菌群感应AHLs分子对小鼠肠道菌群多样性影响的分析

目的 探讨菌群感应信号分子N-酰基高丝氨酸内酯(N-acyl homoserine lactones,AHLs)对小鼠肠道微生物菌群构成的影响,为感染状态下肠道微生态的紊乱补充理论依据。方法 3-oxo-C10-HSL分子经腹腔注射小鼠后,于24 h分别在小鼠十二指肠及空回肠部位用拭子涂抹法取样,并通过Illumina Hiseq 2500高通量测序平台对样品16S rDNA测序,并进行微生物菌群分类构成及多样性分析。结果 在实验小鼠肠道内共检出22个细菌门,109个细菌属;对照组和3-oxo-C10-HSL处理组小鼠肠道不同部位菌群均以厚壁菌门(>50%)和变形菌门(>20%)为主,但两组在属水平菌群构成有明显差异,对照组优势菌属依次为葡萄球菌、埃希氏-志贺菌、乳球菌、假单胞菌、肠球菌,3-oxo-C10-HSL处理组优势菌属主要为肠球菌、埃希氏-志贺菌、葡萄球菌;多样性和丰度分析提示3-oxo-C10-HSL处理组肠道菌群多样性均有提高,大肠埃希菌属等主要优势菌丰度显著上升,而且空回肠部位的菌落丰度最高。结论 AHLs对小鼠肠道菌群构成影响较小,而对菌群内部某些特定类群结构变化影响较明显。     

SPE前处理-UHPLC-MS/MS测定MBR中两种 N-酰基高丝氨酸内酯

选用N-己基高丝氨酸内酯(C6-HSL)和N-辛基高丝氨酸内酯(C8-HSL)两种酰基高丝氨酸内酯类(AHLs)为代表物,建立了固相萃取(SPE)-超高效液相色谱串联三重四级杆质谱(UHPLC-MS/MS)分析膜生物反应器(MBR)活性污泥中AHLs的方法.研究结果表明C6-HSL和C8-HSL在1～200μg/L内有良好的线性关系(R2 0.998),方法的检出限为0.100μg/L,定量限为1.000μg/L,在3个浓度水平下的平均加标回收率为80.69%～83.75%,相对标准偏差(RSD)为4.71%～7.25%.方法精确度高、重复性好、基质效应弱,适用于MBR活性污泥中痕量AHLs的测定.     

温度对发菜生理活性的影响

本文阐述了温度对发菜(Nostoc flagelliforme Bornet Flah)呼吸作用、光合作用、固氮酶活性、叶绿素α含量和电解质外渗率的影响.发菜呼吸作用、光合作用的最适温度均为35℃.风干状态的发菜经各种温度(-15～45℃)处理后,对生理活性不产生显著影响,115℃致死.吸胀后的发菜其生理活性较易受温度的影响:用低温(-15℃)处理吸胀后的发菜,再在25℃下测定其呼吸作用、光合作用、固氮酶活性,比未做处理者分别提高43%、26%和34%,高温(35℃以上)处理则导致生理活性的下降和细胞膜的损伤。     

一株具有群体感应的膜污染层优势菌分离鉴定

利用膜生物反应器(MBR)对模拟生活污水进行处理,随着反应器的运行,系统膜污染不断加剧,膜通量逐渐下降,运行15 d后已无法维持膜通量的稳定状态.从MBR膜污染层分离得到37株优势菌株,以紫色杆菌Chromobacterium violaceum 026为报告菌,其中1株菌能够产生短链酰基化高丝氨酸内脂(AHLs)群体感应信号分子.经薄层层析(TLC)和高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)检测进一步表明该菌株所产生的信号分子为C4-HSL,经16S r DNA测序比对,初步鉴定为Aeromonas hydrophila.     

发菜研究的回顾

根据作者多年来对发菜(Nostoc flagelliforme)的研究结果及收集到的国内外有关发菜文献,较系统扼要的介绍了发菜的研究史;分类地位;地理分布;生态条件及特性;生理生化;形态细胞构造;生长发育条件;化学营养成分;生产科研申存在问题及需要深入研究的课题。     

近十年发菜的研究进展

本文针对发菜近十年的研究结果进行综述和分析,重点介绍了与光合作用相关结构、适应恶劣环境的分子机制、水分与生长的相关性、环境条件对室外培植发菜的影响等,最后提出了进一步研究发菜的思路.     

