TNFAIP1对肝癌细胞HepG2细胞增殖及凋亡的影响

为了深入探讨肝癌的发生机制并寻找肝癌的潜在治疗手段,研究了TNFAIP1基因对肝癌细胞HepG2的细胞增殖及细胞凋亡产生的影响.MTT实验发现过表达TNFAIP1基因或干扰TNFAIP1的表达可以显著地抑制或促进HepG2细胞的生长,这表明TNFAIP1基因对肝癌细胞的增殖具有抑制作用.而流式细胞技术则证实过表达TNFAIP1能显著地促进肝癌细胞HepG2的细胞凋亡.     

皂角刺总黄酮对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和侵袭能力影响的实验研究

目的:研究皂角刺总黄酮对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和侵袭的影响,探讨其抗肿瘤作用机制.方法:通过体外培养人肝癌HepG2细胞,用不同浓度的皂角刺总黄酮处理后,采用WST-1法检测皂角刺总黄酮对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用,琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化,流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测细胞的凋亡率,划痕实验和Transwell小室检测皂角刺总黄酮对HepG2细胞侵袭、转移的影响.结果:不同浓度的皂角刺总黄酮作用于细胞48 h后,能显著抑制HepG2细胞的增殖,随着药物浓度的增加,抑制作用增强,IC50为(190.62±0.89)mg/L;流式AnnexinV/PI双染法检测显示,不同浓度的皂角刺总黄酮均可诱导HepG2细胞凋亡;不同浓度的皂角刺总黄酮处理组发现凋亡细胞所特有的DNA ladder条带;皂角刺总黄酮可降低HepG2细胞的黏附能力,使Tr-answell小室膜上的肝癌细胞明显减少,并且呈剂量依赖性.结论:皂角刺总黄酮能明显抑制肝癌HepG2细胞的增殖、侵袭能力和诱导其凋亡.     

靶向CK1α基因shRNA表达载体的构建及其对A549细胞增殖的影响

通过RNA干扰实验沉默酪蛋白激酶1α(Casein Kinase 1,CK1α)基因,探讨其对肺癌细胞A549生长增殖的影响.首先构建3个针对CK1α基因不同位点的短发夹表达载体pGenesil-CK1α-S1、pGenesil-CK1α-S2、pGen-esil-CK1α-S3和一个无义错配载体pGenesil-NK,分别转染A549细胞,用G418筛选出阳性克隆,得到A549-S1、A549-S2、A549-S3及A549-NK细胞株.再通过RT-PCR和Western blotting方法,分别检测了CK1α基因的mRNA和蛋白的表达情况.比对A549-NK,A549-S1、A549-S2及A549-S3 mRNA水平的抑制率分别为84.3%、57.9%和61.8%(P<0.001);蛋白质水平的抑制率分别为78.4%、51.3%和59.9%(P<0.001).选择干扰效率较好的A549-S1细胞进行后续实验.细胞计数绘制生长曲线、CCK-8法观察细胞增殖状况和流式细胞仪检测细胞所处周期时相来分析转染CK1α基因shRNA表达载体对A549细胞生长增殖的影响.实验结果显示,A549-S1与A549和A549-NK两对照组的平均值比较,细胞计数抑制率为(37.7±2.2)%(P<0.01);CCK-8抑制率为(26.2±1.5)%(P<0.05);S期减少(75.0±4.0)%(P<0.01);G2/M期减少(45.2±5.4)%(P<0.05).因此,转染CK1α基因shRNA表达载体可导致CK1α基因的沉默,明显抑制A549细胞的生长和增殖.     

SLP-2基因在乳腺癌细胞系中的表达及对MCF-7细胞增殖的影响

人的SLP-2基因在乳腺癌组织的高表达与病人的存活率相关.为了研究SLP-2在乳腺癌中的功能,应用免疫印记的方法检测SLP-2在不同乳腺癌细胞中的蛋白表达水平,发现随着细胞癌化程度的增强其表达也增强.成功构建p CMV-Myc-SLP-2重组质粒,证明了其在MCF-7细胞的表达,MTT实验结果表明SiRNA转染乳腺癌细胞MCF-7可以抑制细胞增殖,同时发现SLP-2在乳腺癌细胞系中表达量与HER2/nue呈负相关.这些结果为深入研究乳腺癌的发生和发展奠定了基础.     

