摇瓶中重组大肠杆菌生产人γ-干扰素工艺优化

目的优化大肠杆菌生产重组人γ-干扰素摇瓶发酵工艺条件,分析摇瓶发酵过程中的制约因素。方法在摇瓶中研究了种子菌龄、接种量和诱导时机等因素对工程菌生产rhIFN-γ和质粒稳定性的影响,及优化条件下工程菌发酵参数。结果最佳条件:种子液为OD6000.5~1.5,接种量为6%,培养至OD600为1.5时42℃诱导表达4 h。在此条件下,在摇瓶中使用M9II培养基时,质粒无丢失,摇瓶中rhIFN-γ的表达量占菌体总蛋白的43.2%,光密度为3.3。对发酵过程中总糖、还原糖、总氮和pH的分析表明,发酵过程中培养基中碳源、氮源丰富,而溶解氧的不足和pH值偏酸性可能是整个培养过程的限制性因素。结论构建的工程菌发酵的稳定性和重复性良好,为rhIFN-γ的大规模生产提供可靠的放大依据。     

单克隆抗体亲和层析纯化基因工程人γ-干扰素研究

用抗基因工程人γ－干扰素单克隆抗体（２Ａ１２）细胞株亲和层析从表达人γ－干扰素的大肠杆菌抽提液中纯化经稀释复性后的γ－干扰素。一步纯化后的γ－干扰素含量达９５％以上，蛋白质的比活性达 １．２×１０ｕ／ｇ，收率为７８％。洗脱液用 ０．５ｍｏｌ／ＬＮａＣＩ的 ＰＢＳ溶液，洗脱率达９２．８％。     

重组大肠杆菌BL21(pBAI)生产人干扰素α2b

通过培养重组大肠杆菌BL21(pBAI)表达人干扰素α2b(Human Interferon α2b,hIFNα2b).hIFNα2b表达由PL,启动子控制,通过升温至42℃诱导表达.本研究比较了分批培养和多种补料分批培养方式下hIFNα2b的生产,其中通过恒速流加葡萄糖,hIFNα2b的表达量达到6 540 mg/L,平均生产速率和比速率分别为546 mg/(L·h)和27 mg/(g·h).升温前1.5 h补充25 g酵母提取物,并以0.27 g/(g·h)的比速率供应葡萄糖,hIFNα2b的平均生产速率达到1 006 mg/(L·h),比生产速率为54 mg/(g·h),对有机氮源的得率提高到138 mg/g.     

人IFN-γ在大肠杆菌中高效表达和色谱复性研究

从健康人外周血分离单核细胞，经LPS刺激后提取总RNA，用RT—PCR扩增hIFN-γ的cD—NA。将扩增产物克隆后进行序列分析证明，克隆的hIFN-γcDNA除存在2个序列多态性位点外，与天然的干扰素氨基酸序列完全一致。利用温控表达系统在大肠杆菌中实现了hIFN-γ的高效表达，表达的目的蛋白可占茵体总蛋白的55％。用5L和50L发酵罐放量生产的产物，经高效疏水色谱HPHIC直接复性和纯化得到了重组hIFN-γ纯品，其比活性与天然蛋白相近．     

大肠杆菌生产重组人bFGF的发酵条件

对含有具有氨苄抗性、Ｌａｃ启动子和编码人碱性成纤维细胞生长因子（ｈ－ｂＦＧＦ）基因质粒的大肠杆菌的发酵条件进行了研究。为了获得ｈ－ｂＦＧＦ高效表达的最佳条件，进行了摇瓶试验。在ＩＰＴＧ诱导作用下，ｈ－ｂＦＧＦ可以分泌到胞浆中，采用连续流加葡萄糖的高密度分批发酵工艺，经１１ｈ发酵可以获得菌体光密度值（ＯＤ值）达３８，产量达２００ｍｇ／Ｌ和ｈ－ｂＦＧＦ。经纯化后得到的高纯度ｈ－ｂＦＧＦ其理化及生物学特     

响应曲面法优化重组人神经生长因子发酵培养基组成的研究

通过响应曲面法(RSM)达到优化重组人神经生长因子发酵培养基组分含量的目的.对发酵基础培养基采用四因素三水平实验设计,优化了葡萄糖、酵母粉、蛋白胨和KH2PO4的最佳浓度,得到了最大预测值并进行了验证.最终优化培养基组分为:葡萄糖7.95 g/L、蛋白胨19.06 g/L、酵母粉13.51 g/L和KH2PO43.87g/L,此时预测最大菌体量Ymax=2.398 g/L.验证试验结果表明:使用优化后的培养基表达重组人神经生长因子,其菌体量的平均值为(2.357±0.083)g/L,实验值与预测值基本相符,均高于优化前菌体量,且其表达量也得到相应提高.     

