一氧化氮调节癌细胞中钙离子动力学

一氧化氮(NO)既能促进又能抑制癌细胞的增殖与转移,但是NO在癌细胞增殖与转移过程中所起作用的分子机理尚未明确.采用微孔板荧光检测技术观察NO对癌细胞钙离子浓度的调节作用,实验结果显示,外源性NO能使细胞内钙离子荧光强度显著增强,且增强程度与NO质量分数呈正相关;此外,NO引起的细胞内钙离子浓度增大主要是源于细胞内钙库的钙释放.研究结果有助于在细胞分子层面认识NO在癌细胞增殖与转移中的作用机制.     

活性氧与NO在SO2诱导蚕豆气孔运动中的作用

以蚕豆叶表皮为材料,研究SO2胁迫时叶面气孔运动及其调节途径.研究发现,用浓度1～200μmol/L的SO2衍生物(亚硫酸钠与亚硫酸氢钠混合液)处理蚕豆叶下表皮后,气孔开度明显减小,气孔保卫细胞内活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)和钙离子(Ca2+)水平显著升高.采用抗氧化剂抗坏血酸和过氧化氢酶,钙离子干扰剂EGTA和LaCl3,以及NO合成抑制剂NaN3与NO清除剂c-PTIO,分别与SO2衍生物同时作用时,SO2诱发的气孔关闭效应得到有效缓解,保卫细胞内ROS、NO和Ca2+水平随之改变.抗氧化剂和NO干扰剂能阻止SO2诱导的胞内ROS、NO和Ca2+水平升高;EGTA和LaCl3能降低SO2诱导的胞内NO和Ca2+升高,但不影响ROS水平.研究结果表明,较高浓度SO2能诱导气孔关闭,SO2胁迫诱导ROS和NO合成增加,ROS和NO通过钙信号系统调节气孔开度.     

尼古丁诱导人脐带间充质干细胞凋亡的机制

目的:探讨尼古丁作用人脐带间充质干细胞(MSCs)前后,一氧化氮(NO)、细胞内钙离子(Ca2+)的变化及α7 nAchR的表达情况.方法:采用硝酸还原酶法检测不同质量浓度尼古丁作用于MSCs后24、36、48h,MSCs内NO的释放情况;尼古丁作用MSCs 24 h,fluo - 3/AM染色,流式细胞仪检测MSCs内Ca2+变化;用RT - qPCR检测尼古丁作用后α7 nAchR的表达情况.结果:尼古丁作用MSCs 24、36 h后,各实验组NO水平显著高于对照组(P＜0.05),呈时间、质量浓度依赖性,但在48 h,质量浓度0.8与1.0 mg/mL组,NO水平低于对照组.尼古丁作用后,各实验组质量浓度(0.6、0.8、1.0 mg/mL)的Ca2+荧光强度分别为( 141.26±16.01)、(164.90±18.39)、(198.76±17.63),均高于对照组(119.30±14.14),其中质量浓度0.8、1.0 mg/mL组与对照组相比有显著差异(P＜0.05).MSCs可表达α7 nAchR,且尼古丁作用后表达水平增高,呈时间浓度依赖性.结论:尼古丁可上调人脐带MSCs的α7nAchR表达,并通过刺激MSCs释放NO、升高细胞内Ca2+从而致MSCs凋亡.     

一种高选择性苯硫酚荧光探针的研制

设计并合成了一种二硝基苯磺酰基键联2-胺基香豆素的荧光探针分子1,用于水相和活细胞内苯硫酚的检测.探针分子1自身无荧光,加入苯硫酚后,其溶液荧光显著增强,发出黄绿色的强荧光.当加入与探针分子等当量的苯硫酚时,溶液的荧光强度增强了47倍.探针分子1对0~10.00μmol·L~(-1)浓度的苯硫酚呈良好线性响应关系(R2=0.989 9),检测下限为0.46μmol·L~(-1).探针分子1对苯硫酚有较高的选择性和较好的灵敏度.此外,探针分子1成功用于Hep G2细胞内苯硫酚的可视化荧光成像检测.     

