两种方法检测汉坦病毒滴度的比较研究

【摘要】 目的：比较双抗体夹心ELISA法与直接免疫荧光(DFA）法在检测汉坦病毒灵敏度方面的差别。方法：用汉坦病毒76-118株感染Vero-E6细胞,取不同时间点的病毒感染细胞制备细胞爬片或细胞培养物冻融上清,分别用本室制备的抗汉坦病毒单克隆抗体标记荧光素或辣根过氧化物酶（HRP）建立直接免疫荧光法和双抗体夹心ELISA法检测上述细胞中的病毒抗原,并比较两者的检测灵敏度,用空斑形成实验结果作为金标准,以评价两种方法在检测病毒抗原灵敏度方面的差异。结果: 用两种检测方法测定不同时间点的汉坦病毒培养物抗原,双抗体夹心ELISA法不仅检出的时间早,而且其病毒滴度均较IFA法高（P＜0.01）。结论：ELISA法检测汉坦病毒滴度的灵敏度较IFA法更高,并且操作简单,可重复性好,便于大批量规模化检测,因此更适用于汉坦病毒的检测。     

欧洲鳗鲡抗体生成规律的初步研究

用山羊IgG注射欧洲鳗鲡背部肌肉后,采用山羊IgG-琼脂糖亲和层析柱对欧鳗血清免疫球蛋白（IgM）进行分离纯化,并通过SDS-PAGE电泳对纯化后的IgM进行检测,同时制备兔抗欧鳗IgM血清,运用间接ELISA检测正常欧鳗血清（第0天）以及山羊IgG注射欧鳗后第7、14、21、28、35、42天的血清抗体水平,同时利用荧光定量PCR测定了第0天至第28天的欧鳗肾脏、脾脏和鳃中IgM基因表达水平变化.结果表明：纯化后的欧鳗IgM经SDS-PAGE检测含有一条分子质量约68 ku的重链,以及分子质量分别为26 ku和28 ku的两条轻链,获得的兔抗欧鳗IgM血清效价达1/51 200;欧鳗血清抗体水平在第28天达到峰值,脾脏IgM基因表达水平在第14天达到峰值,肾脏和鳃均在第21天达到峰值,血清抗体水平以及三种组织器官IgM基因表达水平的变化规律均为先升高、达到峰值后再降低.     

棘球蚴抗原纯化对免疫球蛋白IgG免疫应答的影响

以纯化的棘球蚴抗原和未经纯化的粗抗原用于棘球蚴感染者血清中抗棘球蚴抗原的特异性免疫球蛋白IgG水平的检测试验,结果表明,当血清稀释度为1∶200时,使用纯化抗原可以获得较高的特异性 (98.9%),并可保持在使用粗抗原及血清稀释度为1∶400时获得的较高的敏感性（93.7%）,提示在棘球蚴感染者血清中抗棘球蚴抗原特异性免疫球蛋白IgG水平的检测中,使用纯化棘球蚴抗原和粗抗原均可获得较高的敏感性(93.7%)和较高的特异性 (98.4%,98.9%),使用纯化抗原时的特异性略高,但在统计学上并无显著差异.     

伸筋草提取物对AA大鼠RF及Ig影响的实验研究

研究伸筋草提取物对佐剂性关节炎（AA）大鼠血清类风湿因子（RF）及免疫球蛋白（Ig）的影响,探讨其治疗类风湿性关节炎（RA）的作用及免疫学机制.采用弗氏完全佐剂（CFA）诱导大鼠AA模型,于造模后第7 d分别灌胃给药伸筋草乙醇、正丁醇提取物,连续给药21 d.ELISA法检测RF,免疫透射比浊法检测IgG、IgM、IgA的OD值.模型组大鼠血清RF和IgA、IgM水平均高于正常对照组（P〈0.01）.各治疗组RF、IgM、IgA水平均有不同程度的降低,IgG未见有意义的改变.伸筋草乙醇、正丁醇提取物可通过免疫调节机制对佐剂性关节炎发挥治疗作用.     

脂质体电化学发光免疫传感器用于人IgG的检测

实验构建了一种检测人免疫球蛋白G（人IgG）的竞争型免疫传感器.采用层层组装的方法将IgG抗体固定在金纳米粒子修饰的金电极表面,基于待测IgG与IgG抗原标记的、内部包裹Ru（bpy）23＋的脂质体之间的竞争,实现对人IgG的检测.结果表明,电化学发光强度与人IgG的浓度在0.1-3 ng/mL范围内呈良好的线性关系,线性回归方程为y=803.1-206.2x（ng/mL）（n=6,R=0.99）,检出限为0.05 ng/mL.对人血清中IgG检测,结果令人满意.     