大蒜素对人食管癌EC-109细胞形态结构的影响

以人食管癌EC-109细胞为研究对象,探讨大蒜素对人食管癌EC-109细胞生长抑制及对形态结构的影响.采用台盼蓝拒染法测定人食管癌EC-109细胞生长抑制率,通过倒置显微镜、荧光显微镜观察不同质量分数的大蒜素作用于人食管癌EC-109细胞的形态变化.结果表明,大蒜素能抑制人食管癌EC-109细胞增殖,诱导EC-109细胞凋亡,在一定范围呈时间、剂量依赖性,作用48 h的IC50为(28±1.54)μg/mL.经大蒜素诱导后,人食管癌EC-109细胞形态结构出现典型的凋亡特征.     

大蒜素对人食管癌EC-109细胞形态结构的影响

以人食管癌EC-109细胞为研究对象,探讨大蒜素对人食管癌EC-109细胞生长抑制及对形态结构的影响.采用台盼蓝拒染法测定人食管癌EC-109细胞生长抑制率,通过倒置显微镜、荧光显微镜观察不同质量分数的大蒜素作用于人食管癌EC-109细胞的形态变化.结果表明,大蒜素能抑制人食管癌EC-109细胞增殖,诱导EC-109细胞凋亡,在一定范围呈时间、剂量依赖性,作用48 h的IC50为(28±1.54)μg/mL.经大蒜素诱导后,人食管癌EC-109细胞形态结构出现典型的凋亡特征.     

建立可诱导表达TNFAIP1的稳定细胞系

利用Tet-Off可诱导表达系统在HT1080细胞中建立可诱导表达TNFAIP1基因的稳定细胞系.首先将融合表达GFP的TNFAIP1片段克隆到反应质粒pTRE2hyg中,然后将该质粒转染到HT1080/Tet-off细胞中,使用潮霉素B筛选,挑取单克隆,得到稳定转染的细胞系,扩大培养后在荧光显微镜下观察克隆的诱导效率,得到了低背景,高效诱导表达GFP-TNFAIP1的稳定细胞系,便于研究TNFAIP1在细胞生长、细胞周期和细胞信号通路等方面的作用.     

苦瓜多糖对人食管癌EC-109细胞形态结构的影响

以人食管癌EC-109细胞为研究对象,探讨苦瓜多糖组分MCP2对人食管癌EC-109细胞生长的抑制,以及对其形态、结构的影响.采用台盼蓝拒染法测定人食管癌EC-109细胞生长抑制曲线,通过倒置显微镜观察不同质量分数的苦瓜多糖组分MCP2作用于人食管癌EC-109细胞导致的形态变化.结果表明,苦瓜多糖组分MCP2能抑制人食管癌EC-109细胞增殖,诱导人食管癌EC-109细胞凋亡,在一定范围内呈时间、剂量依赖性,作用48 h的IC50为(285.45±36.64)μg/m L.经苦瓜多糖组分MCP2诱导后,人食管癌EC-109细胞形态结构出现典型的凋亡特征.     

TNFAIP1基因通过抑制Bcl-2的表达诱导细胞凋亡

将TNFAIP1基因成功克隆到真核表达载体pCMV—Myc中,研究TNFAIP1基因诱导细胞凋亡的机制．Hochest33258和流式细胞计数实验发现,过表达TNFAIP1能够诱导HeLa细胞凋亡．通过对凋亡相关基因的研究,发现过表达TNFAIP1能够抑制Bcl-2的mRNA水平和蛋白表达,推测TNFAIP1基因可能通过抑制Bcl-2的表达诱导细胞凋亡．     

LRRC10基因促进肺癌细胞的凋亡

为证实心脏中存在一系列特异性表达基因,对细胞增殖发挥着禁锢作用,依据细胞的全能性,这些基因存在抑制癌细胞增殖的可能,将心脏特异性高表达基因LRRC10作为肺癌中的候选因子,首先利用COSMIC网站对LRRC10基因进行生物信息学、生物统计学分析,其次采用细胞流式分析LRRC10基因过表达A549后细胞的周期和凋亡情况.结果显示:LRRC10基因在多个肺癌病人中存有错义突变、拷贝数增加和表达上调的现象.A549细胞中过表达LRRC10基因后,基本不影响细胞周期,但表现出促进A549细胞凋亡的趋势.结果提示心脏特异性基因LRRC10的上调可能通过调节癌细胞凋亡参与肺癌的发生.这为心脏特异性基因在肺癌细胞凋亡中的作用提供了实验证据.     

