陆地棉花粉成熟过程中特异性蛋自及单花粉电泳研究

本文对不同发育时期的花粉剥出后进行蛋白电泳，结果表明，不同发育时期的花粉其蛋白、过氧化物同工酶和酯酸都有差异，花粉在成熟过程中，伴随着过氧化物酶活性的消失和种类的减少；在花粉进行第一次细胞分裂形成营养细胞和生殖细胞之前，新的蛋白带和酯酶带的出现，尤其是近十种蛋白的大量合成提示这些蛋白在花粉成熟和以后的受精过程中可能有重要作用。对其成熟的花粉进行单花粉电泳表明，没有等位基因的分离现象，只是有约２％的花粉出现新的蛋白带，其原因有待进一步研究。     

泛素-蛋白水解酶复合体通路在小鼠精子变态中的作用

应用重力沉降法分离睾丸各层细胞,通过蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白免疫迹观察各种生精细胞中泛素结合蛋白的表达规律,并通过免疫组织化学方法对其进行组织和细胞水平的定位,表明,在圆形精子和长形精子细胞中泛素结合蛋白增加,在成熟精子中量较低,在精原和精母细胞中量微弱。总蛋白电泳的结果表明,在精子变态过程中蛋白 变化以长形精子细胞转变为成熟精子阶段最为剧烈,其间许多蛋白消失同时半随一些新蛋白的出现,此阶段消     

大鼠染色体的非组蛋白、核糖核蛋白(RNP)与银染蛋白三者关系的研究

本文应用ＴＥＭ技术、电镜细胞化学、胶体金标记和银染技术结合研究了大鼠骨髓细胞染色体现有架。超薄切片结合ＲＮＰ优先染色法在染色体原位显示ＲＮＰ，同时又结合银染电镜扭亏为盈主ＲＮａｓｅ－胶体金定位显示ＲＮＡ，结果显示金颗粒与银颗粒在染色体中分布的位置与ＲＮＰ所在部位恰好一致。说明ＲＮＰ中的蛋白质含有角染的酸性蛋白，即所观察到的染色体骨架非组蛋白、ＲＮＰ中的蛋白部分，银染蛋白三者是一致的。     

马尾松根部蛋白双向电泳分离体系的构

为了在蛋白质水平探讨外生菌根提高马尾松抗旱能力的机制,笔者通过对菌根化和非菌根化马尾松植株根部蛋白提取和SDS聚丙烯酰胺凝胶染色条件进行研究,建立了一套较为适合马尾松根部蛋白双向电泳分离的试验体系。结果表明：在每IPG胶条300 μg上样量条件下,采用酚抽法辅以适度超声波破碎进行马尾松根部蛋白提取、敏化和银染后水洗时间均为5 min×3次的快速银染程序进行染色,可以获得较为理想的马尾松根部蛋白双向电泳图谱,该方法可为其他松属树种的蛋白质组学等研究提供参考。     

种子蛋白电泳技术

种子蛋白电泳是指通过特定的电泳方法对种子蛋白进行分离和鉴别的一种技术,最常用的是酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。聚丙烯酰胺凝胶电泳作为一种高分辨率的分析鉴定技术,在蛋白质、多肽、核酸等生物大分子的分析中一直广泛使用,通过种子蛋白电泳获得的指纹图谱在测定良种质量(真伪、纯度)防止伪劣种子流入市场,保护我国名、优、特种质资源及育成的知识产权和育种家们的权益等方面,均具有重要意义。     

SPC-A-1 70KD热休克蛋白抗原肽复合物的提纯及抗瘤免疫研究

目的探讨人肺腺癌细胞(SPC-A-1)70 KD热休克蛋白的提取方法及体外抗肿瘤作用.方法 SPC-A-1培养至对数生长期,43 ℃加热处理12 h,超声破碎细胞离心取上清、盐析沉淀、30 KD分子筛滤过、SDS-PAGE分离鉴定,MTT法测定其体外细胞毒活性.结果提取产物经SDS-PAGE分析,其电泳区带在70 KD位置处,细胞毒性试验表明,此复合物能够加强脐血有核细胞的抗肿瘤效果.结论该提取方法流程简便、实用,有助于临床广泛开展热休克蛋白的应用.     