稀土对红豆杉细胞内游离钙含量的影响

采用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ双波长荧光分光光度计测定了稀土不同作用时间和不同剂量,以及红豆杉细胞不同生长时期和在钙通道阻断剂存在的情况下,红豆杉细胞内游离钙离子浓度的变化,实验结果表明,稀土对红豆杉细胞内钙离子浓度的影响随作用时间和剂理的不同而改变,细胞不同的生长时期对稀土的敏感程度不同,引外发现稀土引起细胞内钙离子浓度的振荡是由于胞内钙库释放和胞外钙内流所致。     

中药柴胡提取物对人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度的影响

目的测定中药柴胡(Bupleurun Chinese DC, BCDC)提取物对人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度([Ca2 ]i)的影响,以探索柴胡逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制.方法以Fura-2/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,用双波长荧光分光光度计分别测定不同条件下的BEL-7402细胞内[Ca2 ]i.结果柴胡可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度下降(P<0.001).结论柴胡可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度下降,为一种钙离子通道阻滞剂(Calcium channel blocker, CCB),提示钙离子通道阻滞作用为柴胡逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制之一.     

一种近红外H2S荧光探针的研制

研制了一种7-硝基-2,1,3-苯并噁二唑-4-醚键联半花菁的近红外区荧光探针分子1,并将其应用于活细胞内内源性和外源性硫化氢的检测.探针分子1由于7-硝基-2,1,3-苯并噁二唑的淬灭作用,自身无荧光;当加入H_2S时,由于H_2S对探针分子1中醚键的选择性硫解作用,醚键断裂,释放出半花菁荧光基团,波长725 nm处荧光强度显著增强;当加入10倍当量的硫氢化钠时,荧光强度增强了8.5倍.探针分子1对水溶液中H_2S浓度的线性浓度响应范围是0.1～100.0μmol·L~(-1)(R~2=0.995 2),检测下限为0.03μmol·L~(-1).探针分子1的激发和发射波长均在近红外区,对H_2S比较敏感,反应时间相对较短,且有较好的选择性.此外,探针分子1被成功用于活细胞内内源性和外源性H_2S的检测.     

生长抑素对胰岛素分泌的调控机制研究

生长抑素(Somatostatins,SST)对胰腺β细胞胰岛素的分泌有重要的调节作用,这一调节作用与细胞内钙离子浓度变化相偶联.以大鼠胰腺β细胞为研究对象,采用显微荧光测钙技术和膜片钳技术,研究了胞外SST对胞内钙离子信号的影响,初步探讨了其作用机制.结果表明:在细胞外液有钙时,胞外SST可减少由去极化产生的胞外钙离子内流;而在细胞外液无钙时,胞外SST通过动员胞内钙库释放而引起胞浆内钙离子浓度显著增高,并触发胰岛素的分泌.     

腺苷诱导神经细胞Ca~(2+)响应的微孔板荧光检测

以钙离子荧光指示剂Fluo-3-AM作为神经细胞内Ca2+荧光探针,用微孔板荧光检测仪测量神经细胞内游离Ca2+与荧光探针Fluo-3-AM结合的荧光强度,并实时检测此荧光强度在细胞外加不同浓度腺苷诱导下的变化情况。实验发现,各种浓度的腺苷都能诱导神经细胞Ca2+浓度升高,且其影响程度随腺苷浓度的增大而增强。这一结果对探究腺苷通过作用神经系统起止痛作用的机理具有重要意义。     

甜菜碱通过钙通道升高鼠脾淋巴细胞内[Ca^2＋]i研究

研究甜菜碱对小鼠脾淋巴细胞内钙离子浓度的变化及相关钙通道的研究．应用激光共聚焦显微镜（LSCM）测小鼠脾淋巴细胞内钙浓度的变化，应用不同钙通道阻滞剂研究甜菜碱影响细胞内钙浓度变化途径．对终浓度4mmol／L甜菜碱作用淋巴细胞不同时间的细胞内钙离子浓度值分析表明：甜菜碱可以使淋巴细胞内Ca^2＋浓度升高，6h后效果最明显；对加入不同阻滞剂细胞内钙离子浓度变化分析表明：钙通道及蛋白阻滞剂硝苯地平、地尔硫卓、咪贝地尔、金雀异黄素对甜菜碱升高淋巴细胞内钙离子浓度没有影响；维拉帕米、新霉素、肝素、普鲁卡因能阻断甜菜碱对淋巴细胞内钙离子浓度的升高作用．由此可知：细胞内钙离子浓度升高主要通过以下途径：在G蛋白介导下通过影响L-型电压门控钙通道的仅。亚单位而引起外钙内流；通过影响胞内钙库的ILR钙通道和RyR钙通道而引起内钙外排．其共同引起胞质钙离子浓度增加．     

雌激素对缺氧/复氧心肌钙离子的影响

雌激素对心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用,但其保护机制尚未完全阐明.缺氧/复氧可引起心肌细胞损伤,其中发生钙超载是心肌损伤的一个重要因素.进行了雌激素对缺氧/复氧心肌细胞内钙离子浓度的影响研究.结果显示:心肌细胞缺氧/复氧后细胞内钙离子浓度明显升高,呈复氧时间依赖性增加.雌激素有抑制缺氧/复氧心肌细胞内钙离子浓度升高...     