干旱胁迫下发菜原植体中海藻糖、蔗糖测定

检测了吸水饱和后的发菜原植体,在不同干燥时间下海藻糖及蔗糖的含量变化,研究表明：发菜原植体中有海藻糖、蔗糖存在．尽管发菜原植体内海藻糖含量略低于蔗糖含量,但海藻糖含量在干旱胁迫初期便迅速升高,之后一直保持较高水平,这与发菜中蔗糖含量变化趋势相同．所以在干旱胁迫时,海藻糖和蔗糖都可能对原植体有保护作用,海藻糖很可能是发菜适应极端环境的重要保护因子之一．     

发菜中麦芽寡糖基海藻糖合成酶的抗体制备及鉴定

通过PCR法从发菜总DNA中克隆到编码麦芽寡糖基海藻糖合成酶基因前645bp的催化位点保守序列的片段,将该基因片段在大肠杆菌中表达,得到符合预期大小的重组蛋白．将该重组蛋白纯化回收用于制备该酶的特异性抗体．检测表明抗体具有较高效价．利用该抗体检测干旱胁迫下发菜藻丝体中该酶的表达量表明干旱胁迫条件下该酶的表达量增加：且与海藻糖积累量呈正相关,可能参与发菜的抗逆性保护作用．     

发菜中红色蛋白的研究

研究发菜中一种红色蛋白(Rx)的分离纯化及其光谱学性质.采用超声法破碎发菜细胞,盐析法初步纯化藻胆蛋白,利用DEAE-DE52交换介质得到藻胆蛋白纯品;测定室温和低温(液氮)下的荧光激发光谱和发射光谱.Rx的吸收峰在520 nm,室温与低温下的荧光发射峰分别在625和630 nm,室温与低温下的荧光激发峰分别在615和610 nm,室温下,Rx在藻胆体中的荧光上升时间和荧光寿命分别为495和2 200 ps.结果表明,Rx既可以把它吸收的光能传递给藻蓝蛋白(PC),再经由PC传递给别藻蓝蛋白(APC),又可以直接将能量传递给APC.     

发菜悬浮细胞对低温胁迫的生理响应机制

以人工培养的发菜悬浮细胞为研究对象,通过分析低温胁迫下细胞的生长状态和生理特性的变化,阐释发菜在极端环境下得以生存的适应机制.结果表明:4℃低温胁迫处理15天后,发菜悬浮细胞的相对生长量显著降低,而质膜相对透性和细胞活性在低温胁迫处理3天较对照有明显的变化,处理5天后细胞逐渐适应.与对照相比,低温胁迫处理5天使发菜细胞内的脯氨酸质量分数和海藻糖质量分数显著上升,同时显著抑制了光合系统Ⅱ的活性,而叶绿素a的质量分数在低温处理初期上升.由此可以发现,低温胁迫使发菜悬浮细胞的质膜完整件和光合作用受到伤害,而细胞内的脯氨酸和海藻糖迅速积累起着积极的渗透调节作用,从而使细胞逐渐适应低温,生长得以恢复.     

培养基类型、环境因子和激素对发菜细胞增殖的影响

为探讨发菜（Nostoc flagelliforme）生长增殖所需的适宜条件,研究了培养基类型、pH值、温度、光周期、光照强度和激素等对发菜细胞生长增殖的影响.结果表明,发菜细胞在BG11培养基中的增殖情况好于在BG110,MS,土壤浸提液（SEL）和自制培养基（ZZ）中的增殖情况.在BG11培养基中,当pH值为7.5,温度为25℃,光周期为12 h光照12 h黑暗,光照强度为2 000 lx时,发菜细胞增殖明显.此外,分别附加2.0 mg/L NAA,1.0 mg/L 6-BA和2.0 mg/L 2,4-D对发菜细胞增殖有一定的促进作用.     

