GFRa1不同剪接变异体mRNA在胃癌及结肠癌组织中的表达

为检测正常胃粘膜及胃癌组织和正常结肠及结肠癌组织中GFRa1 m RNA表达量,以及两种剪接体GFRa1a和GFRa1b的m RNA含量。初步明确胃及结肠组织中GFRa1剪接体存在形式以及与胃癌、结肠癌发生的相关性。采用收集23例正常胃粘膜/胃炎组织、20对胃癌及其切缘组织和6例非癌患者正常结肠活检组织、20对结肠癌及其切缘组织的方法。选择并提取结肠癌细胞系RKO,正常人胃粘膜上皮细胞系GES-1和人胃癌细胞SGC-7901这3种细胞系的RNA。以Alu m RNA为内参照,用定量RT-PCR的方法对胃组织、结肠组织以及所选的细胞系中GFRa1总m RNA含量进行分析。运用DHPLC技术区分GFRa1不同的剪接体,定量测定两种转录本剪接体的比值。结果显示,胃及结肠组织中,与正常及癌组织相比,切缘组织GFRa1总m RNA、剪接体a及剪接体b的m RNA相对拷贝数均显著增加(P0.05)。所有组织中GFRa1剪接体b的m RNA相对拷贝数均高于剪接体a。细胞系RKO、GES-1和SGC-7901均检测到GFRa1剪接体b的表达,而未检测到剪接体a。由此可知,胃和结肠组织以及相应的细胞系中GFRa1主要以剪接体b的形式存在;GFRa1剪接体b的高表达可能在胃及结肠组织癌变过程发挥作用。     

MEN1基因的选择性剪接

多发性内分泌肿瘤I型(MEN1)基因是一个抑癌基因,到目前为止人们只发现了它的一种剪接模式.本实验以MEN1基因为研究对象,设计特异性引物,用RT-PCR检测到细胞中MEN1基因的另一种新的剪接体.利用构建好的含有MEN1小基因的重组质粒转染哺乳动物细胞,扩增小基因的转录产物,并进行序列分析,证实新剪接体的剪接位点位于基因组第5183位和第6196位.通过Western blot检测到了对应大小的蛋白在细胞中的表达,表明MEN1基因在细胞中存在两种不同剪接体,这种新的剪接体表达了一个含有351个氨基酸,大小约为39kD的蛋白质.研究结果为进一步探讨MEN1基因在细胞中的功能提供了重要线索.     

睾丸特异乳酸脱氢酶-C基因选择性剪接的研究

采用RT-PCR方法从牦牛、狗和大鼠睾丸组织中克隆睾丸特异乳酸脱氢酶-C（LDH-C）基因的cDNA序列,结果在3种动物中均发现了4或5种Ldhc剪接体,包括外显子缺失或内含子增加两种类型,其中外显子缺失数量为1或2个的比例高．3种动物中外显子缺失的比例由高到低依次为外显子5,4,7,6;狗和大鼠剪接体中额外增加的内含子部分序列均导致在内含子中提前形成终止密码子;对牦牛和狗睾丸组织LDH同工酶的电泳分析未检测到潜在的多种Ldhc剪接体的表达,推测睾丸组织Ldhc选择性剪接的功能是调控该基因在睾丸中表达的方式之一;用RT-PCR方法克隆牦牛肌肉和心脏组织Ldhc基因,意外检测到Ldhc的两种剪接体,提示Ldhc基因的选择性剪接可能参与睾丸以外的其他组织沉寂Ldhc基因的表达．     

PML分子不同剪接体的分型及其应用

早幼粒细胞白血病(Promyelocytic Leukemia,PML)基因位于15号染色体,含有9个外显子,通过对内含子不同的剪接方式产生7大类20余种不同的PML剪接体.为对PML不同剪接体进行分型,针对PML各剪接体C末端设计5对型特异性引物,通过PCR扩增产物的有无及大小来判断PML分子的型别.利用设计的引物,通过对已知类型的PML质粒进行分型,确定了分型引物的可行性.对一株肝癌细胞系QGY7701中表达的PML分子进行分型,发现其为PML剪接体IV型与II型的混合型.研究表明,利用所设计5对引物的扩增,可以判断出某种组织或细胞中表达的PML分子剪接体型别.     