miR-137通过靶向EGFR调控宫颈癌细胞增殖和凋亡的作用机制研究

为研究miR-137在宫颈癌细胞中的表达情况,检测其对细胞增殖和凋亡功能的影响并深入探讨其作用机制,采用实时荧光定量PCR检测正常宫颈永生化鳞状细胞及不同宫颈癌细胞中miR-137表达情况;向宫颈癌Ca-Ski细胞中转染miR-137模拟物(miR-137mimics)使其过表达,用CCK8试剂盒检测细胞增殖,用流式技术检测细胞凋亡;并通过软件预测、荧光素酶报告基因及免疫印迹实验验证miR-137靶基因的表达情况。结果发现,miR-137在宫颈癌细胞中表达降低,过表达miR-137能抑制Ca-Ski细胞增殖活力(P0.01)并提高细胞凋亡水平。深入研究其机制发现表皮生成因子受体(EGFR)为其直接作用靶点,过表达EGFR后可逆转miR-137对宫颈癌细胞生物学功能的影响(P0.01)。因此,miR-137可以通过靶向调控EGFR,从而抑制宫颈癌细胞增殖并促进细胞凋亡。     

TNFAIPl基因通过抑制Bcl-2的表达诱导细胞凋亡

将TNFAIPl基凼成功克隆到真核表达载体pCMV-Myc中,研究TNFAIPl基因诱导细胞凋亡的机制.Hoehest33258和流式细胞计数实验发现,过表达TNFAIPl能够诱导HeLa细胞凋亡.通过对凋亡相关基因的研究,发现过表达TNFAIPI能够抑制Bcl-2的mRNA水平和蛋白表达,推测TNFAIP1基因可能通过抑制Bcl-2的表达诱导细胞凋亡.     

ZNF425基因抑制急性T淋巴细胞白血病细胞的凋亡

为了解锌指(Zinc finger,ZNF)基因在癌症发生中的作用,利用生物信息学在CCLE数据库中分析得到ZNF425在白血病细胞系中存在高表达;在COSMIC和ICGC数据库中发现ZNF425在癌症患者的造血和淋巴组织中发生突变,并且表达存在差异。在急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞系瞬时过表达ZNF425,能抑制Jurkat细胞凋亡但Jurkat的细胞周期却不受影响,Western Blot检测发现过表达ZNF425导致ERK活化受到抑制。本研究结果首次揭示了ZNF425在血癌细胞中的功能,可能通过影响癌症细胞的凋亡调节癌症的发生。     

LL-37/hCAP-18基因克隆及其真核表达载体的构建

LL-37 hCAP-18是一种重要的多功能免疫分子.为探讨hCAP-18在基因治疗中的可行性,应用RT-PCR技术从人白血病细胞系J6-1细胞总RNA中成功扩增出560bp的hCAP-18基因编码区cDNA序列,构建了hCAP-18重组表达质粒phCAP-18.采用脂质体法将质粒phCAP-18瞬时转染COS-7细胞,Westernblot证实,hCAP-18能在COS-7细胞中表达.     

HIV-1型Nef基因重组表达载体的构建及其稳定表达细胞系的建立

为了构建艾滋病毒HIV-1型Nef基因重组表达载体,利用PCR从p NL4-3质粒上扩增HIV-1型Nef基因,获得Nef基因完整的编码区,构建可表达Nef蛋白的p EB-myc-nef重组表达载体.经鉴定正确后,利用LipofectamineTM2000将重组质粒转染SW480细胞,通过Western Blot技术检测Nef蛋白的瞬时表达.为了建立稳定表达Nef基因的SW480细胞系,采用G418筛选建立稳定表达细胞系的方法,筛选出单克隆细胞系.扩大培养克隆细胞后,通过RT-PCR和Western Blot分别检测Nef的mRNA转录水平及蛋白表达水平,经长达60 d的传代,最终获得稳定表达Nef基因的SW480细胞系,为研究RNAi在艾滋病治疗方面的应用提供了细胞模型.     

黄芪甲苷对非小细胞肺癌A549细胞增殖及凋亡相关蛋白表达的影响

观察不同剂量的黄芪甲苷(As-Ⅳ)在体外对非小细胞肺癌(A549)细胞的生长、凋亡等方面的影响,探讨黄芪甲苷抑制A549细胞增殖、促进凋亡的可能分子机制。实验结果表明,As-Ⅳ作用24 h后,肺癌细胞A549的增殖明显受到抑制,具有剂量依赖性。A549细胞中的E-cadherin蛋白表达呈药物浓度依赖性上调,Vimentin蛋白表达下调。经As-Ⅳ作用24 h后的A549细胞,其胞质蛋白Bax/Bcl2表达水平高于对照组,同时As-Ⅳ也促使Caspase-3裂解为cleaved Caspase-3。黄芪甲苷在体外能抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移并诱导其凋亡,其机制可能是通过抑制NEDD4/PTEN通路而激活并促进Bax表达的实现。该发现为临床上治疗非小细胞肺癌提供了有意义的实验依据。     

