二苯胺—H2O2—HRP伏安酶联免疫分析新体系的研究

提出了以二苯胺为底物的伏安酶联免疫分析新体系测定辣根过氧化物酶（HRP）的方法.通过线性扫描二阶导数极谱法测定HRP催化H     

伏安酶联免疫分析中一类新的HRP底物体系的初步研究

提出了以酚红、1,2,5,8－四羟基蒽醌、1,8－二羟基蒽醌三种染料类物质作为电化学酶免疫分析中辣根过氧化物酶（FRP）催化氧化反应的底物,这三种具有电化学活性物质,在HRP的催化作用下,被H2O2氧化生成非电活性的产物,导致测定的电流下降,其减少程度和HRP的浓度有一定的关系,从而建立了三种底物测定HRP的新体系,比较了它们测定HRP的灵敏度,对酶催化反应机理进行了初步的探讨。     

以1-氯萘酚为底物的分光光度法测定辣根过氧化物酶

提出了1-氯萘酚-H2O2-辣根过氧化物酶(HRP)催化动力学光度法测定HRP的新方法.在pH 10.0的B-R缓冲溶液中,HRP催化H2O2氧化1-氯萘酚生成有色化合物,通过测定该有色化合物在波长为580 nm处的吸光度值,间接测定HRP的含量.在所选定的实验条件下,测定HRP的线性范围是3.0×10-9～5.0×10-7 g/mL,检测下限为2.0×10-9 g/mL.此方法可以应用于测定动植物体内的抗原和抗体.     

基于芯片三电极系统检测辣根过氧化物酶的研究

本文设计一种芯片三电极系统,以金盘电极为工作电极,金片电极为辅助电极,Ag/ AgCl电极为参比电极,以邻联茴香胺（ODA）和邻苯二胺（OPD）两种常见的底物体系建立了检测辣 根过氧化物酶（HRP）的方法。HRP能够催化H2O2氧化ODA和OPD,其氧化产物在芯片金电极上分 别于-0.23 V和-0.50 V（vs.Ag/AgCl）处产生一个灵敏的还原峰,峰电流随HRP浓度增加而增大。对 于 ODA-H2O2体系,测定游离 HRP 的范围是 5.0×10-7～1.0×10-5 g/mL,检出限为 1.0×10-7 g/mL （3σ）。对于 OPD-H2O2体系,测定游离 HRP 的线性范围是 1.0×10-8～1.0×10-4 g/mL,检出限为 1.0×10-9 g/mL（3σ）。     

荧光素-GOD-HRP 体系分光光度法测定植物果实组织中的葡萄糖

植物组织中的葡萄糖在葡萄糖氧化酶（GOD）作用下产生的氧化氢可在辣根过氧化物酶（HRP）的催化作用下使荧光素产生褪色反应,基于这一现象建立了一种选择性测定植物果实组织中葡萄糖含量的方法,该方法可以根据检测对象的不同调整检测范围和灵敏度,同时具备了安全,方便的优点,利用此法对苹果、鸭梨、酥梨中的葡萄糖含量进行了测定,结果与化学发光法一致。     

二苯胺-H_2O_2-HRP伏安酶联免疫分析新体系的研究

提出了以二苯胺为底物的伏安酶联免疫分析新体系测定辣根过氧化物酶 (HRP)的方法 .通过线性扫描二阶导数极谱法测定 HRP催化 H2 O2 氧化二苯胺的产物 ,从而间接的测定 HRP的浓度 ,进而用于酶联免疫分析 .在 p H=8.5的 Britten-Robinson(BR)缓冲溶液中 ,二苯胺的氧化产物可以在 -0 .53V(vs.SCE)左右处产生一个灵敏的极谱还原峰 .在选定的最佳条件下 ,应用此峰测定 HRP的检测限可达 1 .0× 1 0 - 9g/m L,测定 HRP的线性范围是 4 .0× 1 0 - 9～ 2 .0× 1 0 - 7g/m L.另外 ,还推导了酶催化反应和电极还原反应方程式     

基于PEDOT:PSS 和HRP 的电化学酶传感器的制备与电催化应用

利用聚（3,4-乙烯二氧噻吩）/聚乙烯苯磺酸（PEDOT：PSS）和辣根过氧化物酶（HRP）制 备了一种电化学酶传感器。采用离子液体N-己基吡啶六氟磷酸盐（HPPF6）修饰碳糊电极（CILE） 作为基底电极,将PEDOT：PSS 和HRP 的混合材料修饰于电极表面得到电化学酶传感器（PEDOT： PSS-HRP/CILE）。利用红外光谱法和紫外光谱法对HRP 的活性进行了分析,采用循环伏安法（CV） 对该酶传感器的直接电化学和电催化行为进行了测试。结果表明：PEDOT：PSS-HRP/CILE 对三氯 乙酸（TCA）和亚硝酸钠（NaNO2）有明显的电催化行为,当TCA 浓度在0.0～300.0 mmol/L 的范围时 还原峰电流值与浓度的变化成线性关系,检测限为0.67 mmol/L（3σ）。使用此传感器成功地对药物 样品中TCA 含量进行了测定,加标回收率为94.0%～105.6%。     

