不同物种间胰岛素及其编码mRNA,DNA序列比较与分析

通过PSI-BLAST搜索与人类胰岛素原(含有86个氨基酸)相似的蛋白质序列，并进行比对，计算比对矩阵的相似得分和期望值，同时运用ClustalW算法对不同物种编码前胰岛素原mRNA及其翻译的蛋白质和DNA序列进行多重比对．结果发现，脊椎动物的胰岛素蛋白质一级结构(A链和B链)和mRNA非常相似，但部分动物C肽的部分序列有差异；系统进化分析表明，人和猴、小鼠和大鼠编码胰岛素的mRNA在进化上关系相近．各物种间编码相同氨基酸的核苷酸序列（CDS)相同，但编码胰岛素的DNA序列不同．各物种胰岛素原蛋白质序列中，A链和B链序列保守，C肽有一定的差异；DNA序列差异较大．     

广东省血红蛋白研究Ⅵ 一例HbG—Coushatta(α_2β_2~(22)Glu→Ata)的结构与功能测定

1984年我校血红蛋白普查中检出一例电泳慢速血红蛋白,绎肽链裂解、指纹分析、氨基酸组份分析和氨基酸顺序测定确定为β链变异。即在β链22位上的GIu被Ala所取代,这是一例HbG—Coushatta(α_2β_2(~(22)Glu→Ala))。按Benesch法测定其氧亲合力,发现它的氧亲合力比HbA的高。穆斯堡尔谱测定表明这一异常Hb的S值比HbA的大,而其△E_Q值却比HbA的小,说明它所含Fe原子的电子结构有变化。本文对这一异常Hb结构与功能的关系以及穆斯堡尔参数变化的可能机理作了简单的讨论。     

间日疟原虫(PLASMODIUM VIVAX)在熊猴(MACACA ASSAMENSIS)体内的繁殖

以间日疟原虫(Plasmodium vixax)接种猴类和其他动物有很长的研究历史。至今被证实对间日疟原虫有不同程度的感受力的,在非洲有黑猩猩(Pan troglodytes);在美洲有夜猴(Aotus trivirgatus)、松鼠猴(Saimiri sciureus)、巴拿马狨(Saguinrs geoffroyi),白面猴(Cebus capucinus)、黑蜘蛛猴(Ateles fusciceps)和红蜘蛛猴(A.geoffroyi),其中尤以夜猴最为重要;在亚洲只发现东南亚的白掌长臂猿(Hyloates lar)对间日疟原虫有部分的感受性。上述方面,Arbele(1945)、Taliaferro(1934)、Young等(1976)和江静波(1976)都做过了文献综述。     

广东省异常血红蛋白研究Ⅺ 三例Hb G Honolulu的一级结构与功能研究

用快原子轰击抽谱技术测定3例Hb G Honolulu(α_2~(30Gly→Gln)β_2)的一级结构。经氧平衡曲线测定,发现此异常血红蛋白氧亲和力与Hb A的相同,2,3-DPG对它的效应亦正常。     

一例快速血红蛋白(Hb武鸣—文昌)的结构分析

本文报告1981年在暨南大学异常血红蛋白普查中,发现的一例快速异常血红蛋白(HbX)的化学结构分析结果。患者各项血液学检查未发现异常。对该异常血红蛋白作了肽链分离、α-链胰蛋白酶解指纹图谱(Fingerpfinting)分析、异常肽段的氨基酸组成以及氨基酸顺序测定等项研究。发现该异常血红蛋白α-链11位上的赖氨酸由谷氨酰胺取代,故该异常血红蛋白应为Hb武鸣-文昌[α_211(A9)Lys→Glnβ_2]。     

广东省异常血红蛋白研究——Ⅲ、Hb—广州[α64(E13)ASP→Gly]的结构分析

本文报导1983年9月在暨南大学新生中进行异常Hb普查时,用醋酸纤维薄膜电泳发现一种α链异常的慢泳血红蛋白突变体。先证者男性,汉族,21岁,异常Hb含量为22.2％,血浓学检查显示轻度贫血。经用指纹图谱分析及氨基酸定量与顺序测定,其结果证明α链第64位门冬氨酸被甘氨酸取代。这是一种文献中尚未曾报导过的Hb新变种,根据习惯,按发现地点命名为“Hb—广州”[Guangzhou α84(E13)ASP→Gly]。     

蛋白质中三联氨基酸数与二级结构数的模型研究

蛋白质的一级结构或序列与二级结构的关系在蛋白质结构研究中是很重要的,通过建立模型的方法来研究这种关系.在文献中已有的模型(蛋白质一级结构中的二联氨基酸与蛋白质二级结构的模型)的基础上,建立了蛋白质一级结构中的三联氨基酸个数与蛋白质二级结构个数模型.该模型能够较准确地反映蛋白质的一级结构或序列与蛋白质的二级结构的关系,比较适合应用于氨基酸序列长度变化较大的建模数据,同二联氨基酸与二级结构模型比较,由于三联氨基酸含有更多氨基酸之间的耦合信息,该模型的拟合精度更高.由于蛋白质一级结构中的三联氨基酸的种类数很大(为4 200),用以建模的变量数就很大,同时从DSSP数据库得到的样本量也很大(为11 600),用以建模的数据量很大.研究结果表明,PLS变量筛选法是一种建立大数据模型有效的方法,可有效地处理变量数为4 200,样本数为11 600这样大数据量的建模问题.     

