甘薯糖蛋白的分离、纯化和结构分析

采用二乙基氨基乙基52和葡聚糖凝胶G100柱层析法,从甘薯中分离纯化甘薯糖蛋白,并对其进行结构分析．用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检验纯度和分子质量;根据β-消除反应判断糖肽键的连接方式;利用气相色谱法分析单糖组成;通过红外光谱推断糖苷键类型．研究结果表明,甘薯糖蛋白是以共价键连接而成的结合蛋白,呈白色粉末状,易溶于水,分子质量约为62ku,属O-连接方式,含有β-糖苷键和典型酰胺羰基结构,蛋白质含量为12．01％,糖链部分含有岩藻糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖．     

巴戟天多糖的分级纯化及结构分析

对巴戟天多糖的柱层析分级纯化和一级结构进行了研究．采取热水浸提、乙醇沉淀的工艺获得巴戟天粗多糖MOHP,经离子交换和凝胶柱层析得到了MOHP-I,MOHP-Ⅱ,MOHP－Ⅲ和MOHP－Ⅳ4　个组分,通过红外光谱、液相和气相色谱等分析手段对分级后的MOHP－Ⅰ和MOHP-Ⅲ进行了初步的结构分析．结果表明：MOHP—Ⅰ的单糖组成为葡萄糖和果糖,分子质量约为2ku,呋喃糖环结构;MOHP-Ⅲ是一种均一的糖蛋白物质,其组成单糖为阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、果糖以及半乳糖,分子质量约为35ku;高效凝胶渗透色谱显示两组分均达到了较高的纯度．     

甘薯多糖SPP-Ⅰ的制备与结构初步研究

研究采用水提醇沉法提取甘薯粗多糖,进行单因素试验考察,用正交法优化工艺.再经DEAE-纤维素-52阴离子交换柱和Sephadex G200凝胶柱对所得粗多糖进行层析纯化,得到甘薯多糖组分SPP-Ⅰ.应用苯酚硫酸法测定多糖百分含量,HPLC法测定多糖分子质量,紫外光谱、红外光谱、甲基化衍生结合GC-MS分析多糖结构.结果表明甘薯多糖最优提取工艺为提取温度90℃,提取时间3 h,液料比40∶1,提取次数3次.甘薯多糖SPP-Ⅰ总糖百分含量分别为97. 61%,分子质量为245ku,紫外光谱扫描结果显示无核酸和蛋白质吸收峰,红外光谱扫描结果表明含有多糖类物质的特征吸收峰,结合甲基化和GC-MS分析初步确定甘薯多糖SPP-Ⅰ是具有1→3、1→3→6糖苷键结构的α-葡聚糖.     

光肩星天牛产卵分泌物的化学成分分析

通过室内饲养产卵期光肩星天牛成虫并采集其产卵分泌物,对光肩星天牛产卵分泌物进行组分分析。利用烘干法、Bradford法、蒽酮比色法、茚三酮试剂显色法、SDS-PAGE对其组分中水、蛋白质、可溶性糖、游离氨基酸的含量及蛋白质组分进行了测定。结果表明:光肩星天牛产卵分泌物组分中含水量为81.98%,蛋白质含量为4.14%,可溶性糖及游离氨基酸的含量依次为0.51%和0.06%(均为质量分数),蛋白质组分中主要蛋白的分子质量为107.1、86.7、62.2、47.5、39.0 ku,其中107.1～86.7 ku与47.5 ku为强谱带区。     

黑曲霉糖化酶启动子区CCAAT框与反式作用因子AngCP结合的分析

依次通过20%～40%饱和硫酸铵、凝胶过滤、肝素柱层析及DNA亲和层析纯化了黑曲霉糖化酶启动子区CCAAT框DC(-489 bp～-414 bp)结合蛋白(AngCP1)及CCAAT框PC(-390 bp～-345 bp)结合蛋白(AngCP2).凝胶过滤分析和SDS-PAGE结果表明AngCP1和AngCP2的分子质量均约为120 ku,由分子质量为34 ku和50 ku的亚基组成.Western blot显示两者的34 ku亚基均能特异性地与鼠抗AngHapC抗体产生反应,进一步的电泳迁移率实验证实AngCP1和AngCP2为同一蛋白质,称为AngCP.Southwestern blot显示34 ku亚基结合于DC,而50 ku亚基结合于PC,并且34ku亚基与DC的结合能力强于50 ku亚基与PC的结合.上述AngCP具有与DC,PC不等结合强度的特点暗示三者在糖化酶表达调控中有着重要作用.     