重组大肠杆菌生产rhG-CSF发酵工艺的研究

在5L发酵罐中，研究了溶解氧(DO)、诱导时机、接种量等因素对重组大肠杆菌DH5α／pBV220生产rhG-CSF的影响．结果表明，在ω(D0)≥50％，茵体光密度D600≈4．50，42℃诱导表达4h的条件下rhG-CSF的茵体干重可达6．61g／L，表达量为38．1％．     

γ干扰素工程菌发酵工艺研究

在摇瓶培养及恒化培养研究的基础上,对含温度敏感型质粒γ干扰素工程菌高密度、高表达的发酵工艺作了探讨。摇瓶培养结果表明,菌体的良好生长状态对外源基因表达起着重要作用,工程菌于对数后期升温,干扰素滴度最高。以葡萄糖为限制性基质的恒化培养,得出了工程菌细胞生长得率与比生长速率之间的关系,同时表明工程菌升温表达前的比生长速率对表达后干扰素的比活有影响,比生长速率在0.10～0.15h~(-1)时比活最大。通过碳、氮、镁的间歇流加培养与连续流加培养,均使工程菌达到高密度与高表达,但以控制比生长速率为目的的连续流加培养较间歇流加比活提高近4倍,棕1.1×10~(10)IU/L。     

重组大肠杆菌产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的培养基优化

为了提高重组大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3)-pET-22-bgl-(kil-Km)的产酶能力,采用单因素试验研究了培养基碳源、氮源及碳氮比(摩尔比)对重组大肠杆菌Rosetta(DE3)-pET-22-bgl-(kil-Km)分泌表达重组β-1,3-1,4-葡聚糖酶H(A107-M)的影响.在此基础上,采用Box-Behnken设计法和响应面分析法对以上影响因素进行优化,得出最优培养基成分为(g/L):甘油10.01,酪蛋白胨12.03,酵母粉24,NaCl 10,(NH4)2SO44.77,KH2PO42.31,K2HPO412.54.在     

干扰素-γ对哮喘患者抗原引起气道嗜酸性粒细胞浸润的影响

干扰素┐γ对哮喘患者抗原引起气道嗜酸性粒细胞浸润的影响ＥｆｅｃｔｏｆＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎ┐ｇａｍｍａｏｎＡｎｔｉｇｅｎ┐ｉｎｄｕｃｅｄＥｏｓｉｎｏｐｈｉｌＩｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｉｎｔｏｔｈｅＡｓｔｈｍａｔｉｃＡｉｒｗａｙＬｉＧｕｏｘｉｕＬｉｕＧｕａ...     

重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂疗效观察

目的：评价重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂的疗效及安全性。方法：采用多中心、随机、双盲、基质平行对照试验，按病例接纳顺序随机表分治疗组120例、对照组90例，观察时间为6周。结果：重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂痊愈率50．0％，总有效率98．3％，与对照组比较，有显著性差异（P〈O．05）。结论：重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂有较好的临床疗效，使用方便安全。     

高密度培养基因工程大肠杆菌生产α-乙酰乳酸脱羧酶

在 30 0 0 L 发酵罐中 ,利用分批补料培养技术高密度培养含分泌型重组质粒 p ETGAU- 10的大肠杆菌TG1,生产α-乙酰乳酸脱羧酶。通过控制发酵条件 ,发酵液的细胞密度 (OD60 0 )可达 30 .5 ,且胞外α-乙酰乳酸脱羧酶活力最高达 890 U .ml- 1 ,达到较为理想的工业化生产的要求。     