毛细管柱固定抗原流动注射化学发光免疫法测定IgG

目的建立基于毛细管柱固定抗原流动注射增强化学发光免疫法测定IgG分析的新方法。方法以辣根过氧化物酶(HRP)标记抗IgG与抗IgG竞争毛细管内壁表面固定的IgG抗原,利用HRP催化对鲁米诺-过氧化氢-对碘苯酚体系的增强化学发光,建立测定IgG的流动注射化学发光免疫分析方法。结果在选定的实验条件下,化学发光信号与IgG在稀释比为1∶1×1011~1∶1×1010间成良好的线性关系,相关系数为0.996 0。对稀释比为1:5×1010IgG抗体连续11次测定的相对标准偏差为6.5%。结论将该法应用于合成血清样品中IgG抗体的测定,结果满意。     

辣根过氧化物酶直接电化学行为的研究

制备了十八烷基胺六方介孔二氧化硅（0DA—HMS）／辣根过氧化物酶（HRP）聚乙烯醇凝胶膜化学修饰电极,考察了HRP在裸玻碳电极上和ODA—HMS聚乙烯醇凝胶膜修饰电极上的直接电化学行为,探讨了不同修饰方法包埋HRP对其直接电化学行为的影响。实验结果表明：HRP在裸玻碳电极上和滴涂法所制备ODA—HMS聚乙烯醇凝胶膜中的直接电化学行为较差,只呈现一不可逆的还原峰,且峰电流随着扫描次数的增加不断减小,无法达到稳定。而通过吸附包埋法所制备的ODA—HMS／HRP化学修饰电极上,HRP可以呈现出良好的,可逆的直接电化学行为,其氧化峰和还原峰的峰电流在数次扫描后能达到稳定。探讨了该修饰电极对双氧水的电催化还原作用。     

基于纳米金增稳、增敏的过氧化氢生物传感器研制

将辣根过氧化物酶(HRP)、纳米金、壳聚糖和戊二醛按照一定比例混合均匀,并吸取微量体积滴于玻碳电极表面,4 ℃下放置12 h,于是在玻碳电极表面形成一层稳定固载HRP的壳聚糖膜.由于纳米金能与HRP形成静电复合物,因而有效地防止HRP从壳聚糖膜中泄漏和提供适应酶所需的微环境,高效地保持HRP的生物活性.用对苯二酚作为电子媒介,用计时安培法优化了生物传感器操作参数.此生物传感器测定H2O2的线性范围为3.7×10-6至 1.22×10-3 mol/L,灵敏度为0.31 A L mol-1·cm-2,检测限为3.7 mmol/L,响应时间小于6 s,酶电极的表观米氏常数( Km app)为0.064 mmol/L.实验证明纳米金具有增加固定HRP生物活性、显著延长生物传感器使用寿命及提高测定H2O2的灵敏度等功能.     

生物酶催化聚乙烯膜接枝的改性方法

目的 研究以辣根过氧化物酶（HRP）为催化剂，邻甲氧基酚为底物，H2O2为氧化剂的自由基引发体系，高密度聚乙烯膜（HDPE）接枝丙烯酰胺的反应过程。考察催化反应各参数对HDPE膜亲水性和染色性能的影响。方法用SEM，UV-Vis分析聚合物膜的组成和表面结构。测定改性HDPE膜的接触角和染色后膜的UV-vis吸光度，分析溶剂浓度对改性效果的影响。结果最佳处理条件是反应时间为1．5h，H2O2的浓度为0．03％（质量分数），邻甲氧基酚的浓度为0．5％（质量分数），反应液中丙酮的最佳浓度为30％（体积分数）。结论HRP催化接枝处理HDPE膜明显改善了其亲水性和染色性能。     

共振光散射测定辣根过氧化物酶

辣根过氧化物酶(HRP)催化H2O2氧化四甲基联苯胺(TMB)生成大分子聚合物并产生强烈的共振光散射,由此建立了操作简单快速、高灵敏度测定HRP的新方法. 探讨了酸度、TMB浓度、H2O2浓度、温度等对散射信号的影响. 在最佳实验条件下测定HRP的线性范围为1×10-7～1×10-6 g/L,最低检出限1.8×10-8 g/L.     

