聚丙烯酰胺凝胶电泳快速显色方法的研究

通过对聚丙烯酰胺凝胶电泳的固定方法、时间、染色液种类、染色方法及蛋白灵敏度的研究,确定了以10%三氯乙酸为固定液,室温固定10min的固定方法;染色液为：考马斯亮蓝G-250、95%乙醇和10%磷酸,染色时间为15min;蛋白质灵敏度与考马斯亮蓝R-250相当,达到0.1μg。     

大麦醇溶蛋白酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳条件的探索

以栽培大麦和中国近缘野生大麦为材料，用复合提取剂(内含25％2-氯乙醇和1％2-巯基乙醇)对其种子醇溶蛋白过夜提取后制备的样本液，在保持凝胶浓度(18％)不变的基础上，通过改变交联度，催化剂用量，进样量以及电场强度和电泳时间所获得的不同电泳图谱，经比较分析可知，在酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系中，交联度为3．33％，催化剂(0．6％H2O2)用量在26μL～30μL之间，进样量控制在5μL～10μL之间，室温下500V稳压电泳90min左右对醇溶蛋白分离效果好，电泳图谱清晰，分辨率高。实验结果亦表明，适当提高交联度和H2O2用量，有助于增加凝胶硬度，加快凝胶聚合速度，缩短制胶时间。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳体系中蛋白质的荧光标记分析

在室温下,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法,分离经荧光胺或对氯荧光胺荧光标记的蛋白质样品,可在2.5小时内完成蛋白质样品的分离和其区带的鉴定。耗时是传统方法的四分之一,而且荧光图象清晰、灵敏度较高。     

改良聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定籼粳分化的同工酶带

对同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行改进:液氮研磨样品,0.1 mol/L tris-顺丁烯二酸酐(pH=7.0)缓冲液提取,Bio-rad MP3电泳槽(凝胶规格10 cru×7.5 cm×0.5 mm)在120～150 V电泳2～4 h,得到快速、经济、分辨率高的分析效果.分析了水稻4种同工酶,发现Est-3,Est-4,Est-x和Pox-x4个新的籼粳分化位点,其中Pox-x为一新位点,该位点在籼稻中有1条带,在粳稻中为哑等位基因.     

常见赤潮藻类的变性梯度凝胶电泳分析

为了解我国典型有毒有害赤潮藻类的变性梯度凝胶电泳( DGGE)指纹图谱以及DGGE技术在赤潮藻类分析鉴定中的作用,本课题组运用DGGE技术,研究了我国沿海7种重要赤潮藻类的单一种类以及混合种类样品的18S rDNA V3区的DGGE指纹图谱,并且对2009年10月底在广东省珠海海域发生的双胞旋沟藻(Cochlodinium gemtnatum)赤潮样品进行了DGGE分析.结果表明,DGGE技术能够对环节环沟藻、海洋原甲藻、血红哈卡藻、锥状斯氏藻、中肋骨条藻、塔玛亚历山大藻、双胞旋沟藻7种常见的海洋赤潮藻类具有较好的区分效果,同时监测出赤潮样品中双胞旋沟藻、血红哈卡藻、环节环沟藻和海洋原甲藻4种优势种,种类组成与显微镜观察结果具有较好的一致性.结果说明DGGE技术可作为一种辅助方法对赤潮藻类进行分类鉴定.     

杨树接种溃疡病菌Botryosphaeria dothidea 后蛋白质表达差异分析

应用双向凝胶电泳技术,分析了抗病毛白杨和感病北京杨接种溃疡病菌Botryosphaeria dothidea前后的蛋白质表达差异。通过比较两个树种接菌前后的双向凝胶电泳图谱,结果得到在两树种之间共有35个3倍蛋白质差异点,其中接种前毛白杨与北京杨相比上调蛋白4个,下调15个;接种后相比则上调蛋白7个,下调9个。同一树种内,毛白杨接种后与对照相比检测到8个上调蛋白,6个下调蛋白;北京杨接种后与对照相比有8个上调蛋白、10个下调蛋白。对这些差异蛋白产生条件及含量进行分析,笔者认为接菌前抗病毛白杨与感病北京杨相比上调蛋白可能与杨树抗溃疡病的组成型抗病机制有关,接菌后抗病毛白杨与感病北京杨相比上调蛋白可能与杨树对溃疡病的诱导型抗病机制密切相关。最后利用质谱技术鉴定出其中的4个差异蛋白分别是核酮糖二磷酸羧化酶小链、预测蛋白、过氧化物歧化酶、异戊烯二磷酸-异构酶,这些差异蛋白可能与杨树对溃疡病的抗性有一定关系。     

