碱裂解法提取质粒DNA方法的改进

对碱裂解法提取质粒DNA的方法进行了一些改进 ,在室温下裂解菌体和变性DNA ;用NH4 Ac和LiCl同步沉淀除去样品中的蛋白质和RNA ,降低了对超螺旋质粒的剪切作用 ,得到高质量的质粒DNA。     

农杆菌质粒DNA高效提取方法研究

以EHA105菌株为实验材料,通过优化质粒扩增条件、加大菌液使用量、改良提取纯化过程中所用试剂等,简化了操作流程,给出了一种高效提取农杆菌中质粒DNA的方法。结果表明,选择LB＋KANA为培养基、抗生素质量浓度为50 mg/L,细菌培养至OD600=0.634～0.714时,以5 mL/次用量取菌液裂解;以改进方法提取试剂,得率与常规方法相当。该方法在满足PCR检测条件的前提下既减少了酚、氯仿等有毒试剂的用量,又省时、经济、方便,为植物转基因工程中目的物DNA的检测提供了技术支持。     

嗜热脂肪芽孢杆菌质粒的研究

从广西各地的八个温泉的水样中分离到２０株耐药的嗜热脂肪芽孢杆菌，用改良的ＢｉｎｇｈａｍＳＤＳ裂解法，从其中的１５株菌中检测到质粒。再用琼脂糖凝胶电泳法及电子显微镜技术对耐氨苄青霉素（２５μｇ·ｍｌ－１）的１２号菌株的质地作了较深入的研究。发现该质粒为共价闭合坏状ＤＮＡ分子（ＣＣＣＤＮＡ），共分子量为１４．６３×１０６，澳化乙锭（１μｇ·ｍｌ－１）和吖啶橙（２０μｇ·ｍｌ－１）共同作用可将该质粒消除掉。该质粒的功能有待进一步研究。     

质粒DNA快速提取法

介绍了一种质粒ＤＮＡ的快速提取方法，所分离出的ＤＮＡ纯度较好，全部操作均在一只Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中进行，含质粒ＤＮＡ的上清液可直接点样走琼脂糖凝胶电泳。此法操作简便，整个提取过程只需３０ｍｉｎ便可完成。     

短小芽孢杆菌质粒pCJ转化枯草杆菌的研究

本文采用我国自己分离的短小芽孢杆菌抗四环素质粒pCJ3转化枯草杆菌的各种突变体.质粒DNA经氯化铯—溴化乙锭密度梯度离心纯化后转化枯草杆菌的感受态细胞.结果表明枯草杆菌BR151,SB202,168,QB1130及QB1133都可作为质粒pCJ3的受体,转化效率在10~3左右,其中以SB202这株突变体为最高,从各种转化体中提取的质粒及经BamHI消化后的质粒的电泳图均与原质粒pCJ3及其BamHI酶切片段相同,并具有pCJ3的抗四环素转化活性.将pCJ3DNA经BamHI酶切后重新用T_4-DNA连接酶连接再转化枯草杆菌细胞,其转化效率比原质粒高1—2个数量级.研究了二价金属离子、pH及培养基成分对转化的影响,结果证明:Ca~(++)对枯草杆菌转化有促进作用,Cu~(++),Zn~(++)则有抑制作用,转化的最适pH在7.2—7.5之间;营养丰富培养能提高转化效率.     

一种高效安全提取质粒DNA方法的建立

在碱裂解法提取质粒DNA的基础上做了改进,将NaOH浓度从0.20 mol/L降低为0.10 mol/L,使得超螺旋DNA的得率进一步提高.采用silica法纯化质粒DNA,避免了使用有毒性和挥发性气味的饱和酚和氯仿,使得操作更安全简单.电泳结果表明,提取的质粒DNA质量好,得率高,并且可以直接进行下一步的酶切、连接及转化等实验.同时,该方法中使用的硅胶可以回收再生进行重复利用,节省了实验费用.     

几种农杆菌质粒DNA提取方法的比较

常规的农杆菌质粒DNA提取常采用碱裂解和酚、氯仿提纯方法，得率较低，一般在50ng／uL以下。就经典的碱裂解法(方法一)和在碱裂解法的基础上改进的方法二(去除了酚、氯仿提取过程，减少了提取过程中对人的伤害，且缩短了提取时间)以及改进的方法三进行了比较，实验结果表明：改进的方法二更适宜于做PCR检测，而方法三则适合于重组质粒DNA的酶切、PCR鉴定等。     

苏芸金芽孢杆菌与蜡状芽孢杆菌基因组DNA同源性及？…

用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ扩增到６１个标准株,生产用菌株及２４个蜡状芽孢杆菌参比菌株的全ＤＮＡ的指纹图,通过计算多态性扩增片段的大小,利用ＮＴＳＹＳ软件进行聚类分析,蜡状芽孢杆菌菌株并未形成独立于苏芸金芽孢杆菌的聚群,这是近近缘种ＤＮＡ分子水平高度同源的新证据,６１个苏芸金牙孢杆菌的聚类结果表明,其ＤＮＡ指纹图与Ｈ－血清型有一定相关性,与引物０９５５－０３相比,引物０９４０－１２对苏芸金芽孢杆菌不同亚种及     

