食管鳞癌淋巴结转移的蛋白质组分析

分析食管鳞癌转移淋巴结中鳞癌细胞与食管鳞癌组织中鳞癌细胞的蛋白质的表达差异,获取鉴别两者的分子标志物。用激光捕获显微切割技术分离出食管鳞癌转移淋巴结和食管鳞癌组织中较纯的鳞癌细胞,运用双向电泳和质谱的方法检测两者表达的差异蛋白,并用免疫印迹技术对差异候选蛋白进行分析、验证。发现29个差异蛋白点,通过质谱鉴定出6种有意义的蛋白,转移淋巴结中的鳞癌细胞中如peroxiredoxin 1等5种蛋白表达明显增高,1种蛋白MTCBP-1表达下调。因此激光捕获显微切割可以有效地解决组织异质性的问题;食管鳞癌组织中的鳞癌细胞与转移淋巴结中的鳞癌细胞的2-DE蛋白质图谱具有明显的差异表达,提示食管鳞癌的淋巴结转移过程的发生是多种蛋白质功能共同作用的结果,从而造成肿瘤细胞迁移性和侵袭性的进一步增强。     

人食管鳞癌及正常食管组织中Notch1基因的mRNA及蛋白的表达

采用RT-PCR方法,分别从人食管鳞癌及正常食管组织中扩增 Notch1基因,结果表明Notch1基因在人食管鳞癌及正常食管组织中均有表达.此外,通过免疫组织化学方法检测不同病理特征的35例食管鳞癌、16例原位癌及35例癌周正常食管粘膜上皮组织Notch1蛋白表达的变化,结果显示:Notch1蛋白在正常食管粘膜上皮组织和原位癌中的阳性率分别为82.9%、68.7%,二者无显著性差异(P＞0.05),但均显著高于食管鳞癌组织37.1%(P＜0.05),食管鳞癌Notch1蛋白的低表达与肿瘤的直径、分期和发生部位无关(P＞0.05),但与淋巴结转移有关(P＜0.05).这表明在正常食管粘膜上皮组织中Notch1蛋白高表达,而在食管癌鳞中Notch1蛋白呈现低表达或不表达.该研究为进一步探明Notch1基因的表达对食管癌细胞的发生、发展的影响奠定了良好的基础.     

CDK16在食管鳞癌中的表达及其对肿瘤发生发展的影响

目的研究发现,细胞周期素依赖性激酶(cyclin dependent kinases,CDKs)家族成员与食管鳞癌的发病密切相关,但细胞周期素依赖性激酶16(CDK16)对食管鳞癌发病的影响尚不清楚.本研究旨在探讨CDK16在人食管鳞癌组织中的表达及生物学意义.方法应用组织芯片技术结合免疫组织化学技术检测45例食管鳞癌组织、45例癌旁组织中CDK16蛋白的表达情况,并使用统计分析软件研究CDK16蛋白的表达与食管鳞癌临床病理特征之间的关系.结果 CDK16在食管鳞癌组织中呈阳性表达,且表达强度与肿瘤分化程度呈负相关.另外,CDK16在食管鳞癌细胞中的表达位置与肿瘤的分化程度紧密相关.CDK16的表达与食管鳞癌的分化程度、淋巴结转移及TNM临床分期均具有显著的相关性(P<0.05),而与患者的年龄、性别以及肿瘤的部位、最大径、病理形态没有显著的相关性(P>0.05).结论 CDK16在食管鳞癌中的高表达与食管鳞癌的发生发展及转移密切相关.检测CDK16的表达有助于食管鳞癌的临床诊断和预后评估.     