唾液、DTT、2-Me三种物质对IgM抗体中和能力的比较

探索了三种物质对IgM抗体中和能力,选取5例0型孕妇产前检查标本,分别采用唾液、DTT、2-Me三种物质中和IgM抗体,检测IgG抗体效价。5例孕妇血清经唾液中和,测得IgG效价分别为抗A：0;抗B：0;抗A：1：2;抗B：0;抗A：0抗B：0;抗A：0;抗B：0;抗A：0;抗B：0。采用DTT中和后测得IgG效价分别为抗A：1：8;抗B：1：16;抗A：16;抗B：1：16;抗A：1：16;抗B：1：8;抗A：1：8;抗B：1：8;抗A：1：16;抗B：1：16。采用2-Me中和后测得IgG效价分别为抗A：1：2;抗B：1：64;抗A：1：128;抗B：1：4;抗A：1：32;抗B：1：128;抗A：1：16;抗B：1：32;抗A：1：64;抗B：1：32。结果表明唾液型物质不仅中和IgM抗体,而且中和部分IgG抗体,DTT对IgM抗体中和能力较差。2-Me对IgM抗体中和能力较强,而且对IgG抗体破坏小。     

健美操、篮球运动对女大学生血清免疫球蛋白水平的影响

目的研究健美探、篮球运动对女大学生机体IgG、IgM的影响.方法随机选取90名女生分成3组分别为对熙组、实验1组（健美操训练组）和实验2组（篮球训练组）.健美操训练组和置球训练组每周1次中等强度的健美探、篮球训练,共持续12周.利用ELISA方法测定系统锻炼前后血清中IgG、IgM的含量.结果实验组对照姐比较,1gG含量明显升高,差异显著（P＜0.05）,IgM含量无量著性差异（P＞0.05）;且实验2 组IgG含量高于实验1组,有显著性差异（P＜0.05）;实验2组IgG含量的增加较实验1组明显,且有显著性差异.结论坚持运动量适中的篮球、健美探训练可增加机体IgG含量;篮球训练对机体IgG含量的影响较健美操明显;篮球、健美操训练可使机体IgM含量有所增加,但无显著性差异.     

人类巨细胞病毒感染致1型糖尿病机制的初步探讨

目的通过对1型糖尿病患者的HCMV感染标志物、空腹血糖、空腹C肽、胰岛素自身抗体及抗胰岛细胞抗体的研究,初步探讨HCMV致1型糖尿病的机制。方法检测1型糖尿病患者的HCMV感染标志物（包括HCMV—IgG及其相对含量、HCMV—IgM及HCMV—pp65）、空腹血糖、C肽、抗胰岛素自身抗体及抗胰岛细胞抗体并进行统计学分析。结果HCMV感染与1型糖尿病患者抗胰岛素自身抗体之间无明显相关性,但与1型糖尿病患者空腹血糖、空腹C肽、抗胰岛细胞抗体存在明显的相关性,HCMV—pp65阳性的1型糖尿病患者中其空腹血糖明显高于该指标阴性者;抗HCMV—IgG阳性的1型糖尿病患者空腹血糖水平、抗胰岛细胞抗体均显著高于抗HCMV—IgG阴性者,而空腹C肽水平则明显低于抗HCMV—IgG阴性者,且抗HCMV—IgG抗体指数在4．1以上者,其抗胰岛细胞抗体阳性率显著高于抗HCMV—IgG抗体指数在4．0以下者。结论HCMV感染可能通过直接损伤胰岛免疫病理反应损伤胰岛细胞最终导致1型糖尿病的发生。     

抗沙门氏菌O4抗原单克隆抗体的研制及鉴定

制备抗沙门氏菌O4抗原单克隆抗体并鉴定其特性.用加热灭活的乙型副伤寒沙门氏菌免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合方法建立分泌抗体的杂交瘤细胞株.用包被沙门氏菌全菌和纯化的乙型副伤寒沙门氏菌LPS的间接ELISA法筛选杂交瘤细胞和鉴定抗体.其中3株杂交瘤细胞分泌的抗体初步判断为针对O4抗原的抗体,分别命名为1E12、2D5和4C2,这3株抗体与肠道正常细菌及常见的致病性细菌无交叉反应;单克隆抗体的免疫球蛋白类型分别为IgG1κ和IgMκ.获得的单克隆抗体具有较高的特异性,有可能用于B群沙门氏菌免疫学检测方法的建立.     