抗原多肽序列分子结构表达及生物功能预测

自Anfinsen等提出蛋白质一级结构完全决定其三维结构著名论断以来,根据蛋白质序列从理论上预测相应空间结构成为分子生物学中一个重要的课题.不少探讨进一步阐明蛋白质高级结构信息仍全部包含在其一级结构中,大多以氨基酸侧链为基础构建描述变量.     

短柄五加(Acanthopanax brachypus)rbcL基因的结构分析

克隆了含完整短柄五加rbcL基因的3.2kb EcoRI片段,测定了该基因的核苷酸序列.所测核苷酸序列总长度为1924bp,其中编码区1428bp,编码475个氨基酸的蛋白质.测定的基因5’上游区共278bp,包含原核性质-35区(TTGCGC),-10区(TACAAT)及类似真核的TATA box元件(TATATA).5’前导区长194bp,其中SD序列为GGAGG,紧邻起始密码子上游.测定的3’下游区共218bp,含2个相邻的转录后可形成茎环结构的反向重复序列.短柄五加rbcL基因编码区推导的氨基酸序列与烟草、菠菜、豌豆、苜蓿、玉米、水稻、松树、地钱、衣藻和Anacystis的同源性分别为93.5％、94.11％、94.53％、94.74％、89.68％、92.21％、92.21％、92.63％、87.58％和80.84％.本文还对不同植物rbcL基因的启动区及部分5’和3’非编码区进行了比较分析.     

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)糖基转移酶基因的克隆、序列分析及表达

为获得具有催化活性的糖基转移酶纯酶,本研究以短小芽孢杆菌基因组DNA为模板,利用简并PCR技术扩增到基因(GT-A)全长序列.该序列全长1 287bp、编码423个氨基酸,分子量约为49.2KD.经序列分析,该基因属于糖基转移酶基因.根据GT-A基因开放阅读框序列设计引物,构建了原核表达重组质粒GTA-pet28a,并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功诱导出了一个约50kD的融合蛋白.纯化后测定其糖基转移酶活性,与37℃相比,80℃的反应温度其活性能提高3.4倍左右.研究结果表明,该酶是一种具有应用潜力的嗜高温糖基转移酶.     

蚌蛙蛭抗凝血蛋自的分离及抗凝血特性(英文)

以超速离心和肝素琼脂糖亲和层析从蚌蛙蛭（Batracobdellakasmiana）的粗提取液中分离到2种抗凝血蛋白．抗凝血活性测定证明,这2种蛋白具有显著抑制凝血酶的活性而不具有抑制凝血因子Xa的活性．亲和层析的蛋白洗脱峰与抑制凝血酶的活力峰相吻合;因此,蚌蛙蛭的抗凝血蛋白是属于凝血酶特异性的抗凝血蛋白．这为进一步研究蚌蛙蛭抗凝血蛋白的抗凝血机理及其应用打下了基础．     

盐源山蛭抗凝血蛋白的分离及抗凝血特性分析

以肝素琼脂糖亲和层析和超速离心分离了盐源山蛭的抗凝血蛋白,抗凝血活性试验证明,该蛋白不抑制凝血因子Ｘａ的活性,而显著抑制凝血酶的活性,亲和层析的蛋白洗脱峰与抗凝血酶的活力峰相吻合,因此,盐源山蛭抗凝血蛋白属于凝血酶特异性的抗凝血蛋白。     

鸡传染性法氏囊病病毒VP5基因的克隆及其序列分析

从病变鸡法氏囊组织中分离纯化IBDV,提取其基因组RNA.以IBDVRNA为模板,进行反转录反应合成cDNA第1链.采用PCR技术扩增VP5基因.将PCR产物经酶切后与pcDNA3.1(+)载体连接,经转化、筛选得到重组质粒pIBDV-VP5.对VP5基因进行了测序并对其序列进行了分析.     