食管鳞癌患者血清可溶性HLA-G分子表达水平及其临床意义

研究可溶性人类白细胞抗原G分子(sHLA-G)在食管鳞癌患者血清中的水平及其临床意义.应用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测60例食管鳞癌患者及28例对照者血清中sHLA-G(sHLA-G1 和 HLA-G5)水平,免疫组化S-P法检测对应的食管鳞瘤患者癌组织及对照组正常食管组织中HLA-G的表达,应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测组织中HLA-GmRNA及HLA-G5mRNA的表达情况.结果食管鳞癌患者血清sHLA-G平均水平(15.04 u/mL)较对照(6.81 u/mL)升高(P=0.006);血清sHLA-G水平与肿瘤患者临床病理特征无相关性;HLA-G在60例癌组织表达率为70%且与肿瘤的分化程度(P=0.033)及淋巴结转移相关(P=0.035),正常食管组织无HLA-G表达;HLA-GmRNA和HLA-G5mRNA在20例HLA-G表达阳性的食管鳞癌组织中的均有表达,正常食管组织无HLA-GmRNA和HLA-G5mRNA表达.说明食管鳞癌组织可异常表达HLA-G分子,联合检测血清sHLA-G水平及HLA-G分子可作为临床食管癌的诊断和判断预后的指标.     

GCLM和GPX4在食管鳞癌组织中的表达及临床意义

探讨谷氨酰半胱氨酸连接酶调节亚基(GCLM)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达及临床意义。采用免疫组化SP法检测50例食管鳞癌患者癌组织(实验组)及20例正常人食管组织(对照组)中GCLM及GPX4的表达水平,分析两者与食管鳞癌患者临床病理特征间的关系及两者之间是否具有相关性。GCLM在食管鳞癌组织中的表达水平(84%)明显高于正常食管组织(45%),GPX4在食管鳞癌组织中的表达水平(82%)明显高于正常食管组织(25%),差异具有显著性(P0.05),GCLM的表达水平与食管鳞癌的分化程度、淋巴结转移情况及临床分期密切相关,GPX4的表达水平与食管鳞癌的浸润深度、淋巴结转移情况及临床分期密切相关(P0.05)。在食管鳞癌组织中GCLM与GPX4的表达水平成正相关(r=0.506, P0.05)。GCLM及GPX4可为食管癌的诊断提供参考价值。     

口腔鳞癌中MIF的表达及意义

目的:通过检测口腔鳞癌中巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)的表达,探讨其在口腔鳞癌中的作用及意义.方法:采用免疫组化SABC法检测MIF在42例口腔鳞癌和10例口腔正常组织的表达情况,并通过SPSS14.0统计软件包分析其与临床病理学参数的关系.结果:MIF主要表达于口腔鳞癌细胞中,其阳性表达率(73.81%)显著高于正常组(P＜0.05),肿瘤组织中MIF的表达在性别、有无淋巴结转移、Ⅰ-Ⅱ期与Ⅲ-Ⅳ期的比较中差异均有统计学意义(P＜0.05),而在不同年龄组中的差异无统计学意义.结论:MIF在口腔鳞癌细胞中呈高表达,且可能在口腔鳞癌的发展和转移中发挥作用.     

PRDM14表达下调对食管鳞癌EC9706细胞增殖、细胞周期和侵袭能力的影响

利用原位杂交和免疫组织化学检测89例食管鳞癌组织和对应的正常食管黏膜组织中PRDM14 mRNA转录水平和蛋白的表达量,并分析其表达下调对食管鳞癌EC9706细胞增殖、细胞周期和侵袭能力的影响.结果显示,食管鳞癌组织中PRDM14 mRNA转录水平和蛋白表达量高于正常食管黏膜组织,有显著性差异(P<0.05).PRDM14 siRNA能下调EC9706细胞中PRDM14蛋白表达,其表达下调显著抑制EC9706细胞的增殖、改变细胞周期分布和降低侵袭力.此外,PRDM14表达下调降低EC9706细胞中cyclin D1、cdk2、MMP-2和MMP-9蛋白的表达以及提高p21和E-cadherin蛋白的表达.上述结果表明PRDM14可能在食管鳞癌的发生、发展中发挥重要的作用,抑制其表达.有望成为食管鳞癌分子靶向治疗的新的策略.     