人工悬浮培养发菜胞外多糖对小鼠免疫功能的影响

研究人工悬浮培养的发菜胞外多糖对小鼠非特异性及特异性免疫能力的影响.体内实验表明:50~100,mg/(kg·d)的发菜胞外多糖能够显著提高小鼠单核巨噬细胞吞噬碳粒的能力和NK细胞的自然杀伤活性(P0.05),并呈现剂量依赖性,同时,发菜胞外多糖能在一定程度上提高腹腔巨噬细胞的吞噬能力,起到提高机体非特异性免疫水平的作用.与空白组相比,高、低剂量的发菜胞外多糖对小鼠脏器指数、二硝基氟苯诱导的迟发型超敏反应(DTH)、脾淋巴细胞的增殖均无显著性影响,表明人工培养发菜胞外多糖对小鼠特异性免疫系统无显著性效果.     

液—质联用检测铜绿假单胞菌密度感应系统中信号分子

建立液—质联用的方法检测铜绿假单胞菌密度感应系统中信号分子C_4-HSL、3-oxo-C_(12)-HSL的浓度,并应用于金银花水煎液抗铜绿假单胞菌研究.色谱柱Agilent Poroshell 120 SB-C_(18)(4. 6 mm×100 mm,2. 7μm),流动相80%乙腈—20%水(含0. 1%甲酸),流速0. 2 m L/min,柱温30℃;电喷雾离子源(ESI),负离子模式,检测离子为C_4-HSL m/z 172. 2→102. 1,3-oxo-C_(12)-HSL m/z 298. 3→197. 2.结果表明,以酮洛芬为内标,乙酸乙酯提取,挥干后甲醇复溶,培养液中C_4-HSL、3-oxo-C_(12)-HSL浓度在2～2 00 ng/m L范围内线性关系良好,定量下限为2 ng/m L,批内和批间精密度RSD均小于7. 5%,准确度为93. 3%～103. 1%.金银花水煎液与铜绿假单胞菌共同培养48 h后,培养液中C_4-HSL含量明显降低,3-oxo-C_(12)-HSL含量明显升高,金银花水煎液能抑制铜绿假单胞菌的毒力因子生成.     

蓝色凝胶平板法筛选生物表面活性剂产生菌

从某炼油厂废水和油泥样中经富集培养、蓝色凝胶平板和发酵液表面张力的测定筛选出生物表面活性剂产生菌8株。选择其中2株BS-03和BS-01作进一步研究。经初步鉴定2株菌均属于假单胞菌属。菌株BS-03和BS-01的发酵液表面张力由56．8mN／m分别降至25．6mN／m和27．4mN／m。电喷雾质谱检测得到菌株BS-03的代谢产物鼠李糖脂主要成分是RhaC10C10，而茵株BS-01则为Rha2C10和Rha2C10C10，其临界胶束浓度CMC值分别为326mg／L和58mg／L。菌株BS-03发酵液对苯、正己烷、正十八烷、柴油和原油的乳化性能都大于70％，而菌株BS-01发酵液则对这些物质的乳化性能不超过60％。     

搂发菜给我们带来了什么?

踏上内蒙古西部干旱、半干旱草原,我们时而可以看到搂发菜绘草原带来的累累伤痕,面对草原创伤,心灵深处感到极大的不安,忧心如焚。发菜营养价值不高,也没有药用价值发菜(Nostoc flagelliforme)系蓝藻门,念珠藻科,念珠藻属。生长在干旱地区的发菜,藻丝体直径在0.2毫米左右,长度在数厘米到100厘米之间。生长在半干旱地区的发菜有两种类型,一类是粗而短的丝状体,直径约0.5毫米,长度在几厘米至几十厘米之间;另一类呈带状,藻体宽2至12毫米,平均5毫米左右,厚0.1至0.2毫米,长度仅数厘米至十多厘米。发菜主要分布在亚洲,以我国为主,在内蒙古、宁夏、甘肃、青海、新疆五省区有野生。其中内蒙古自治区生长面积较大,产量也最多。发菜的生长环境比较特殊。干旱是发菜生长的最重要的气     

七叶树内生真菌的分离及活性研究

利用组织培养法,从秦岭紫柏山七叶树茎段中分离得到45株内生真菌,通过真菌形态特征和ITS序列分析,将其鉴定到7个属如链格孢属(Alternaria)、鬼伞属(Coprinellus)、枝孢属(Cladosporium)及颈点霉属(Phoma)等。采用紫外-可见分光光度法、高效液相(HPLC)及质谱(MS)方法检测表明,菌株SL-6的代谢产物中存在七叶皂苷类化合物。抑菌活性试验显示,菌株SL-6的发酵液对胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)及棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)植物病原菌表现出较强的抑制活性。     