应用比较蛋白组学技术筛选乳腺癌血清标志物

 为了寻找乳腺癌血清标志蛋白标志物,本研究用试剂盒去除血清样品中的高丰度蛋白,通过固相pH梯度双向凝胶电泳分离乳腺癌病人血清和非乳腺癌血清,银染显色,分析比较电泳图谱寻找差异蛋白.用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱测定差异蛋白的肽指纹图谱,MASCOT软件分析确定为何种蛋白,然后用蛋白印迹验证与乳腺癌发生关系密切的差异蛋白.本研究获得了分辨率高、重复性好的双向电泳银染图谱,得到3个差异明显的蛋白,经肽指纹分析并结合数据库查询,初步鉴定为人血凝级联反应中的关键酶、人体细胞凋亡蛋白抑制剂样蛋白ILP-2、人体HP蛋白.蛋白印迹研究表明ILP-2在乳腺癌血清中的含量明显高于非乳腺癌血清样本,该蛋白有可能是乳腺癌标志物.     

离体玉米精细胞的电泳分析与分离

细胞显微电泳表明，介质ＰＨ值对离体玉米精细胞电泳迁移率有较大影响，在ＨＣｌＧｌｙ（甘氨酸）缓冲液中，其等电点介于ＰＨ２．４－３．０；在ＰＨ６．７的ＭＥＳ缓冲液中，电泳后统计分析表明，离体玉米精细胞可以区分为电泳迁移率有差异的２种类型，其电泳迁移率分别为（１．８０３±０．０４３）×１０＾－６和（１．６６７±０．０５２）×１０＾－６ｍ＾２．Ｖ＾－１．ｓ＾－１。根据电泳迁移率的差异，利用一种支无持细胞电     

离心洗脱法在Rb蛋白与细胞分化关系研究中的应用

离心洗脱技术可分离到ＨＬ６０细胞周期中同步的Ｇ０／Ｇ１期细胞，被视黄酸诱导的Ｇ０／Ｇ１细胞可以进行一个正常的细胞周期，Ｒｂ蛋白磷酸化平随细胞周期而变化，但不能进入第二个细胞周期，细胞开始分化，Ｒｂ蛋白磷化水平的降低，是由于ＲＡ首先诱导细胞分化，使细胞生长停止，分化的细胞失去磷酸化蛋白能力的结果。     

转录因子COUP-TFII对端粒酶活性的抑制及其相互作用蛋白的分离和鉴定

端粒酶催化亚基hTERT的转录调控是端粒酶活性调节的关键步骤．实验分离和克隆了参与hTERT转录调控的转录因子COUP-TFII，分析了其对HeLa细胞端粒酶活性的生物学效应，并分离和鉴定了与其相互作用的蛋白质．结果表明在以hTERT启动子为诱饵的酵母单杂交体系中，COUP-TFII可以与hTERT启动子结合；得到了纯度高达98％的COUP-TFII融合蛋白，并且其结合于hTERT启动子-201～ 35区段，抑制HeLa细胞端粒酶的活性：从HeLa细胞核蛋白中分离到了2种与COUP-TFII相互作用的蛋白质．研究初步揭示了COUP-TFII在细胞分化和肿瘤转化过程中的参与途径和调控机制，为开启以端粒酶为靶目标的肿瘤治疗奠定了基础．     

麦洼牦牛和犏牛乳中上皮粘蛋白PAS－I的研究

采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析了麦洼牦牛和犏牛乳中上皮粘蛋白ＰＡＳ－Ⅰ，结果凝胶经银染色后ＰＡＳ－Ｉ仅显示出一条区带，其分子量与中国荷斯坦牛乳中ＰＡＳ－Ｉ相近．实验还观察到乳中ＰＡＳ－Ｉ的含量及在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上的迁移率存在个体差异     