鲤鱼胶原蛋白的过敏原性研究

以鲤鱼鱼皮为研究对象,通过碱溶、酸溶、NaCl盐析等方法从鱼皮中分离纯化得到了胶原蛋白.SDS-PAGE分析显示,鲤鱼胶原蛋白由分子质量约为120 ku和115 ku的2条α链（α1与α2）、分子质量约为250 ku的β链以及大分子质量的γ链组成.分析比较鲤鱼胶原蛋白与鲢鱼小清蛋白的基本性质,结果显示：2种蛋白质的pH...     

海地瓜多糖和多肽提取纯化工艺及抗氧化活性

以低值海地瓜(Acaudina molpadioides)体壁干品为实验原料,优化酶解超滤工艺条件,联合制备出不同分子质量段的海地瓜多糖和多肽,优化确定柱层析法分离纯化海地瓜多糖的工艺参数,对比探究不同分子质量段海地瓜多糖和多肽的体外抗氧化活性。结果表明:先用胰蛋白酶在料液比(m/V)1∶40、加酶量2.4%(质量分数)、p H值7.5、45℃下酶解8 h,然后超滤分离得到分子质量小于10 ku的海地瓜多肽,提取率达到(29.602±1.012)%;再用中性蛋白酶和木瓜蛋白酶复合使用对超滤截留液和一次酶解沉淀进行二次酶解提取多糖,先加入质量分数7%的中性蛋白酶,45℃下酶解4 h;再加入质量分数8%的木瓜蛋白酶,60℃下酶解4 h,p H值均为7.0,粗多糖提取率达到(14.511±0.162)%。确定最佳超滤条件为:操作压力0.20 MPa,料液质量分数6%,操作温度35℃。得到海地瓜多肽P_1(5~10 ku,48.47%)、P_2(1~5 ku,18.46%)和P_3(1 ku,33.07%);得到海地瓜粗多糖G_1(10 ku,63.09%)、G_2(10~100 ku,7.24%)、G_3(100~200 ku,4.67%)和G_4(200 ku,25.00%)。采用Q-Sepharose-Fast-Flow阴离子交换柱层析法对G_4进行纯化,在0,0.5,1.5 mol/L洗脱盐浓度下,得到3个纯化多糖组分G_(4-1)、G_(4-2)和G_(4-3)。体外抗氧化活性检测结果显示,不同分子质量段海地瓜多肽对·OH的清除能力强弱顺序为:P_3P_2P_1,对DPPH·和O_2~-·的清除能力强弱顺序均为:P_2P_3P_1。不同海地瓜粗多糖对·OH、DPPH·和O_2~-·的清除能力强弱顺序依次为:G_4G_1G_3G_2,G_4G_3G_1G_2,G_1G_4G_2G_3;纯化多糖对·OH的清除能力强弱顺序为:G_(4-1)G_(4-2)G_(4-3),对DPPH·和O_2~-·的清除能力强弱顺序均为:G_(4-2)G_(4-1)G_(4-3)。     

党参多糖的研究 Ⅰ党参多糖组分的分离纯化及其部分性质

中药党参的水提液经乙醇沉淀,酶法处理后,经Sevag法脱蛋白,对蒸馏水充分透析,经DEAE-SephadexA-50柱层析,得FP-l和FP-2两个多糖组分,二者产率比为l:3。FP-l和FP-2经醋酸纤维薄膜电泳,纸电泳,玻璃纤维纸高压电泳和凝胶柱层析都证明是一均一组分,经凝胶过滤法测得FP-l和FP-2的分子量分别为50万和2万左右。 FP-l和FP-2的旋光性均为正值,比旋度分别为210°和20.5°用Discher法测试表明,二者均含有糖醛酸。经纸层析,薄板单向层析,双向层析分析,FP-l含鼠李糖,甘露糖、半乳糖和葡萄糖醛酸。FP-2含木糖、半乳糖醛酸和一未知糖。红外光谱,H-核磁共振测定结果表明,FP-1糖苷健构型为β-型,FP-2为α-型。 FP-1和FP-2经高碘酸氧化及Smith降解,表明FP-l以1→3连接键存在,而FP-2除了以l→3为主要连接方式,尚有少量的l→6和1→4键连接的分枝链。     