干扰素—γ对假孕大鼠黄体功能的影响（Ⅱ）

以假孕大鼠为实验对象,在体注射ＩＦＮ－γ研究ＩＦＮ－γ对血浆孕酮水平的影响,黄体器官离体培养研究ＩＦＮ－γ,ＰＧＦ２α对黄体孕酮水平的作用,结果表明,注射ＩＦＮ－γ后,能提高血浆孕酮水平,由８３．８７ｎｇ／ｍＬ升至１１７．０９ｎｇ／ｍＬ,增长３９．６％（Ｐ〈０．０５）,离体培养条件下加入ＩＦＮ－γ（１２０Ｕ／ｍＬ）也能提高培养液中的孕酮水平（Ｐ〈０．０１）,加入ＰＧＦ２α（１００ｎｇ／ｍＬ）则能显     

重组人干扰素α-2b水针、粉针的稳定性及与干扰素标准品的比较研究

研究重组人干扰素α-2b(商品名:安福隆)的稳定性.采用细胞病变法(CPE)检测在4℃贮存条件下放置不同时段的干扰素α-2b水针、粉针和干扰素标准品的抗病毒能力,与标准品比较,评价了水针和粉针的稳定性.结果显示,在4℃的贮存条件下,干扰素α-2b水针和粉针的抗病毒能力基本相同;经两年贮存后,也没有明显地变化,且均比标准品抗病毒能力强.说明干扰素α-2b水针和粉针稳定性均较好,其辅料配方合理,可有效保护干扰素α-2b,减少其降解.     

重组人干扰素α-2b工程菌培养条件的优化研究

对重组人干扰素α-2b工程菌的培养条件、诱导条件进行研究.提高菌体目标蛋白表达量.通过实验条件的优化确定了适合重组人干扰素α-2b表达的诱导温度、诱导时间和诱导收获时间等.改进工艺后,目的蛋白的表达量大大提高,为进一步的下游工艺的开发奠定了基础.     

基因工程菌发酵生产l-苯丙氨酸工艺优化

对重组l－苯丙氨酸工程菌E.coli HB101.Ⅰ发酵过程中的营养物质消耗及产物l－苯丙氨酸的积累进行实验分析。得出：l－苯丙氨酸在培养温度为38.5℃，pH为7.0－7.5，溶氧控制在20％，含糖量控制在1.5%，酪氨酸添加量为1.0-1.2g/L时，产酸量最大，为工艺优化控制提供了有用的基础数据。     

重组人粒细胞集落刺激因子的摇瓶发酵研究

目的 优化重组大肠杆菌生产人粒细胞集落刺激因子摇瓶发酵工艺条件。方法 利用摇瓶系统地考查rhG-CSF茵株培养温度、诱导时机、pH值、溶氧、种子茵龄、接种量等工艺条件，选择出最佳的摇瓶培养条件。结果 最佳条件为：培养温度30℃；初始pH值在7．0～7．2；装液量20％；摇床转速180r／min；种子菌龄在A600为1．0～1．5时接种，并在对数生长前期(A600=1．0)时诱导4h。在此优化的培养条件下，在摇瓶中使用优化后的M9培养基时，rhG-CSF的表达量占茵体总蛋白的36．5％，光密度达5．85。结论 构建的rhG-CSF工程菌发酵的稳定性和重复性良好，可作为rhp-CSF的大规模生产提供可靠的放大依据。     

重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂疗效观察

目的评价重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂的疗效及安全性。方法采用多中心、随机、双盲、基质平行对照试验,按病例接纳顺序随机表分治疗组120例、对照组90例,观察时间为6周。结果重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂痊愈率50.0%,总有效率98.3%,与对照组比较,有显著性差异(P<0.05)。结论重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂有较好的临床疗效,使用方便安全。     

重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂疗效观察

目的 评价重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂的疗效及安全性.方法 采用多中心、随机、双盲、基质平行对照试验,按病例接纳顺序随机表分治疗组120例、对照组90例,观察时间为6周.结果 重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂痊愈率50.0%,总有效率98.3%,与对照组比较,有显著性差异(P＜0.05).结论 重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂有较好的临床疗效,使用方便安全.     

干扰素—γ对假孕大鼠黄体功能的影响

在假孕大鼠的第２、４、６ｄ（Ｄ２、Ｄ４、Ｄ６）注射干扰素－γ（１０ｕ／ｇ体重），测定假孕期间盘浆孕酮水平的变化。结果表明：不同假孕日龄的黄体分泌孕酮的能力有明显差异，其中Ｄ５时孕酮大量分泌，达到高峰；注射干扰素－γ后能显著提高血浆中孕酮水平。