食管鳞癌中CDK16的表达及其临床病理意义

以组织芯片为研究对象,采用免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)检测细胞周期素依赖性激酶16(Cyclin Dependent Kinase 16,CDK16)在各类型食管癌(鳞癌、基底细胞样鳞癌、梭形细胞鳞癌、腺癌、腺鳞癌、未分化癌)中的表达.结果显示,CDK16在食管癌中的表达具有组织学特异性.CDK16在食管鳞癌中为强阳性表达.CDK16在食管鳞癌中的表达与肿瘤分化程度呈负相关,而且CDK16在细胞核中的表达阳性强度随着肿瘤的恶性程度呈依次递减趋势,而在细胞质中的表达阳性强度随着肿瘤的恶性程度呈依次递增趋势.另外在淋巴结中,CDK16主要以细胞核表达为主,且CDK16在淋巴结中的表达与肿瘤的临床分期呈正相关.以上结果表明,CDK16的表达与食管癌的组织学类型密切相关.CDK16在食管鳞癌中的高表达与食管鳞癌的发生、发展具有紧密的关系.     

各类型食管癌组织中CDK16的表达及意义

采用组织芯片技术结合免疫组织化学技术检测各类型食管癌(鳞状细胞癌、腺癌、小细胞癌)以及食管胃交界癌、胃癌中细胞周期素依赖性激酶16(cyclin dependent kinase 16,CDK16)的表达情况.使用数学统计分析软件研究CDK16蛋白的表达与食管鳞癌临床病理特征之间的关系.结果显示,CDK16在不同类型食管癌中的表达存在差异.CDK16在食管鳞癌中呈强阳性表达,且表达强度与肿瘤的分化程度负相关.CDK16在食管鳞癌细胞中表达部位的变化与肿瘤的恶性程度密切相关.CDK16的表达与食管鳞癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤最大径及肿瘤的病理形态均没有显著相关性(P0.05),而与肿瘤的病理分级、淋巴结转移及TNM临床分期有显著相关性(P0.05).以上结果表明,CDK16在食管癌中的表达具有组织学特异性.CDK16在食管鳞癌的发病过程中发挥着重要的作用,而检测CDK16的表达有助于食管鳞癌的临床诊断.     

TLR-4、COX-2在口腔鳞癌中表达及意义

目的:探讨口腔鳞癌中TLR-4和COX-2表达与临床病理因素之间的关系及意义.方法:采用免疫组化SP法检测48例口腔鳞癌患者中TLR-4和COX-2蛋白表达,并分析其临床意义.结果:TLR-4和COX-2主要表达于口腔鳞癌细胞膜和细胞质上,细胞核上无表达,在癌组织及癌旁组织中的阳性表达率逐渐升高,均高于正常组织,各组间比较差别有统计学意义(P0.01)并且在口腔鳞癌和癌旁组织中TLR-4和COX-2呈正相关.结论:TLR-4和COX-2在口腔鳞癌病变进程中表达异常增高,并有明显的协同作用,两者在口腔鳞癌的发生、发展过程中发挥一定作用.     

CXCR7在宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义

检测趋化因子受体7(chemokine receptor 7,CXCR 7)在正常宫颈组织、CIN宫颈组织及宫颈鳞癌宫颈组织中的mRNA及蛋白水平的表达情况。采取江西省妇幼保健院2016年6月-2017年12月新鲜宫颈组织标本103例,应用Western blot与RT-PCR技术,检测CXCR 7蛋白及mRNA在18例正常宫颈组织、18例宫颈鳞状上皮内瘤变组织、35例Ⅰ期宫颈鳞癌组织及32例ⅡB、ⅢB期宫颈鳞癌组织中的表达情况,并分析CXCR 7与宫颈鳞癌临床病理特征,如患者年龄、肌层浸润、肿瘤大小、FIGO分期之间的关系。结果表明,CXCR 7可能参与了宫颈鳞癌的增殖、生长、分化、侵袭等恶性行为,在对宫颈鳞癌早发现、早治疗及预后方面的研究中,CXCR 7可能提供了新的思路。     

