耐药基因突变研究

研究尘肺结核患者结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)耐药基因突变与耐药性的关系。在97例尘肺结核患者痰中检出MTB菌株28株,采用PCR-SSCP法检测katG、rpoB和rpsL基因突变,并与采用常规药敏试验(AST)法检测的耐药结果进行对比分析。采用PCR-SSCP法检测katG、rpoB和rpsL基因,突变率分别为42.86%(12/28)、42.86%(12/28)和32.14%(9/28),采用AST法检测INH、RFP和SM,耐药率分别为64.23%(18/28)、60.71%(17/28)和53.57%(15/28),两者之间差异均无显著性(P>0.05)。其中多耐药株20例(71.43%),包括耐三种药物12例(42.86%),耐两种药8例(28.57%),单耐药株6例(21.43%),敏感株2例,耐药率92.86%。PCR-SSCP法检出3个基因联合突变8株,与AST法符合率为66.67%(8/12);2个基因突变5株,符合率为62.50%(5/8);单基因突变2株,符合率为33.33%(2/6)。结果表明:PCR-SSCP技术适用于MTB katG、rpoB和rpsL耐药基因突变的筛选,对指导尘肺结核患者临床用药上具有重要意义。     

表达结核杆菌抗原的重组酿酒酵母免疫小鼠研究

近年来研究显示全细胞重组酿酒酵母疫苗具有治疗性疫苗潜能.为了研究重组酿酒酵母结核病候选疫苗的免疫效果,将IFN-γ基因与结核杆菌抗原蛋白Ag85B、ESAT6的基因融合,利用pHR酿酒酵母表达系统和同源重组方法,成功构建了以酿酒酵母Y16为宿主的表达融合蛋白IF-γ-Ag85B和IF-γ-ESAT6-Ag85B的重组酿...     

海豚链球菌灭活疫苗对罗非鱼免疫效果的研究

用野外分离的海豚链球菌(Streptococcus iniae)海水菌株HD-1和淡水菌株TBY-1制备成含1×1010cfu/mL的灭活疫苗,以0.1 mL/尾的剂量对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)进行腹腔注射,免疫2次,测定免疫后1周、3周和5周免疫鱼血清中抗海豚链球菌的抗体滴度和相应菌株攻毒后的相对保护率,以评价海豚链球菌灭活疫苗对罗非鱼的免疫保护性.结果显示免疫鱼血清中抗体凝集效价在免疫后第3周和第5周呈显著性升高,且两种疫苗免疫血清存在明显的交叉凝集反应,说明HD-1和TBY-1抗原具有交叉免疫原性.在免疫后第4周,利用8倍半数致死量浓度(LD50)的海豚链球菌强毒菌株进行攻毒试验,结果显示:HD-1和TBY-1免疫组的死亡率分别为5%和0%,相对保护率分别为93.8%和100%;未经免疫的阴性对照组的死亡率分别为77.5%和62.5%.