GSNO对人鼻咽癌细胞增殖的影响

采取GSH和NaNO2(1∶1)在酸性避光条件下反应的方法合成GSNO,用已构建的人鼻咽癌细胞(CNE-2)为模型,研究GSNO对CNE-2细胞增殖的影响.结果表明:NO能明显抑制CNE-2细胞增殖,200μmol/L GSNO作用CNE-2细胞,12h抑制率为19.1%,24h抑制率为30.4%.在一定浓度范围内,GSNO抑制CNE-2细胞的生长增殖效果与作用时间和浓度相关.     

一种新型高选择性次氯酸荧光探针的研制及其应用

以7-二乙胺基香豆素-3-羧酸为荧光母体,通过酰胺化反应键联强淬灭基团二硝基苯肼,得到荧光探针分子1(化合物1),用于水相中次氯酸的检测及活细胞内次氯酸的荧光成像可视化检测.研究结果表明:荧光探针分子1由于二硝基苯肼的强淬灭荧光作用和酰肼中N—N单键的旋转作用共同导致了其荧光背景非常弱;当加入次氯酸时荧光显著增强,同时溶液从无荧光变为蓝色强荧光.当加入100μmol·L~(-1)的次氯酸时,在463 nm处荧光强度增强了134倍.荧光探针分子1对次氯酸响应线性范围为0.1~40.0μmol·L~(-1),检测下限为0.052μmol·L~(-1).荧光探针分子1对次氯酸表现出特异性识别且响应速度快.最后,荧光探针分子1被成功用于活细胞内HOCl的可视化检测.     

静息状态下人源STIM1分子的表达纯化及结构初探

Stormal interaction moleculer1 (STIM1) 分子作为内质网膜上的钙离子浓度感受器,是CRAC通道的重要组成部分,对于维持细胞内钙离子的稳态发挥重要的作用.本文利用活细胞共聚焦显微成像技术筛选鉴定出静息态 STIM1分子突变体,诱导其在真核系统中表达纯化,并利用负染电镜技术,对收集的蛋白单颗粒进行二维(2D)分类,得到静息态人源STIM1分子的近似模型.     

狼毒乙醇提取物限制糖脂代谢阻止小鼠肺癌细胞生长和转移

采用不同浓度的狼毒乙醇提取物处理体外培养的Lewis肺癌细胞48h,MTT法检测细胞粘附与增殖,transwell小室检测细胞运动,并测定细胞内葡萄糖(Glu)、葡萄糖转运体1(GLUT1)、游离脂肪酸(FFA)和甘油三酯(TG)水平.将小鼠Lewis肺癌细胞分别注射到小鼠腋部皮下和尾静脉建立小鼠Lewis肺癌皮下移植模型和实验性肺转移模型,分成模型组、狼毒乙醇提取物高剂量组和低剂量组,模型建立后次日给药,治疗3周评价狼毒乙醇提取物的抗肿瘤和抗转移作用,检测瘤组织中GLUT1、乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、FFA和TG水平,并采用免疫组化法比较肺转移肿瘤部位与非肿瘤部位GLUT1和脂肪酸合成酶(FAS)的差异.结果显示,狼毒乙醇提取物对体外培养的Lewis肺癌细胞呈剂量依赖性抑制其粘附、增殖和运动,能降低细胞内Glu,GLUT1,FFA和TG水平.与未治疗的模型小鼠比较,狼毒乙醇提取物呈剂量依赖性减缓肿瘤生长速度、阻止肿瘤转移、延长荷瘤小鼠存活时间.狼毒乙醇提取物能降低瘤组织中GLUT1,LDH,FFA和TG水平,但增加SDH活性.在免疫组化中,与正常肺组织比较,狼毒乙醇提取物也能抑制肺转移肿瘤部位的GLUT1和FAS.以上结果表明,狼毒乙醇提取物能限制肿瘤细胞对葡萄糖和脂肪的利用从而阻止肺癌细胞的生长和转移,是一种有前景的新型潜在抗肿瘤药物.     