梅毒螺旋体重组抗原在血清学诊断中的应用

对有关人群进行梅毒筛检是控制和预防梅毒传播的重要措施之一.目前,检测梅毒螺旋体特异抗体通常使用TPHA法和FTA-ABS法,近年来则逐步采用ELISA检测梅毒螺旋体IgM和IgG抗体,用于大量标本检测和献血者的筛查.由于梅毒螺旋体体外培养尚未成功,要获得性质均一、稳定、充足的抗原很困难,因此,抗原的来源成为制约这些诊断方法应用的关键问题.基因工程重组抗原不仅为抗原来源提供了一条主要途径,而且还能克服制备天然抗原时不可避免的兔蛋白污染.近年来,被逐渐应用于多种血清学诊断方法的研究和相关试剂盒的开发.     

我国戊型肝炎全病毒抗原抗HEV·IgM酶联诊断盒的临床应用

我国戊型肝炎全病毒抗原抗ＨＥＶ·ＩｇＭ酶联诊断盒的临床应用廖绵初，干侣仙，黄如统，李晓萸，李德荣（厦门大学抗癌研究中心）（军事医学科学院五所）赵炳华（浙江医科大学第一附属医院）从１９８９年正式确立戊型肝炎ＨｅｐａｔｉｔｉｓＥ以来，许多国家都研制其诊断...     

用RT-PCR方法检测血液及尿液中肾综合征出血热病毒

目的应用逆转录聚合酶链反应方法(RT-PCR)对临床诊断或拟诊为肾综合征出血热(HFRS)的患者的血液及尿液标本进行检测.方法对临床拟诊断或拟诊HFRS患者198名(Ⅰ型为147例,Ⅱ型为51例)的血清、尿液标本进行RT-PCR方法抗体检测,并设置对照血清.结果紫外灯下,165例在237 bp处出现橙黄色带,阳性率为83.3%,对尿液进行检测,其结果均为阳性.标准病毒株、阳性对照血清为阳性.阴性对照、健康人血清、尿液标本均为阴性;免疫荧光抗体检测,血清抗体阳性173例,阳性率为87.2%.尿液阳性仅为116例,阳性率为58.4%.结论用RT-PCR方法检测HFRSV具有灵敏度高、特异性好、快速等优点,方法简便,适于临床应用.     

芋花叶病毒检测试剂盒的研制

用IPTG诱导融合表达芋花叶病毒(Dasheen mosaic virus,DMV)CP基因的菌株,通过12%SDS-PAGE和5%~20%梯度SDS-PAGE二次制备电泳获得纯化的CP免疫家兔,获得经过Western blot分析为特异的抗CP血清.硫酸铵沉淀初步提取IgG,然后用Protein A-Red Sepharose亲和层析进一步纯化IgG,IgG与甘油1∶1混合获得效价1∶3 100的一抗,将一抗、羊抗兔二抗和4-硝基苯基磷酸二钠组成DMV检测试剂盒.用研制的检测试剂盒对芋、魔芋和马蹄莲叶片样品的间接ELISA检测表明,DMV在田间普遍发生,并确定研制的试剂盒完全可用于DMV检测.     

Specific monoclonal IgM is a potent adjuvant in murine malaria vaccination

Recent experiments in the murine system have indicated that the passive acquisition by offspring of maternal anti-malarial IgG antibodies while conferring some degree of immunity against a primary infection, paradoxically prevents the generation of acquired immunity through vaccination. Therefore, in view of earlier findings concerning the competitive effects of specific IgM and IgG antibodies, we investigated whether specific monoclonal IgM antibodies could be used to potentiate the response to a blood-stage murine malaria vaccine. We now report that small amounts of purified monoclonal anti-parasite IgM can specifically potentiate both priming and memory cell generation in response to vaccination as evidenced by survival after infection, and that the magnitude of this effect is greater than that found with a more conventional nonspecific adjuvant (Bordetella pertussis). Additionally, in offspring of immune mothers, where vaccination is ineffective for up to 8 weeks due to the presence of maternal IgG, we have found that IgM when administered with the vaccine can completely overcome this inhibition by its adjuvant effect.     