碱裂解提取质粒DNA的改进方法

实验室中常用的质粒提取方法是碱裂解法.一般碱裂解法提取质粒相对耗时长,而且需要冰浴,条件较为严格,本文尝试对碱裂解法进行改进,即在控制菌体量的前提下连续加入溶液Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,进行质粒提取,简化了操作步骤,缩短了实验时间(由150 min左右缩短为110 min以内),质粒收率和质量不变.     

短小芽孢杆菌碱性蛋白酶的性质

对短小芽孢杆菌ｃ１７２（ｐＢＸ９６）转化子发酵淀粉产生的碱性蛋白酶,采用硫酸铵沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５脱盐、ＤＥＡＥ－纤维素柱层析等方法进行纯化,并对纯化酶的性质进行了研究．结果表明,酶反应的最适ｐＨ值为１１．０;在ｐＨ８．０～１１．０之间稳定;最适反应温度为４０℃;热稳定性较好,４５℃下处理３０ｍｉｎ酶活性不变,６０℃下处理３０ｍｉｎ活力保留６５％．对甲基苯磺酰氟（ＰＭＳＦ）能完全抑制该酶活性,洗涤剂中的三聚磷酸钠对酶有较大钝化作用．     

单纯形法的一种改进

为减少转换次数,节省计算时间及工作量,给出了线性规划问题单纯殂法的一种改进方法。     

苏云金杆菌在温室蔬菜害虫防治中的应用

介绍了苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis Berliner)的杀虫机理、分离纯化方法及其在温室蔬菜害虫生物防治中的应用．近年来，温室蔬菜生产中害虫的发生和危害日益严重，化学农药的大量使用，使害虫天敌被大量杀伤，害虫抗药性增强，环境污染加剧，尤其是蔬菜上残留的化学农药直接威胁着人类的健康．苏云金杆菌作为一种高效微生物杀虫剂，在温室蔬菜害虫的生物防治中占有重要的地位．     

从针叶树营养体组织中提取高纯度DNA的方法

ＤＮＡ提取质量是影响ＤＮＡ分析实验结果的关键因素之一,保持不同样本间ＤＮＡ质量的一致性对实验结果的可靠性至关重要,这要求在材料选择和提取方法两个方面都要加以考虑。介绍了从针叶树营养体组织中提取高纯度ＤＮＡ的方法,提取的关键是选择合适的材料,不同于通常采用针叶进行ＤＮＡ提取,本实验选用尚未木质化的针叶树嫩梢进行ＤＮＡ提取,可以在较为简单的实验条件和实验程序下提取高质量ＤＮＡ。按照作者提供的提取方法,     

改进的细菌转化试验方法

本文对“细菌转化实验方法”进行了改进。用改良碱酶法制备的质粒DNA(PBR322)作供体,转化经氯化钙处理的受体菌E.Coli C600,使后者获得抗氨苄青霉素和抗四环素的特性。改进后的转化方法操作简便,不受设备限制。     

环状芽胞杆菌基因启动子的分离与鉴定

环状芽胞杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｉｒｃｕｌａｎｓ）总ＤＮＡ经Ｓａｕ３ＡＩ酶切后插入到启动子探针型载体ｐＳＵＰＶ１的ＢａｍＨＩ位点，转化大肠杆菌后，在卡那霉素的平板上筛选到５０个抗性菌落。从随机挑取的２９个抗住菌落所分离到的质粒ＤＮＡ经限制酶切和琼脂糖凝胶电泳后表明，各质粒均有ＤＮＡ插入片段，对２９个样品进行卡那霉素抗性试验显示，抗性最高的可超过１０００μｇ／ｍＬ这表明来自环状芽胞杆菌的某些基因启动子能在大肠杆菌中十分有效地启动基因表达，选取两个最大的克隆ＤＮＡ片段ＢＣ３和ＢＣ６作为探针与Ｂ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓｃ－２．总ＤＮＡ作Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，均获得杂交带。斑点杂交结果表明，这两个ＤＮＡ片段来自不同的基因启动子。对ＢＣ６和ＢＣ３分别进行了限制酶谱分析，并绘制了限制酶图。     

用STM证实质粒pUC18DNA分子新构象的存在

用清高妥液法从大肠杆菌ＢＨ１０１细胞制备出的多拷贝质粒ＰＵＣ１８ＤＮＡ分子的构象具有复杂的多样性，我们在对其进行ＳＴＭ研究计，证实了一种不同于已知构象的新构象的存在。