人DLL1真核表达质粒的构建及过表达DLL1抑制人口腔鳞癌细胞SCC15的增殖

目的:构建人全长DLL1基因真核表达质粒及过表达DLL1对人口腔鳞癌细胞增殖的影响.方法:PCR扩增人全长DLL1基因,酶切和测序鉴定后克隆至真核表达载体pCMV-Tag4并构建真核重组质粒DLL1/pC MVTag4,瞬时转染HEK293T细胞并通过实时荧光定量PCR(Q-PCR)和Western blot鉴定DLL1的表达;进一步检测DLL1在SCC15等3株人口腔鳞癌细胞中的表达;DLL1/pCMV-Tag4瞬时转染SCC15细胞,Q-PCR和Western blot检测过表达及MTT检测DLL1过表达对细胞SCC15增殖的影响.结果:真核重组质粒DLL1/pCMV-Tag4在HEK293T细胞中成功表达;DLL1在口腔鳞癌细胞中的表达高于正常口腔细胞;DLL1/pCMV-Tag4在SCC15细胞中获得表达且过表达DLL1抑制SCC15细胞的增殖.结论:人全长DLL1分子在HEK293T及SCC15细胞中获得表达,过表达DLL1抑制口腔鳞癌细胞SCC15的增殖.     

血清miR-25、miR-223和miR-373作为食管鳞癌生物标志物的评价

为了探讨血清miRNA作为诊断标志物的可行性,利用茎环引物进行qRT-PCR,检测了miR-25、miR-223和miR-373在正常人血清、食管鳞癌患者术前和术后第7 d血清、癌组织和癌旁组织的相对表达量.实验结果表明:术前食管鳞癌病人的3种血清miRNA相对表达量高于正常人和手术后第7 d病人,AUC分别为0.794、0.839和0.873,癌组织的这3种miRNA相对表达量高于癌旁组织.这3种miRNA在食管癌患者癌组织的高表达导致血清的这3种miRNA含量增高,因此这3种血清miRNA可以作为候选诊断标志物.     

食管鳞状细胞癌中VEGF和nm23表达和临床意义

 探讨VEGF和nm23基因产物表达与食管鳞状细胞癌（ESCC）临床病理指标及预后的关系,应用免疫组织化学Elivision法对食管癌组织和癌旁正常食管粘膜组织中VEGF蛋白和nm23蛋白进行检测。结果表明,90例食管癌组织中VEGF蛋白56例高表达,19例低表达,15例不表达,阳性率为83.33%,在28例正常黏膜组织中6例低表达,阳性率为21.42%,两者比较具有统计学意义（P<0.05）;90例食管癌组织中nm23蛋白24例高表达,23例低表达,43例不表达,阳性率为52.22%,在28例正常食管黏膜组织中23例表达,5例不表达,阳性率为82.14%,两者比较具有统计学意义（P<0.05）。无食管癌旁淋巴结转移组的nm23阳性表达率64%（32/50）较有转移组的表达率37.5%（15/40）高,有显著性差异（P<0.05）。VEGF和nm23的表达与分化程度、浸润深度无关（P>0.05）。由此表明,VEGF阳性伴nm23阴性表达的患者发生淋巴结转移的可能性大,VEGF和nm23在食管癌中的表达与食管癌的发生、发展、浸润、转移和预后密切相关,可作为临床预测浸润转移和估计预后的重要参考指标。     