陕西略阳铁矿尾矿放线菌的分离、鉴定及抗菌活性

针对陕西略阳铁矿尾矿土壤放线菌进行分离鉴定,研究放线菌代谢产物抗菌活性。采用稀释涂布法对陕西略阳铁矿尾矿土壤样品进行分离纯化,通过菌落形态观察初步排重,对所有菌株进行16S r RNA测序,通过构建发育树确定其菌属。同时采用滤纸片扩散法,以大肠杆菌(Escherichia coil)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、沙门氏菌(Salmonella typhl)和白假丝酵母菌(Canidia Albicans)为靶标菌研究放线菌代谢产物拟菌活性。分离出菌株结合形态学及分子生物学鉴定确认14株菌株,其中10株属链霉菌属(Streptomyces)、3株属于小单孢子菌属(Micromonospora)、1株属原小单孢菌属(Promicromonospora)。鉴定所得14株放线菌代谢产物均表现出不同程度的抑菌活性,其中10株则表现出较明显的抑菌作用,占总数的71.43%。表明尾矿土壤所分得菌株丰富,可判断所分离放线菌中链霉菌属占较大比例,且筛选出有较强抑菌活性的菌株,为丰富和挖掘放线菌资源库提供理论依据。     

维生素C二步发酵伴生菌的分离鉴定

从现有成熟用于维生素C生产的混合菌系中分离得到伴生菌.扫描电镜显示该菌菌体大小为0.7μm×(2~4)μm,呈链状排列.经16SrDNA序列分析表明,伴生菌与内生芽孢杆菌(Bacillus endophyticus)亲缘性高.伴生菌在培养8~12h后进入生长对数期,且可产生淀粉酶和纤维素酶.     

青杨脊虎天牛伴生真菌研究

为了探索青杨脊虎天牛(Xylotrechus rusticus L.)伴生真菌群落组成及其对杨树的致病性,利用稀释平板涂布法进行伴生真菌的分离、培养,从青杨脊虎天牛(X. rusticus L.)各虫态、寄主及其蛀屑等9种材料中共分离出72个菌株,分属于19个菌属。青杨脊虎天牛蛀入寄主杨树后,可以引起寄主的树皮以及木质部坑道内真菌群落发生明显变化。与健康杨树相比,青杨脊虎天牛虫体及其蛀道内真菌组成、优势菌种类型都存在明显差异。研究结果证明,茄病镰刀菌(Fusarium solani (Mart.)Sacc.)是青杨脊虎天牛幼虫、蛹及其蛀害树皮表面存在的优势菌种,该优势菌培养液对杨树水培枝条具有致病性,且随着作用时间延长,致病性增强。     

神农架四种特色药用珍稀植物内生真菌的多样性研究

药用植物内生真菌是一类具有广泛的应用前景的微生物资源.本研究以神农架的特色药用植物红豆杉(Taxus Chinensis)、珙桐(Davidia involucrata Baill.)、白三七(Panax notoginseng)、七叶一枝花(Paris polyphylla.)为研究对象,利用rDNA-ITS序列对其健康组织的内生真菌多样性进行分析.结果表明,从这4种植物中共分离出97株归属于23个属具有丰富的生物多样性的内生真菌.其中从红豆杉中分离得到内生真菌70株,分属于21个属优势种属是镰刀菌属(Fusarium sp.)、拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis sp.)和拟茎点霉属(Phomopsis sp.);从白三七中分离内生真菌12株,归属于毛霉属(Mucor sp.)和镰刀菌属(Fusarium sp.),从七叶一枝花中分离内生真菌6株,归属毛霉属(Mucor sp.)、镰刀菌属(Mucor sp.)和青霉属(Penicillium sp.),从珙桐中分离内生真菌9株炭角菌属(Xylaria sp.)、炭团菌属(Hypoxylon sp.)、拟茎点霉属(Phomopsis sp.)、链格孢属(Alternaria sp.)、柄孢壳属(Podospora sp.)、间座壳属(Diaporthe sp.).