猪末端转脱氧核苷酸酶的分离纯化

末端转脱氧核苷酸酶催化脱氧垓苷三磷酸连接到单链多聚脱氧核苷酸的3′—OH末端。猪胸腺匀浆抽提液,经磷酸纤维素吸附层析,硫酸铵分级沉淀,DEAE—纤维素负吸附,葡聚糖凝胶G100过滤和两次羟基磷灰石柱层析,分离后得到该酶,纯化倍数达2736倍。葡聚糖凝胶G100过滤分离出三个活力峰,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示其分子量分别为60000,53000和32000道尔顿,其中53000组分比活最高,达每毫克蛋白3135活力单位。     

杉木不同杂交组合抗寒性研究

对杉木４组不同杂交组合的亲本和子代用改进的ＤＥＡＥ阴离子交换柱色谱法和硅胶薄层色谱法分离制备针叶磷脂酰甘油，用气相色谱法测定了它们的脂肪酸组成，结果表明杉木针叶中ＰＧ脂肪酸的组成主要有棕榈酸、油酸、亚油酸、亚麻酸和３－反式十六碳－烯酸。不同杂交组合的测定结果表明杉木抗寒性有较强的遗传性。几个测定指标中，ＩＵＦＡ（不饱和指数）较好地反映了杉木抗寒性的相对大小。     

抗铜酿酒酵母铜结合蛋白的纯化及性质研究

酿酒酵母Ｃｕ＾２＋抗株ＹＮＤ２１经含一定浓度的氯化铜培养基诱导培养后,收集菌体,破碎细胞,离心后ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０和ＤＥＡＥ－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ柱层析分离可获得三种铜结合蛋白ＤＥ－１,ＤＥ－２,ＤＥ－３。ＤＥ－１脱盐后（Ｇ－１）经鉴定具有金属硫蛋白的特性：表观分子量约为１８ｋＤ;每分子蛋白含２０个巯基,结合１１个铜原子;氨基酸组成中富含半胱氨酸（１８％）、碱性和酸性氨基酸,而酪氨酸和蛋氨酸含     

胰岛自身抗原GAD65片段和胰岛素B链基因共表达DNA疫苗的构建与表达

构建两种胰岛自身抗原谷氨酸脱羧酶（ glutamic acid decarboxylase, GAD） 65片段与胰岛素B链基因共表达DNA疫苗,并检测其在体外COS-7细胞中的表达。PCR方法从GAD65质粒中扩增出GAD190-385和GAD490-570两个片段的cDNA,overlap法再分别与信号肽基因进行拼接,将拼接后的融合基因SGAD190-515和SGAD490-570分别与胰岛素B链基因依次克隆入双启动子真核表达载体pBudCFA．1中。重组质粒经酶切和测序鉴定后,脂质体体外转染COS-7细胞,Western blot方法检测目的基因在该细胞中的表达。结果表明核酸序列测定克隆的融合基因和胰岛素B链基因序列与报告序列一致,开放阅读框正确,Western blot显示转染了DNA疫苗的COS-7细胞中均可检测两个目的基因的表达。两种GAD65片段与胰岛素B链基因共表达DNA疫苗均成功构建,为自身免疫糖尿病的免疫干预研究奠定了实验基础。     

慢性肾衰血浆中红细胞生成抑制蛋白的分离纯化

本文采用慢性肾功能衰竭（ＣＲＰ）病人血浆为材料，通过硫酸铵分步沉淀，ＤＥＡＥＤＥ－５２纤维素离子交换层析、ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－１００凝胶层析及高效液相凝胶层析（ＨＰＬＣ），从中分离出一种蛋白质．经体外红系集落（ＣＷ－Ｅ）实验证明对ＣＦＵ－Ｅ有明显的抑制作用．该蛋白的分子量为５７０００，等电点（ＰＩ）为４．２，我们称这种蛋白为红细胞生长抑制蛋白（Ｅｔｙｔｈｒｏｒｏｉｅｓｉｓｉｎｈｉｔｏｒｒａｃｔｉｖｔｙｐｒｏｔｉｎ）．     

大鼠神经突起因子的克隆及表达载体的构建

从成年SD大鼠脑组织分离提取总RNA，反转录PCR扩增出鼠神经突起因子(neuritin)cDNA的最大开放阅读框(opening reading frame，ORF)后，重组于克隆载体pGEM3z上，经PCR、限制内切酶鉴定和DNA测序鉴定，扩增出的cDNA426bp全部核苷酸序列与国外文献报道的完全一致；在已构建好的重组克隆载体neuritin-pGEM3z基础上，将该neuritin ORF亚克隆到原核表达载体pQE30上，为获取具有天然活性的neuritin蛋白及其功能研究提供了基础。     

人血清免疫球蛋白G的分离及其重、轻链的拆解

用DEAE-纤维素离子交换柱色谱法从人血清中能分离出IgG。以β-巯基乙醇还原和过甲酸氧化两种方法打开IgG分子链间的二硫键,拆离重链和轻链,获得用于免疫试验的特异性重链。