水稻ⅡB型拓扑异构酶OsSpo11基因的cDNA克隆、表达谱分析及其可变剪接的检测

Spo11基因是减数分裂双链断裂（DSBs）与分裂重组的初始化基因，在基因组进化方面具有重要作用。通过改进的Nest—PCR方法，从水稻愈伤组织中克隆到了水稻DNA拓扑异构酶 OsSpo11基因的cDNA片段。克隆测序与表达研究表明，OsSpo11基因是水稻ⅡB型拓扑异构酶A亚基基因，在水稻不同组织中具有低丰度表达、组织特异性、可诱导性以及前体RNA剪接的可变性等特点。可变剪接异构体的发现，使OsPo11基因在DNA代谢、发育、遗传重组等过程中的生物学功能表现出一定的复杂性，其功能和生物学意义有待进一步研究。     

水稻ⅡB型拓扑异构酶OsSpo11基因的cDNA克隆、表达谱分析及其可变剪接的检测

 Spo11基因是减数分裂双链断裂（DSBs）与分裂重组的初始化基因,在基因组进化方面具有重要作用。通过改进的Nest-PCR方法,从水稻愈伤组织中克隆到了水稻DNA拓扑异构酶OsSpo11基因的cDNA片段。克隆测序与表达研究表明,OsSpo11基因是水稻ⅡB型拓扑异构酶A亚基基因,在水稻不同组织中具有低丰度表达、组织特异性、可诱导性以及前体RNA剪接的可变性等特点。可变剪接异构体的发现,使OsSpo11基因在DNA代谢、发育、遗传重组等过程中的生物学功能表现出一定的复杂性,其功能和生物学意义有待进一步研究。     

LRP-5在不同分化程度胃癌组织中的表达及其意义

通过检测低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP-5)在不同分化程度胃癌中的表达差异及其与胃癌患者临床病理资料之间的关系,探讨LRP-5在胃癌发病过程中的作用.采用实时荧光定量PCR及免疫组化的方法,对比分析了26例高分化、35例中分化、48例低分化胃癌及15例正常胃组织中LRP-5基因在转录和翻译水平的表达情况.实时荧光定量PCR和免疫组化结果均显示:LRP-5在中分化胃癌、低分化胃癌组织中的表达量高于正常胃组织,差异有统计学意义(P0.05),在高分化胃癌组织中与正常胃组织之间比较无明显差别(P0.05).结合临床资料分析表明,LRP-5蛋白在伴有淋巴结转移的胃癌组织中表达高于淋巴结未转移胃癌组织(P0.05),与胃癌患者年龄、性别因素无关.提示LRP-5与胃癌的发生、发展、转移和恶性程度相关,可作为胃癌的诊断、分级和预后的判断依据.     

PPP2R5C转录本在正常人和血液肿瘤病人中的分布情况

目的:建立分析不同PPP2R5C转录本检测方法,分析正常人和血液肿瘤病人中5种PPP2R5C基因转录本的表达特点.方法:根据PPP2R5C基因的结构特点,设计4对引物,利用RT-PCR方法分析9例正常人、7例T细胞-非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)、11例B细胞-急性淋巴细胞白血病(B-ALL)和8例急性髓细胞白血病(AML)病人外周血单个核细胞(PBMC)中PPP2R5C基因的表达情况.结果:所设计的4对引物,均可在样本中扩增到预期PCR产物,其中第1对引物可扩增两个不同大小PCR产物(包含12+13+14外显子的大片段及仅含12+14外显子的小片段),而另3对对引物所扩增的产物分别为10+11+12+12a外显子,Ⅲ+2外显子和Ⅳ+2外显子的基因片段,所有PCR产物均通过核苷酸序列分析证实.结果显示所有样本均表达全部PPP2R5C转录本.结论:初步建立区分不同PPP2R5C转录本的方法,各转录本在正常人和不同血液肿瘤病人中的分布情况基本一致.     

人胃癌组织中FAP-1的表达及意义

为了探讨FAP-1在胃癌中的表达与细胞增殖和凋亡的关系及其临床意义,采用免疫组化SP法检测40例胃癌、20例胃良性肿瘤及10例正常胃粘膜组织中:FAP-1蛋白的表达水平。结果表明FAP-1蛋白的阳性表达主要定位在细胞浆内,少数也可见于核周。FAP-1蛋白在正常胃粘膜组织中呈阴性表达,胃良性肿瘤中的表达率为20%(4/20),胃癌中的阳性表达率70%(28/40),与前两者相比差异有显著性(P<0.01),而对照组与胃良性肿瘤组无显著性差异(P>0.05)。FAP-1的表达与胃癌的病理分化相关,而与年龄、性别、肿块大小、转移性无明显相关性。     

用差异显示反转录PCR银染技术研究小鼠前胃癌相关基因

目的:以N-亚硝基-肌氨酸乙酯(NSEE)作为诱变剂建立NIH小鼠前胃癌动物模型,研究小鼠前胃癌差异表达基因,探索细胞癌变的分子机理.方法:采用mRNA差异显示(DDRT-PCR)、反向Northern点杂交、克隆、测序和生物信息学分析等方法,对其癌变组织中差异表达的基因进行系统的研究分析.结果:得到5条在小鼠前胃正常对照组织、癌变组织之间差异表达的cDNA片段.筛选后,对其中3个差异条带进行DNA序列测定,有1个与已知基因Tpt1高度同源,2个与同1基因片段AK085193.1高度同源.提示这2个基因与小鼠前胃癌的形成有关.     