沙田柚花柱S-糖蛋白的纯化和N-端序列测定

以人工自花授粉3d后的沙田柚（Citrus grandis var.Shatinyu Hort.）花柱为材料,切取1/2部位处花柱组织,匀浆后,进行抽提和硫酸铵盐析,得到35%级分的蛋白质粗提液,此液经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,显示出9条蛋白质带;经ConA-Sepharose4B亲和柱层析,特异峰（S^#）仅显示1条蛋白质带,恰好是35%级分中近正极端的2种蛋白质中的一种最优势蛋白质;部分生化性质测定结果表明,该蛋白质为碱性糖蛋白,糖含量为9.2%,由2个亚基组成,相对分子质量分别为38.0ku,32.0ku,等电点分别约为7.5,7.2;生物活性测定结果表明,该蛋白质能抑制离体（in vitro)萌发自花花粉花管的生长;氨其酸序列分析表明,32.0ku组分N-端15个氨基酸序列与矮牵牛,花烟草等的N-端相应序列极相似。     

人参果胶SB2-1的结构研究

从我国名贵中药人参的根中分离纯化出人参果胶SB2-1,经高压液相色谱分析证明SB2-1为均一组分,相对分子质量约为7 000.气相色谱分析表明其单糖组成为GalA和Gal,物质的量比为3.43∶1.00.采用部分酸水解、果胶酶解、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化分析和NMR分析等方法分析了SB2-1的结构,结果表明:SB2-1为少分枝结构,α(1→4)GalA构成主链的核心结构,(1→4)Gal位于主链的边缘,(1→4)GalA和(1→4)Gal在6-O处有分支,平均每20个己糖残基有1个分支,支链部分由(1→6)Gal和(1→3,6)Gal构成,末端残基为(1→)Gal,SB2-1中的主要糖苷键类型为α型.     

短裙竹荪菌丝体糖蛋白DdGP-3P3纯化及性质研究

短裙竹荪菌丝体经热水抽提，乙醇分级沉淀，级分3经DEAE－Cellulose柱层析纯化得到短裙竹荪菌丝体糖蛋白DdGP-3P3。经测定该糖蛋白为均一组分，相对分子质量为113KDa，红外光谱呈现出典型的多糖吸收峰，含有β－型糖苷连接键。β－消去反应测定，该糖蛋白中糖和蛋白质的连续键为O－型糖肽键。纸层析和气相层析分析得知DdGP-3P3含有D－葡萄糖（D－glucose)、D-甘露糖（D－Mannose)和D－半乳糖（D－galactose)，其摩尔比为2．01：1．00：1．23。氨基酸分析表明它含有16种氨基酸。     

羊栖菜多糖分离纯化和结构的初步鉴定

将提取的羊栖菜多糖用sevage法除蛋白、H2O2脱色后得到羊栖菜多糖半纯品,依次通过DE-AE-52、Sephadex G-200柱层析分离纯化后得到SFPS-B2、SFPS-C1、SFPS-D2三个多糖组分,用Sephacryl S200-HR柱层析鉴定纯度,三种组分的多糖为均一多糖,质量分数分别为86.02%、81.05%、86.95%.对SFPS-D2进行结构初步研究,通过紫外光谱、红外光谱和毛细管电泳分析,结果表明SFPS-D2不含蛋白质和核酸,多糖组成以β构型的吡喃糖苷键为主,含有硫酸基-O-SO3,其单糖组成以木糖、葡萄糖和半乳糖为主,其比例为木糖∶葡萄糖∶半乳糖=3.45∶5.8∶1.     

中华鳖tyrp-1基因的生物信息学分析

为阐明中华鳖酪氨酸酶相关蛋白1(TYRP-1)基因tyrp-1及蛋白质结构与性质,利用相关软件、数据库和方法对其进行了生物信息学分析.结果显示,基因转录本全长为2 829bp,编码535个aa.预测TYRP-1蛋白分子质量为60.16ku,理论等电点为5.35,为不稳定蛋白;N端含有信号肽,与信号识别蛋白结合后,促进其穿越内质网膜进入内质网腔;C端含有跨膜结构域,锚定于细胞膜上,发挥重要的生物学功能;TYRP-1蛋白含有2个铜离子结合结构域,与DCT蛋白有明显的相互作用.     

茯苓液体培养法中羧甲基茯苓多糖(CMP)的提取、纯化及鉴定

对茯苓菌株HD06-10 进行液体发酵培养,采用醇沉法从其发酵液中提取羧甲基茯苓多糖(CMP).用DEAE-32 纤维素和SephadesG-200 对 CMP 进行柱层析分离提纯,得到主要组分PG.通过紫外光谱和红外光谱对组分PG进行纯度鉴定,结果表明:PG为多糖纯品,未检测出核酸、蛋白质等杂质,仅由羧甲基葡萄糖组成. PG 是β构型的葡聚糖,糖环为吡喃型,糖苷键的连接方式为β (1→3)及β (1→6),分子量大约为4.2×104Da.     