异三聚体G蛋白参与调节花粉细胞内钙离子浓度

利用激光共聚焦显微镜测定了川百合(Lilium daviddi)花粉细胞内游离钙离子浓度,研究了细胞质膜上异三聚体G蛋白激活剂和抑制剂对花粉细胞内钙离子浓度的影响以及G蛋白激活后钙信号产生的可能途径.结果表明异三聚体G蛋白激活剂霍乱毒素(CTX)可以明显提高细胞内钙离子水平,产生带有一定时空特征的钙信号,而其抑制剂百日咳毒素(PTX)则显著降低细胞内钙离子水平;L型钙通道阻断剂异搏定和IP 3 受体抑制剂肝素都可以明显抑制霍乱毒素引起的钙离子水平升高.由此推断,异三聚体G蛋白可能在花粉细胞内钙离子水平调控过程中发挥重要调节作用,它有可能是通过促进细胞外钙离子内流和细胞内钙库释放两条途径起作用的.     

芒果多酚对宫颈癌Hela细胞的抑制作用及机制

用芒果多酚处理人宫颈癌细胞(Hela)后,采用MTT法检测细胞的存活率;Hoechst 33258荧光染色和流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期分布,同时用Western blot检测p53,p21,c-myc,cyclin D1蛋白质水平变化.结果显示：0.025,0.05, 0.1,0.2,0.4 mg/mL的芒果多酚溶液能明显抑制Hela细胞的增殖,并呈剂量和时间依赖性;荧光染色后,大多数细胞内可以看见浓密的荧光颗粒,并出现核收缩;流式细胞术分析发现,与未处理组比较,芒果多酚作用后的G1期Hela细胞数显著增多,G2期细胞数逐渐减少;凋亡率明显高于对照组;Western blot检测显示芒果多酚上调p53,p21蛋白水平,下调c-myc,cyclin D1蛋白水平. 以上结果表明芒果多酚能明显抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,诱导其凋亡.     

小胶质细胞内的钙离子信号的研究进展

细胞内钙离子(Ca~(2+))对多种生理活动均具有一定的调节作用,它可影响神经递质释放和细胞兴奋性.细胞内钙离子浓度([Ca~(2+)]i)受到多方面调控,[Ca~(2+)]i的变化是重要的信号转导方式之一.小胶质细胞是中枢神经系统中固有的免疫细胞,它们对脑损伤、脑炎症和多种神经退行性疾病有先天性的免疫应答.除了在疾病发生发展中的作用,小胶质细胞也在很大程度上参与了神经元网络的发育和脑组织稳态的维持.受体介导的钙离子信号的传递,是包括小胶质细胞在内的所有细胞中最普遍的信号转导机制.小胶质细胞功能变化与小胶质细胞内钙离子信号的变化密切相关,对小胶质细胞内钙离子信号的研究具有重大的意义.     

鼻咽癌转移灶细胞裸鼠体内演进中转移及增殖动力学研究

将鼻咽癌单克隆细胞株（ＣＮＥ－２Ｚ－Ｈ５）移植于裸鼠皮下，待裸鼠发生转移时，取其淋巴结和（或）肺转移灶癌细胞再次移植裸鼠皮下传代，如此用转移灶癌细胞重复传２－４代后，观察各代裸鼠的转移率和转移途径；同时观察各代癌细胞生长曲线、增殖指数及移植瘤瘤重和体积倍增时间的变化。结果显示：随着鼻咽癌转移灶癌细胞裸鼠体内的演进，各代裸鼠的转移率增高，且转移途径更为单一；各代癌细胞的增殖能力不断增强。提示：鼻咽癌细胞在裸鼠体内演进中转移能力和增殖能力均不断增强，且二者关系密切。     

环亲和素A的重组表达及其促进肝癌细胞侵袭转移的体外研究

为研究环亲和素A（CyclophilinA,CyPA）与肝癌转移的关系,用原核重组表达并纯化了CyPA。在不同浓度的CyPA刺激下,利用凝胶酶谱检测人肝癌细胞FHCC-98分泌基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMPs）的能力。选择合适的刺激浓度,用BordenChamber检测肝癌细胞的侵袭能力。同时用抗CD147的抗体阻断CypA与其受体CD147的结合,检测阻断后FHCC-98在CyPA刺激下分泌MMPs及转移的能力。结果表明重组表达的CyPA能促进FHCC-98分泌激活或非激活形式的MMP-2并能促进FHCC-98的转移,而抗CD147的抗体能阻断其作用。实验结果表明：环亲和素A能与肝癌细胞表面的受体分子CD147结合,促进肝癌细胞的转移,提示其在“炎-癌”链中起到一定的作用。