氨甲环酸与Wnt信号通路中含kringle结构域蛋白的结合对新生小鼠骨密度的影响

最近研究发现Wnt信号通路在骨形成过程中发挥重要作用Wnt受体如脂蛋白相关蛋白5（lrp5）和孤独受体（Ror2）的缺失或突变导致骨的不正常发育．Dkk是一个分泌型规范Wnt信号系统的抑制剂，通过与脂蛋白相关蛋白5和最近新发现的一种含kringle结构域的蛋白kremen形成三聚体复合物．这种复合物随即被细胞内吞，从而导致细胞表面Wnt受体脂蛋白相关蛋白5水平迅速下降，从而达到抑制Wnt信号通路的日地．通过对kremen和Ror2蛋白序列分析发现kremen和Ror2的胞外部分均含有一个结构上能与赖氨酸结合的kringle结构域．通过给怀孕母鼠注射一种赖氨酸类似物——氨甲环酸来研究kremen和Ror2的kringle结构域上的赖氨酸结合位点被占据对小鼠骨发育的作用．但是，研究结果表明AMCA组和对照组之间的骨密度并没有显著差异，揭示赖氨酸结合位点不参与骨的发育调控．     

Nir2碳端结构域的晶体结构

Nir2蛋白具有多个结构域，在生物体中可能发挥多种生理功能。本实验用MAD软件对大肠杆菌BL21（plys）原核表达的Nir2蛋白碳端进行了晶体结构分析。结果显示，硒蛋氨酸取代蛋白晶体及未取代蛋白晶体同属空间群P212121,晶胞参数a=109.468 Å, b=120.621 Å, c=70.315 Å，分辨率分别为2.2 Å和2.7 Å。一个不对称单位含有三个分子，含水量为48%。Nir2蛋白碳端由C片层和N片层构成，其中C片层与钙ATPase的催化区域P相似，N片层为许多不相关的功能性蛋白所共有。研究证明二者之间的静电作用是影响Nir2蛋白碳端与Pyk2 FERM区域结合的主要因素。该晶体结构的分析结果为进一步研究Nir2蛋白碳端的潜在功能提供了结构基础。     

拟南芥钙依赖蛋白激酶CPK11与ABA响应元件结合因子ABF4相互作用的研究

为研究钙依赖蛋白激酶CPK11参与ABA信号通路的方式,本文利用体外酵母双杂实验(Y2H)以及体内双分子荧光互补实验(BiFC)分析CPK11与ABA响应元件结合因子(ABA-responsive element binding factors, ABFs)ABF4之间的关系.酵母双杂交实验表明CPK11与ABF4存在体外相互作用,双分子荧光互补实验表明CPK11与ABF4存在体内相互作用.以上实验共同证明CPK11与ABF4存在直接相互作用.作为CPK11的同源蛋白CPK4与转录因子ABF4在植物体内也存在相互作用.以上实验表明CPK11及其同源蛋白CPK4可能通过与转录因子ABF4相互作用从而参与钙离子介导的ABA信号通路.     

人IDE基因启动子生物信息学分析

对人IDE基因启动子进行生物信息学分析以获得人IDE基因启动子、CpG岛及转录因子结合位点特征.从UCSC基因组数据库成功获得人IDE基因5’调控区2 000 bp序列.Promoter 2.0、FPROM、NNPP预测人IDE基因分别有3个、2个、6个启动子.Relative profile score threshold选择80%、85%、90%、95%、100%时,JASPAR预测该序列存在5170、1771、454、87和5个可能的转录因子结合位点.Relative profile score threshold选择80%,搜索到6个潜在的TCF7L2转录因子结合位点.采用进化足迹法,LAGAN预测方法获得位于人和小鼠同源IDE基因启动子保守区域相同位置的转录因子结合位点为14个,包含转录因子SPI-1、cap、c-FOS、FREAC-3、c-ETS、Cdxa、HSF2等.发现一个CpG岛,位于1 303～1 705 bp 之间,大小为403 bp.人IDE基因启动子、CpG岛及转录因子结合位点的生物学信息学分析,为下一步基因表达调控实验奠定了基础.     

A role for Wnt signalling in self-renewal of haematopoietic stem cells

Haematopoietic stem cells (HSCs) have the ability to renew themselves and to give rise to all lineages of the blood; however, the signals that regulate HSC self-renewal remain unclear. Here we show that the Wnt signalling pathway has an important role in this process. Overexpression of activated beta-catenin expands the pool of HSCs in long-term cultures by both phenotype and function. Furthermore, HSCs in their normal microenvironment activate a LEF-1/TCF reporter, which indicates that HCSs respond to Wnt signalling in vivo. To demonstrate the physiological significance of this pathway for HSC proliferation we show that the ectopic expression of axin or a frizzled ligand-binding domain, inhibitors of the Wnt signalling pathway, leads to inhibition of HSC growth in vitro and reduced reconstitution in vivo. Furthermore, activation of Wnt signalling in HSCs induces increased expression of HoxB4 and Notch1, genes previously implicated in self-renewal of HSCs. We conclude that the Wnt signalling pathway is critical for normal HSC homeostasis in vitro and in vivo, and provide insight into a potential molecular hierarchy of regulation of HSC development.     

一个拟南芥C2H2锌指蛋白的结构域分析

At3g23140是拟南芥中仅含有一个C2H2锌指结构的转录因子,主要含有N端的C2H2锌指结构和C端的类似EAR两个结构域.将〖WTBX〗〖STBX〗At3g23140〖WTBZ〗〖STB3〗中仅含C2H2锌指结构区域不同长度的两个基因片段〖WTBX〗〖STBX〗A1〖WTBZ〗〖STB3〗(240 bp),〖WTBX〗〖STBX〗A2〖STB3〗〖WTBZ〗(410 bp)克隆到植物表达载体pMON530 35S启动子的下游,并转化野生型拟南芥.经过筛选得到稳定遗传的T3代纯合转化子.对转基因植株研究表明, 35S::〖WTBX〗〖STBX〗A2〖STB3〗〖WTBZ〗转基因植株的内源乙烯释放量明显低于野生型,这与〖WTBX〗〖STBX〗At3g23140〖STB3〗〖WTBZ〗插入失活突变体〖WTBX〗〖STBX〗cs16966〖STB3〗〖WTBZ〗的表型是一致的,而35S::〖WTBX〗〖STBX〗A1〖WTBZ〗〖STB3〗转基因植株的内源乙烯释放量与野生型没有明显区别.表明A2片段的过量表达产生了显性抑制的作用,这种显性抑制效应很可能是由于 A2蛋白片段与〖WTBX〗〖STBX〗At3g23140〖STB3〗〖WTBZ〗表达产物所调控的核酸序列竞争结合所导致.而A2片段C端所含有的非锌指结构域是At3g23140蛋白与靶基因序列结合所必需的.