Bmi-1蛋白在食管鳞状细胞癌中表达及临床意义

目的:观察Bmi-1蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达,探讨Bmi-1与食管鳞状细胞癌的相关性.方法:应用免疫组织化学法检测南京医科大学附属淮安第一医院2005年1月至2006年2月间168例食管鳞状细胞癌组织和30例正常食管黏膜组织Bmi-1蛋白的表达.结果:食管鳞状细胞癌组织和正常食管黏膜组织中Bmi-1蛋白的阳性表达率分别为66.1%(111/168)、23.3%(7/30),Bmi-1蛋白阳性表达率在食管鳞状细胞癌组织和正常食管黏膜组织中差异具有统计学意义(P<0.001),Bmi-1蛋白表达与食管鳞状细胞癌组织学分级、TNM分期和淋巴结转移具有相关性(P=0.016,P=0.004,P<0.001),Bmi-1阴性组的5年生存率显著优于Bmi-1阳性组(P<0.001).结论:Bmi-1表达异常在食管鳞状细胞癌发生发展中具有重要作用,检测Bmi-1的表达对判断食管鳞状细胞癌的预后具有重要意义.     

γ-干扰素在宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌中的表达及意义

目的:探讨γ-干扰素(γ-Interferon,γ-IFN)在宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌中的表达及意义.方法:应用免疫组化S-P法检测20例宫颈鳞癌,48例宫颈CIN及10例正常宫颈组织中γ-IFN的表达并应用图像分析技术及阳性单位(positive unit,PU)值表达γ-IFN免疫组化阳性反应的结果.结果:(1)γ-IFN在正常宫颈上皮、宫颈CIN及宫颈鳞癌中表达的PU值分别为(30.80±2.62)、(16.47±1.25)及(9.80±1.62),3组比较P＜0.05;(2)在宫颈CIN Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中γ-IFN表达的PU值为(18.17±2.35)、(13.48±1.75)、(10.20±3.54),3组比较P＜0.01;(3)在高分化、中分化及低分化宫颈鳞癌中γ-IFN表达的PU值分别为(12.75±1.06)、(9.48±1.28)及(6.06±1.13),3组比较P＜0.05;而在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期宫颈鳞癌中Y-IFN表达的PU值分别为(8.91±0.72)、(8.05±0.77)及(7.79±0.45),3组比较P＞0.05.结论:富颈CIN及宫颈鳞癌的发生与γ-IFN的表达减弱有关;而且宫颈鳞癌细胞的分化程度也与γ-IFN表达下调有关.     

MCM6促进食管癌细胞增殖进而导致预后不良（英文）

食管癌是一种常见的致死率高的恶性肿瘤.为确定食管癌发生的潜在机制,在生物信息学分析的基础上筛选关键基因.染色体维持6复合体(Chromosome maintenance 6 complex,MCM6)在多种恶性肿瘤中上调,但是,它在食管癌中的作用仍然不清楚.利用GEPIA数据库,研究MCM6基因在正常食管组织和癌性食管组织中的表达变化.结果表明,食管癌中MCM6基因有明显的高表达水平.利用免疫组化方法检测MCM6蛋白在正常食管组织及恶性肿瘤组织中的表达,发现食管癌中MCM6蛋白有明显的高表达水平.用卡方检验分析临床病理特征与蛋白表达的关系,发现本院78例患者MCM6表达与食管癌肿瘤大小有显著相关性.通过集落形成试验,确定MCM6能促进食管癌细胞的增殖.肿瘤生长试验证实了MCM6在小鼠食管癌进展中的促进作用.通过数据库和免疫组化检测MCM6与PCNA的相关性,发现MCM6与PNCA基因和蛋白呈正相关,进而推测MCM6可能通过影响PNCA的表达促进食管癌的增殖.综上所述,MCM6可能成为治疗食管癌的新靶点.     

凋亡基因Survivin在宫颈鳞癌中的表达及其相关性

目的:探讨不同分期宫颈鳞癌组织中Survivin基因表达的特征及其临床意义.方法:应用免疫组化法(S-P法)及图像分析技术检测凋亡基因Survivin在38例宫颈鳞癌的表达情况.0期9例、Ⅰ b期10例、Ⅱa期7例、Ⅱb期7例、Ⅲa期5例,将0期及Ⅰ b期合并为早期,Ⅱa期～Ⅲa期合并为晚期.结果:在早期和晚期宫颈鳞癌组织中均有凋亡基因Survivin的阳性表达,但表达强度不同,早期宫颈鳞癌组织中Survivin PU值为(20.65±4.57),而晚期宫颈鳞癌组织中Survivin PU值为(24.94±5.64),两者比较有统计学差异(P<0.05).结论:Survivin基因在宫颈鳞癌组织中异常表达与宫颈鳞癌的发生及临床分期相关.     