人骨骼肌双向电泳条件优化及部分蛋白质鉴定

目的建立和优化人骨骼肌组织双向电泳模型,为深入探讨骨骼肌萎缩的分子机制提供方法上的保障。方法使用两性离子去垢剂CHAPS和SB3-10,并配合不同浓度的离液剂抽提骨骼肌蛋白质,并通过双向电泳对蛋白质进行分离,用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)对选取的蛋白质进行鉴定。结果优化过的双向电泳模型可在一张凝胶上分离800多个蛋白质点,通过MALDI-TOF鉴定出HUMANserine/threonine protein kinase KKIALRE等4种低丰度蛋白质。结论多种去垢剂和离液剂的组合使用才能获得对组织中蛋白质较好的抽提效果。获得的人骨骼肌双向电泳图谱是对人类骨骼肌蛋白质组学数据库的有益补充,为使用比较蛋白质组学方法筛选人肌病关键蛋白质提供了实践和理论基础。     

维生素B12的毛细管电泳——化学发光检测研究（英文）

基于维生素B₁₂(VB₁₂)对鲁米诺-双氧水体系良好的化学发光（CL）催化活性,研究确立了一种新型毛细管电泳—化学发光（CE-CL）检测方法,用于这一重要营养物质的准确CL分析.预处理阶段,连二亚硫酸钠（Na₂S₂O₄）被确定为将VB₁₂（Co（III））转化成VB₁₂（Co（II））的适当还原剂,以使VB₁₂在luminol-H₂O₂发光体系中获得良好的催化信号.这一过程产生的CL干扰组分,则通过毛细管电泳（CE）加以分离除去.实验中,VB₁₂可被温和还原并由催化所得CL信号精确测定.采用实验室自行组建的CE-CL检测装置,该测试过程可在20 min内完成;检测下限（LOD）2×10^-7mol/L（S/N=3）,线性范围6×10^-7～6×10^-4 mol/L（r²=0.968）,相对标准偏差（RSD）2.4%（n=9）.对药品中VB₁₂含量进行加标回收实验,回收率97%～106%.相较于已有关于VB₁₂的CL分析研究,本文首次考察了预还原处理中产生的干扰组分及其分离过程,以便捷操作获得更为可靠的检测数据.     

马尾松根部蛋白双向电泳分离体系的构

为了在蛋白质水平探讨外生菌根提高马尾松抗旱能力的机制,笔者通过对菌根化和非菌根化马尾松植株根部蛋白提取和SDS聚丙烯酰胺凝胶染色条件进行研究,建立了一套较为适合马尾松根部蛋白双向电泳分离的试验体系。结果表明：在每IPG胶条300 μg上样量条件下,采用酚抽法辅以适度超声波破碎进行马尾松根部蛋白提取、敏化和银染后水洗时间均为5 min×3次的快速银染程序进行染色,可以获得较为理想的马尾松根部蛋白双向电泳图谱,该方法可为其他松属树种的蛋白质组学等研究提供参考。     

Methods for Increasing Creditability of Anomaly Detection System

Based on Bayes‘ theorem we point out that the false positive rate must be lower than the intrusion base rate in order to make the Alarm Credibility Probability of the intrusion detection system exceed 50%. We present the methods that have been used in our developing intrusion detection system AIIDS (artificial immune intrusion detection systems) to increase the creditability of anomaly detection system. These methods include increasing the regularities of the system call trace by use of Hidden Markov Model (HMM), making every antibody or detector has finite lifetime, offering the detector a co-stimulate signal to illustrate whether there is damage in the system according to the integrity, confidentiality, or availability of the system resource.