RAGE敲除对AGEs-RAGE轴诱导血管平滑肌细胞线粒体动力学变化的影响机制研究

探讨晚期糖基化终产物受体(RAGE)表达对血管平滑肌细胞线粒体动力学变化的影响机制。细胞水平以小鼠RAGE基因mRNA序列作为干扰靶点,设计3组靶向RAGE的shRNA,转染离体培养的小鼠主动脉血管平滑肌细胞,并通过PCR和Western blot方法验证转染是否成功;采用CML-BSA分别干预正常血管平滑肌细胞(VSMCs)和转染的VSMCs,采用细胞免疫荧光检测血管平滑肌细胞线粒体动力相关蛋白(DRP1)分布和表达情况;Western blot分析VSMCs的双联RNA依赖蛋白激酶(PKR)、线粒体动力相关蛋白(DRP1)、线粒体融合蛋白(Mfn2)以及相关通路JAK2/STAT3磷酸化蛋白表达水平。动物水平上,通过高脂饲喂和腹腔STZ注射建立2型糖尿病模型;后经尾静脉注射RAGE基因敲降(RAGE^-/-)质粒,采用Western blot法测定RAGE基因敲除对糖尿病小鼠主动脉PKR、JAK2、STAT3磷酸化水平以及对线粒体动力学相关蛋白表达水平的影响;采用HE和油红O病理学染色观察敲降RAGE基因后AGEs-RAGE轴诱导糖尿病小鼠血管壁的厚度变化。细胞...     

跨界基因沉默菌株的快速构建及对靶标基因干扰能力的检测

"跨界基因沉默"是一种利用大肠杆菌在哺乳动物细胞中传递小干扰RNA并引起基因沉默的新颖技术,具有实用、稳定和低成本等优点.该技术通过构建一种能转录出短发夹RNA(shRNA)的大肠杆菌,而这种大肠杆菌产生的shRNA能靶向哺乳动物细胞中的特定基因,从而引发RNA干扰(RNAi).本文用RecA同源重组的方法将跨界基因沉默质粒的工作元件快速地整合到大肠杆菌的染色体DNA上,构建了跨界基因沉默菌株.通过吖啶橙染色实验证明了跨界基因沉默菌株能够入侵哺乳动物细胞,最后Western blot结果表明跨界基因沉默菌株可以对靶标基因产生干扰作用.该技术的完善将进一步促进工程菌的研发和利用.     

功能化石墨烯载hTERTsiRNA的制备及其对宫颈癌Hela细胞的影响

以氧化石墨烯(GrapheneOxide,GO)为基质,制备了氧化石墨烯-聚乙二醇-叶酸(GO-PEG-FA)纳米载体,借助于通过π-π相互作用负载在GO表面的胺甲基芘盐酸盐(PyNH2),介导人端粒酶反转录酶siRNA(hTERTsiRNA)转染入宫颈癌Hela细胞.GO-PEG-FA-PyNH2-hTERTsiRNA纳米基因复合物被成功制备,并通过红外光谱和紫外光谱进行表征.荧光显微镜观察该纳米载体的转染效率明显优于裸siRNA组,Western blot实验检测Hela细胞hTERT蛋白表达显著降低,MTT实验观察该载体对细胞无毒,其共载hTERTsiRNA和抗肿瘤药阿霉素后对Hela细胞生长的抑制具有协同作用.因而该功能化氧化石墨烯可以作为靶向基因载体,有效传递siRNA及化疗药物进入肿瘤细胞发挥作用.     

FHL2基因异位表达对肺癌细胞的影响

依据细胞的全能性,心肌细胞中的高表达基因可能对细胞增殖具有一定的抑制作用。FHL2作为心脏高表达的基因,为证实其对癌细胞增殖具有一定的抑制作用,通过COSMIC网站对FHL2基因进行生物信息学、统计学分析,发现其与肺癌的发生有一定的相关性;采用流式细胞术检测过表达FHL2基因的A549细胞的表型,并进一步通过蛋白免疫印迹检测相关的周期蛋白调控因子,结果表明,在A549细胞中过表达FHL2基因会使细胞周期阻滞,伴随着G_1/S检验点的相关蛋白因子的表达变化。因此,心脏高表达基因FHL2可能是通过调节细胞周期蛋白阻碍A549细胞的增殖,从而达到对肺癌的发生发展的阻碍作用。