油菜花粉钙结合蛋白的研究

以油菜花粉(Brassica campestris)为材料纯化了钙调素(CaM),并得到一种新钙结合蛋白(NCBP)。经SDS-PAGE、PAGE和等电聚焦电泳(IEF)鉴定,这两种蛋白质均表现均一。CaM分子量为18.8kD, NCBP为16.3kD,等电点分别为3.6和4.2。研究证明花粉CaM具有与其他来源CaM所特有的性质,对环核苷酸磷酸二酯酶(简称PDE)有明显的激活作用,而花粉NCBP不明显。花粉CaM在PAGE和SDS-PAGE中电泳行为有Ca²⁺效应,而NCBP仅表现在PAGE中。经氨基酸组成分析表明两种蛋白质氨基酸组成不同,但均含有较多的酸性氨基酸,不含Trp, 含1个Cys。CaM和NCBP N-端均为封闭,CaM C-端为-Met-Ala-Lys-COOH。两种蛋白质具有不同的肽谱和CD谱。用DTNB修饰花粉CaM Cys残基,则激活PDE的能力明显下降。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳检测水稻SSR标记

以水稻为试验材料,提取水稻基因组DNA,选择多态性SSR标记,并将标记产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,最后硝酸银染色,试图建立了一种行之有效、简便、快捷的应用于水稻SSR标记的PAGE银染检测方法。     

5种黄精属植物的蛋白指纹分析

本文用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ—ＰＡＧＥ）技术分析了５种黄精属植物根状茎和叶的蛋白指纹．结果表明：（１）它们的根状茎均含有３８．５、２８、１８．６ｋＤ蛋白质;（２）根状茎和叶的蛋白质种类有很大差异;（３）５种黄精属植物各含有自己特有的蛋白质,它们在本属植物物种鉴定中一定参考价值．     

聚丙烯酰胺凝胶电泳检测大豆SRAP标记

以大豆为试验材料,提取了大豆的基因组DNA,对大豆进行SRAP-PCR扩增,并对产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,最后硝酸银染色。建立了一种行之有效、简便快捷的应用于大豆SRAP标记的PAGE银染检测方法。     

葫芦科6个栽培品种的种子油体蛋白鉴别

以甘肃常见葫芦科植物２个属６个栽培种的成熟种子为材料，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法，分离出组成油体半单位膜的特有蛋白质——油体蛋白（Ｏｌｅｏｓｉｎｓ），并通过油体蛋白谱带分析探讨了葫芦科不同属种间谱带上的相似性和相异性．结果表明：葫芦科不同的属在谱带上有明显的相似性，但每个属又具有足以区别于其它属的特征性谱带；同属的几个不同栽培种之间也可相互区别．此法可用来鉴别含油植物的种子，为植物分类学提供依据     

应用重组Etp28抗原免疫预防球虫病的研究

将构建好的可表达ＧＳＴ融合蛋白的重组病毒ＡｃＭＮＰＶ－ＯＣＣ－Ｅｔｐ２８感染Ｓｆ９细胞,７２ｈ后取感染了病毒的细胞裂解物上清液进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｍ－ｂｌｏｔ分析,结果显示５３ｋＤａ的融合蛋白在昆虫Ｓｆ９细胞中得到了高效表达,表达水平为占细胞总蛋白的２１．３％;将ＧＳＴ－６ｘＨｉｓ－Ｅｔｐ２８注射维菌鸡进行免疫保护试验,结果表明免疫组比对照组在平均增重和盲肠粘膜层卵囊计数方面有一定程度     

上海四膜虫酚溶性染色质非组蛋白的研究

收集对数生长期的上海四膜虫，分离细胞核，制备染色质并以酚抽提制得酚溶性染以质非组蛋白，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得四膜虫酚溶性染色非组蛋白有六条明显的蛋白带，其表观量为８８ＫＤ，７９ＫＤ，７０ＫＤ，５２ＫＤ，３８ＫＤ，２４ＫＤ，与鼠肝酚溶性染色质非组蛋白具有明显的５条的分子量有显著的差异。     

嗜热菌Pyrococcus horikoshii OT3蛋白酶基因的原核表达、纯化和性质表征

将来源于嗜热菌Pyrococcus horikoshii OT3的蛋白酶(PH1704)基因在大肠杆菌BLP-CodonPlus中高效表达.采用超声、热失活和HiTrap Q Sepharose柱层析等方法对产物进行分离纯化.通过SDS-PAGE,Native-PAGE和Western-blot对表达产物进行鉴定,发现该重组酶以十二聚体为主的寡聚体形式存在,并具有SDS抗性.蛋白酶活力染色表明,其六聚体以上有活力.以azo-gelation为底物,对其酶学性质进行初步研究表明,其最适温度为85℃,最适pH=8.0,并且具有良好的热稳定性.