水-有机溶剂混合体系中辣根过氧化物酶的催化反应

运用分光光度法和傅立叶变换红外光谱研究了辣根过氧化物酶（HRP）在甲醇、乙腈和二氧六环与水互溶溶剂体系中的性质变化,研究结果显示不同种类和含量的有机溶剂都使HRP有不同程度的失活,HRP在有机溶剂中的米氏常数（Km）增大了,但HRP的活性点结构没有遭到破坏,只是将活性部位从一个包埋于酶分子内部的、疏水的环境暴露于极性的有机溶剂中．傅立叶变换红外光谱研究结果显示在有机溶剂中酶分子的二级结构发生了变化,推测可能是酶在有机溶剂中的活性降低的原因．     

Direct electrochemistry and electrocatalysis of horseradish peroxidase in MnO2 nanosheet film

A novel material MnO2 nanosheet has been used as the support matrix for the immobilization of horseradish peroxidase （HRP）. HRP entrapped in MnO2 nanosheet film exhibits facile direct electron transfer with the electron transfer rate constant of 6.86 s^-1. The HRP/MnO2 nanosheet film gives a reversible redox couple with the apparent formal peak potential （E^0＇） of -0.315 V （vs. Ag/AgCl） in pH 6.5 phosphate buffer solution （PBS）. The formal potential E^0＇ of HRP shifts linearly with pH with a slope of -53.75 mV.pH^-1, denoting that an electron transfer accompanies single-proton transportation. The immobilized HRP shows an electrocatslytic activity to the reduction of H2O2. The response time of the biosensor for H2O2 is less than 3 s, and the detection limit is 0.21 μmol · L^-1 based on signal/noise = 3.     

基于对羟基桂皮醇的新型酶联荧光免疫传感系统测定布氏杆菌抗体

以一种纯天然产物对羟基桂皮醇(4-hydroxycinnamic alcohol,HCA)为辣根过氧化物酶(HRP)底物,建立对羟基桂皮醇-辣根过氧化物酶-过氧化氢新体系。对羟基桂皮醇本身只有极弱的荧光,在HRP催化下可被H2O2氧化成二聚体产物,该二聚体在315nm的激发光下能发射波长为467nm的强荧光,并且反应体系荧光强度增加值与HRP量在一定浓度范围内呈线性相关。根据此关系和竞争型免疫定量原理,建立兔布氏杆菌抗体测定的荧光酶联免疫传感体系,并对免疫测定条件如pH值、HRP-BrAb用量、BSA和流速等进行优化。运用制备传感体系测定兔布氏杆菌抗体的质量浓度线性范围为2.7～90μg/L,检测限为2.7μg/L,相对标准偏差为4.6%;对羟基桂皮醇在空气中较稳定,对人体无毒害,在临床上可代替传统HRP底物。     

四种电化学底物伏安酶联免疫分析法检测烟草花叶病毒

分别以对苯二胺，间氨基酚，邻联茴香胺和硫酸对氨基N，N－二乙基苯胺为辣根过氧化物酶（HRP）的电化学底物，这四种物质在HRP的催化下能够被H2O2氧化生成具有电化学活性的酶催化反应产物，可以用线性扫描二阶导数极谱法进行检测。将该法与抗原直接包被间接法（DAC－ELISA）相结合，应用于烟草花叶病毒（TMV）的检测，取得了较好的结果。     

电位控制辣根过氧化物酶在玻碳电极上的组装及H2O2的检测

研究了一种在聚硫堇修饰玻碳电极上利用电位控制组装辣根过氧化物酶(HRP)的新方法.首先将硫堇(TH)电聚合到玻碳电极(GCE)表面,形成均匀的带正电荷的导电聚合膜,再通过调节溶液的酸度使HRP带负电荷,利用电位控制的方法在硫堇聚合膜(PTH)上组装HRP, 通过循环伏安法和电化学交流阻抗法对HRP的整个组装过程进行表征.在优化的实验条件下,采用计时电流法将HRP修饰电极用于H2O2检测,结果表明,在2×10-5～2×10-2 mol·L-1范围内HRP修饰电极的响应电流与H2O2浓度呈良好的线性关系,该研究对各类酶传感器、免疫传感器的设计与制备具有重要意义.     

辣根过氧化物酶的提取

辣根过氧化物酶(HRP)属血红素蛋白质,是目前酶工业中使用最普遍的一种酶,它既可用于定位检测,又能用于定量测定。精制HRP售价达2200元/克。HRP广泛分布于植物体中,尤其在鲜辣根(十字花科蔬菜)中含量极高。我国辣根资源极为丰富,本方法即介绍以新鲜辣根或辣根皮为原料提取HRP技术。     

智慧医院供应商管理平台的构建

<正>笔者结合自身构建医院HRP（医院资源规划）系统的实际经验，从智慧医院的建设和管理出发，提出供应商管理平台的构建方案，旨在加强医院和供应商之间的联系。为此，笔者从顶层设计的角度着重阐述了供应商管理平台的构建模式、医院与供应商的需求以及供应商平台与医院HRP系统的集成等内容，以期进一步提高智慧医院的精细化、数字化管理水平。     

基于聚硫堇/纳米金固定酶的过氧化氢生物传感器

将电子媒介体硫堇（Thi）聚合于玻碳电极（GC）表面形成带正电的多孔聚硫堇（PTH）复合膜,再利用共价结合和静电吸附将纳米金（nano-Au）和过氧化物酶（HRP）修饰于电极上,从而制得HRP/nano-Au/PTH/GC传感器.用循环伏安法和计时电流法考察该修饰电极的电化学特性,发现该修饰电极对过氧化氢（H2O2）的...