miR-30a-3p对食管鳞癌ECA-109细胞侵袭和增殖能力的影响及生物信息学分析

为探讨miR-30a-3p对食管鳞癌细胞生物学行为的影响及机制,miR-30a-3p转染ECA-109细胞后,实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-30a-3p表达水平,Transwell小室检测细胞侵袭能力,CCK-8检测细胞增殖能力,通过生物信息学预测miR-30a-3p的靶基因,分析靶基因集合的基因功能及通路富集。结果显示,miR-30a-3p抑制ECA-109细胞侵袭能力(P0.05),但对增殖能力的影响无统计学意义(P0.05)。利用系统的生物信息学预测得到与ESCC相关的靶基因77个,其中在食管癌中上调的差异基因42个,下调的差异基因35个。miR-30a-3p的靶基因多集中于迁移、黏附连接、外泌体及蛋白代谢等过程;靶基因显著富集于Ras信号通路。由此可知:miR-30a-3p可抑制ESCC细胞的侵袭能力,分析得出的参与侵袭迁移及其他功能的靶基因为进一步研究提供了方向。     

南蛇藤醇介导的 PTEN 过表达增强顺铂对食管癌细胞的化学敏感性并抑制裸鼠成瘤能力

摘要:目的 探究南蛇藤醇介导的 PTEN 过表达对食管癌细胞化学敏感性的影响。 方法 构建食管癌肿瘤模型小鼠,使用南蛇藤醇(1、5 mg / kg)和顺铂(5 mg / kg)单独或联合对其进行瘤内治疗,观察其肿瘤体积变化和检测 30 d时肿瘤质量;免疫组化检测 Ki67,VEGF 和 Caspase 3 的表达情况。 用不同剂量的南蛇藤醇( 0. 5、1、2. 5、5、10、20、50、80、100 μmol / L)处理人食管上皮细胞系( HET-1 A) 24 h,CCK8 分析检测细胞存活率。 顺铂( 4 μg / mL) 预处理EC109 / DDP 细胞后分别用不同剂量的南蛇藤醇( 1、2. 5、5 μmol / L) 处理 EC109 / DDP 细胞,对照组用 PBS 代替顺铂,CCK8 检测细胞存活率;Transwell 检测细胞的侵袭情况,Western blot 检测细胞中 EMT 相关蛋白以及凋亡相关蛋白表达情况,Hoechst 染色检测细胞调亡情况。 结果 南蛇藤醇 1 mg / kg 和 5 mg / kg 处理后的食管癌肿瘤模型小鼠体内肿瘤质量和体积均显著降低( P< 0. 05) ;PTEN 蛋白表达水平显著升高( P< 0. 05) ;Ki67,VEGF 和 Caspase 3 阳性细胞数均显著减少( P<0. 05) 。 用南蛇藤醇(1、2. 5、5 μmol / L) 处理后,与对照组比较,EC109 细胞存活率和侵袭力均显著降低( P<0. 05) ; Ki67、PCNA、N-cadherin 和 Vimentin 蛋白表达水平显著降低( P<0. 05) ;E-cadherin、cleavedPARP 和 cleaved caspase 3 蛋白表达水平以及细胞凋亡率显著升高( P< 0. 05) ;干扰 PTEN 后细胞存活率以及侵袭力显著升高( P<0. 05) ;凋亡率显著降低( P<0. 05) 。 结论 南蛇藤醇介导的 PTEN 过表达增强顺铂对食管癌细胞EC109 生长、侵袭和 EMT 的抑制作用,促进顺铂诱导的食管癌细胞 EC109 凋亡,从而增强顺铂对食管癌细胞的化学敏感性。