白玉菇多糖理化性质及免疫活性研究

文章采用常温水提和热水浸提法从白玉菇子实体中提取常温水提多糖(WHN)和沸水浸提多糖(WHB),通过DEAE-Cellulose离子交换层析柱进行分离纯化获得6种分级组分WHN1、WHN2、WHN3、WHB1、WHB2、WHB3。理化性质结果表明：WHN和WHB的总糖质量分数为67.72%和80.54%,分级组分总糖质量分数为93.48%～98.77%,含有少量蛋白质和糖醛酸;多糖组分的单糖摩尔分数各不相同,WHN、WHN1、WHN2、WHN3是以半乳糖和葡萄糖为主的杂多糖,WHB、WHB1、WHB2、WHB3组分中葡萄糖占比均最大,WHB3为葡聚糖。采用药理学模型考察多糖对鼠巨噬细胞增殖活性、吞噬活性以及NO释放量的影响,结果表明,多糖WHN1和WHB3在体外细胞实验中表现出较好的免疫调节活性。研究结果为白玉菇多糖在药物和功能性食品中的应用提供理论基础。     

鲭鱼罐头蒸煮液蛋白酶解产物的生物活性分析

以鲭鱼罐头蒸煮液为原料,采用生物酶解方法制备活性肽,以实现鱼罐头加工废弃液的高值化利用.研究结果表明,采用复合酶(碱性蛋白酶和胰蛋白酶)分段酶解,得到相对分子质量MW1 ku的组分占50%,高于碱性蛋白酶(30%)和胰蛋白酶(28%)单酶水解效果.进一步采用超滤方法分离酶解产物,得到不同相对分子质量范围的3个组分,其中MW1 ku的P1组分的抗氧化活性和ACE抑制效果最好.     

真菌多糖的研究——1、亚香棒虫草水溶性多糖的分离和部分性质

本文报道安徽产亚香棒虫草Cordyceps hawesii Gray)水溶性多糖分离、纯化及单糖组成和部分性质。DEAE—纤维素分级洗脱和Sepharose6B柱层析、得到两个级份精糖Ch—1和Ch—2、凝胶过滤和醋酸纤维薄膜电泳测定,证明有良好的均一性。纸层析和硅胶薄板层析,表明他们均由甘露糖和半乳糖组成。红外光谱分析和高碘酸氧化反应表明,这两种精糖可能是以(1→4)键为主链,含有(1←3)和(1→2)键,带有(1→6)键分枝的β—半乳甘露聚糖。     

黄山花菇免疫活性多糖FMP1的化学结构研究

文章从黄山花菇子实体中提取分离出均一多糖组分FMP1,采用化学和光谱学等方法对其化学结构进行表征。结果表明,FMP1分子量为9.21×10⁶ Da,由甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成,三者摩尔比为1.00∶1.02∶9.33;结构分析显示,(1→4)-β-D-Glcp和(1→4)-α-D-Manp为FMP1的主链,(1→4)-β-D-Glcp的O-2和O-3位以及(1→4)-α-D-Manp的O-3位有分支,(1→3)-β-D-Glcp、(1→6)-β-D-Glcp、T-α-D-Glcp和T-β-D-Galp组成支链;免疫活性实验表明,FMP1能促进巨噬细胞的免疫活性,支链和分子量对FMP1的活性有显著影响。研究结果可为黄山花菇多糖的深入研究及开发利用提供有价值的数据。     

小白芸豆凝集素的分离纯化及性质研究

从小白芸豆中分离纯化出一种新的凝集素,对其部分理化性质和生物活性进行研究.小白芸豆经过去皮粉碎、浸提、硫酸铵分段盐析、SP Sepharose阳离子交换、Q Sepharose阴离子交换和Superdex 200凝胶过滤层析后可得到小白芸豆凝集素(Phaseolus vulgaris var.albuslectin,PVAL)纯品.测定了PVAL的表观分子质量、亚基分子质量、糖含量、等电点、氨基酸组成、酸碱稳定性以及抗癌性.PVAL的表观分子质量为136 ku,是由2种分子质量分别为36.2 ku和32.2 ku的亚基组成的四聚体,糖含量为4.93%,等电点分布在pH5.3~6.0之间.PVAL分子无半胱氨酸,也无二硫键,疏水性氨基酸质量分数约为37%.PVAL对酸碱的耐受性比较好,并且对肿瘤细胞MDA-MB-435S有较好的抗性.