乙酰胆碱对人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞内钠、磷浓度的影响

采用OlympusAu640生化分析仪,检测了乙酰胆碱作用后培养的人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞内钠和磷的含量,以探讨乙酰胆碱对人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞内钠、磷浓度的影响。结果发现:与正常胃粘膜上皮细胞比较,胃腺癌细胞内钠浓度偏高(P<0 001),而磷浓度降低(P<0 01)。在乙酰胆碱作用下,胃腺癌细胞内钠和磷浓度均升高(P<0 05);正常胃粘膜细胞仅有钠浓度升高(P<0 001),磷浓度无变化。阿托品能阻断乙酰胆碱对磷浓度的升高作用(P<0 05),但对钠浓度无影响。     

30周糖尿病模型大鼠胃排空异常及胃黏膜细胞凋亡的实验研究

目的检测30周糖尿病大鼠胃排空及胃黏膜细胞凋亡的情况。方法取SPF级SD大鼠,应用链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）建立糖尿病大鼠模型。持续30周后。应用酚红实验和光密度的方法检测胃排空。采用Tunel法检测胃黏膜的细胞凋亡。结果30周糖尿病大鼠胃排空异常,中药组与模型组比较有所改善;胃黏膜细胞凋亡严重的是模型组,中药组与正常组无显著差异。结论实验30周糖尿病大鼠胃排空异常,胃黏膜有不同程度的细胞凋亡,模型组细胞凋亡程度明显。中药组与正常组无显著差异表明中药对胃黏膜的保护作用。     

胃溃疡性病变与血清胃蛋白酶原水平的关系

测定97例溃疡型胃癌(GC)和135例胃溃疡(GU)患者的血清PG水平,并与39例胃黏膜基本正常者(NOR)作对比分析.血清PGⅠ水平在GU和GC组明显低于NOR组(P均＜0.01),而GC组又明显低于GU组(P＜0.01);PGⅡ在GC组明显低于NOR组(P＜0.05);PGⅠ/PGⅡ值GC组明显低于NOR组和GU组(P均＜0.01).胃底胃体癌患者血清PGⅠ水平明显低于贲门癌患者(P＜0.05).提示血清PGⅠ水平和PGⅠ/PGⅡ值降低是溃疡型GC的危险因素,检测血清PG水平有助于临床对胃良恶性溃疡的鉴别诊断.     

针刺对胃运动和胃电的影响及其机制分析

针刺胃经穴对胃运动、胃电具有抑制、增强或双向调节作用 .针感传入与针效发挥与神经 体液密切相关 .针刺对神经 内分泌 免疫网络的激活可使其达到对机体全面调整的效果 .     

多潘立酮-卡波姆胃内黏附微丸的制备及体外评价

为制备多潘立酮胃内黏附型缓释微丸,并对其体外释放行为及体外的黏附性能进行考察,以卡波姆、羟丙基纤维素和PVP为主要黏附材料,以30%(质量分数)的NaCl水溶液作为润湿剂制备软材,采用挤出-滚圆法制备微丸.以释放度和体外的黏附性为评价指标,采用正交设计,优选出最佳处方,并进行最佳处方的验证,卡波姆、羟丙基纤维素及PVP...     

PTEN抑癌基因与胃癌关系的研究进展

PTEN基因是近年发现的新抑癌基因,目前已经证实其与多种肿瘤的发生发展有密切的关系。在许多肿瘤中都有PTEN基因表达异常,且其表达异常与肿瘤发生发展的生物学行为有一定相关性。胃癌是我国常见的多发性的恶性肿瘤之一,在胃癌组织中PTEN通过多种途径表达降低。PTEN的突变和异常表达与胃癌的发生、发展、浸润、转移显著相关,可能成为检测胃癌的有效指标之一。     

Frequent mtDNA mutations and its role in gastric carcinogenesis

In order to disclose the relationship between mutations of mitochondrial DNA (mtDNA) and gastric carcinogenesis, we screened the entire mtDNA sequence in 30 cases of human gastric cancer and matched normal tissues by using denaturing high-performance liquid chromatography (DHPLC) and DNA sequencing. Our data showed that high frequency (66.7%, 20/30) of mitochondrial genome mutation occurred in gastric cancer. Among these variants, 17 cases (56.7%, 17/30) were identified to be somatic mutation. High level mutant frequency was found in ND4, ND5 coding genes and D-loop control region, which was 36.7%, 26.7% and 30% respectively. Comparing with complexes Ⅲ, Ⅳ and Ⅴof the electron transport chain, we found that variants appeared to be more frequent in the subunit genes of complexⅠ. Most of mutations were base substitutions (85.4%, 41/48). Our results suggested that mutations of subunit genes encoding complexⅠ, especially ND3, ND4 and ND5 genes, might contribute to human gastric carcinogenesis.