两种不同示踪剂用于蛋白质与抗原分子微阵列信号检测的对比研究

以氧化型琼脂糖凝胶膜为基片，制作蛋白质与抗原分子微阵列，建立了检测固相人IgG,游离IgG和自身抗体分子的免疫学测定模式，分别以辣根过氧化物酶－二氨基联苯胺一双氧水（HRPDAB－H2O2）和胶体金－硝酸银－对苯二酚2种示踪系统作为蛋白质与抗原分子微阵列信号显示剂，并对其作用的原理与特点进行讨论，检测结果发现基于胶体金的免疫金银染色法（IGSS）比固相酶免疫测定法（EIA）敏感，2种示踪系统对固相人IgG的最低检出量分别为0．05ng和0．5ng；而对血清游离IgG的最低检出量IGSS法比EIA法至少高出10倍，两法用于自身抗体的测定亦表现出较好的重复性，在14例HCV感染者中，自身抗体的总体检出率分别为38．6％和31．4％，结果具有显著的同步性，故同时辅以2种示踪剂并用于阵列芯片的联合测试，有助于提高自身抗体的总体检出水平。     

IgM-autoantibodies against isologous erythrocytes also react with isologous IgG(Fc)

The mechanisms by which the adaptive immune system of animals discriminate between foreign and self components are not known. It is generally believed that antibodies are produced only in response to foreign agents. However, against this axiom there is mounting evidence that normal animals produce autoantibodies against a variety of self components. In two murine model systems, a high proportion of IgM-producing cells secrete autoantibodies. In one model, the autoantibodies are specific for isologous mouse IgG(Fc) and in the other, the autoantibodies are specific for antigens revealed on the surface of mouse erythrocytes (RBC) by proteolytic enzymes. The function of these two autoimmune responses is a mystery. Here we show that the two responses are related. The lysis of mouse RBC, modified with bromelain (brom) by IgM autoantibodies was completely inhibited by isologous IgG(Fc), and antibodies against mouse IgG(Fc) formed precipitin bands with solubilized membranes from mouse RBC. We conclude that mouse RBC membranes and IgG(Fc) have at least one antigenic determinant in common and that this determinant is the target for autoimmune responses in normal mice.     

辛酸沉淀-凝胶过滤法提取猪血清IgM

使用辛酸沉淀-凝胶过滤法提取猪血清中免疫球蛋白IgM,并通过其纯度鉴定等探讨提纯效果.通过辛酸沉淀法粗提免疫球蛋白,再结合Sephadex G200凝胶过滤法纯化获得IgM,利用SDS-PAGE电泳法和AlphaEaseFC凝胶成像分析软件测定其分子量和纯度、Bradford法测定提取蛋白浓度并计算其得率.结果显示辛酸粗提能够去除大部分杂蛋白,凝胶过滤获得两个洗脱峰,其中第一峰通过电泳鉴定含有IgM,纯度63.8%,得率1.28 mg/ml血清.利用辛酸沉淀-凝胶过滤法能够获取纯度和得率都较高的IgM,纯度可满足普通要求的实验和应用.     

肾综合征出血热研究现状

肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)是一类以发热、出血、肾功能损害等多种症状为表现的急性传染病.该疾病严重影响人类的正常生活和工作.文章就该疾病的病原学、流行病学、发病机制及病理改变、临床表现和治疗方面的研究现状进行综述,并结合我国实际情况提出可行性建议.     

5-羟色胺在F344大鼠下丘脑释放及其免疫调节作用

在F344雄性大鼠腹腔注射血蓝蛋白(KLH),研究T 细胞依赖抗原初始免疫反应对中枢神经系统5 羟色胺(5 HT)代谢的影响。当免疫刺激大鼠4天后,其下丘脑匀浆5 羟色胺水平出现降低,同时应用在体脑微透析技术研究发现清醒大鼠腹腔注射血蓝蛋白4天后,其下丘脑前叶细胞外液的5 羟色胺水平增加。为了评价在免疫反应中大鼠下丘脑5 羟色胺释放效应,本文应用氯苯丙胺(PCA)选择性预先耗竭5 羟色胺释放,并测定这些动物在注射血蓝蛋白后抗体产生情况。结果显示在应用氯苯丙胺预处理的血蓝蛋白免疫动物特异抗体IgM和IgG与未用氯苯丙胺预处理的动物比较均有明显增加(P<0.01)。上述资料表明,对于T 细胞依赖抗原,其初始抗体产生的量是由位于下丘脑5 羟色胺神经终端抑制性递质释放所调节。     

国产抗HIV－1试剂盒对献血员血清检测

国产抗ＨＩＶ－１试剂盒对献血员血清检测陈长荣，戴永强（厦门市中心血站）（厦门新创科技有限公司）艾滋病＋（ＡＩＤＳ）是一种正在全世界广泛传播的疾病，其病毒（ＨＩＶ）是一种单链ＲＮＡ逆转录病毒．ＨＩＶ感染后２个月左右在血清中可检测出抗ＨＩＶ阳性，从感染到...