北京鸭核DNA中β-珠蛋白基因的初步鉴定

以鸡β-珠蛋白基因为探针、用Southern blot杂交方法和蔗糖密度梯度超速离心——点膜杂交的方法、鉴定出北京鸭β-珠蛋白基因位于核DNA的EcoRI限制性内切酶酶切片段中大小约为20～23kb部分。     

新疆维吾尔族和回族人TK—C基因多态性研究

本实验首次研究了少数民族人体细胞质胸苷激酶(TK—C)基因的限制性片段长度多态(Restriction Fragment Length Poly—morphism,简称RFLPs)现象。以人基因组TK—C基因中无重复顺序DNA片段PHK1.25/HindⅢ BamHⅠ作为探针,和经限制性内切酶KpnⅠ消化的人体基因组DNA做Southern杂交,发现了3.1kb和2.6kb两种长度的片段。在经分折的22个维吾尔族人基因组DNA样品中,4个个体为3.1kb纯合子,8个个体为2.6kb纯合子,10个个体为3.1和2.6kb杂合子;同时,对20个回族人基因组DNA研究表明,5个为3.1kb纯合子,7个为2.6kb纯合子,8个为3.1和2.6kb杂合子。由此推测片段长度差异可能是由于Alu重复顺序的同源重组造成DNA片段的缺失或重复;而不同人群等位片段间频率的差异为研究人群迁移和近代分子进化提供了线索。同时,也为利用TK基因的RFLPs进行医学遗传学诊断提供了一定的理论基础。     

黑曲霉基因文库的构建及葡萄糖淀粉酶基因的克隆

用噬菌体λEMBL3 DNA为载体成功地构建了黑曲霉3758的完整的基因文库。供体黑曲霉染色体DNA经EcoRI部份酶切和蔗糖密度梯度离心,回收15—20kb片段,以一定的比例与经EcoRI处理的载体λEMBL3 DNA连接,连接产物用大肠杆菌SMR10单菌系统提取的包装蛋白进行体外包装,包装物感染宿主大肠杆菌Q359,获得2.5×10~5重组噬菌体/μgDNA的包装效率,比Clarke-Carbon公式对构建黑曲霉染色体基因文库要求的重组克隆数高10倍。以编码葡萄糖淀粉酶第329—481位氨基酸的DNA作为探针,用原位噬菌斑杂交的方法,从10~5个重组噬菌斑中筛选出2个杂交阳性噬菌斑。复筛以后,用快速法提取DNA,经EcoRI和EcoR V双酶切以后,走电泳,用Southern印迹法将DNA转移至硝酸纤维素膜上,与~(32)p-标记的探针杂交,证实葡萄淀粉酶基因位于2.5kb的EcoRI、EcoR V片段上,该片段已亚克隆至ρBR322。     

基于PCR-RFLP的西洋参和人参指纹特征鉴定

目的建立西洋参与人参限制性片段长度多态性聚合酶链式反应(polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)的鉴定方法.方法采用改良的CTAB法从西洋参和人参中提取基因组DNA.应用生物信息学软件设计西洋参与人参核糖体DNA ITS序列的特异性引物,利用PCR技术对指定序列进行扩增,并通过RFLP方法酶切后进行指纹图谱的鉴别比较.结果提取西洋参与人参基因组DNA19 kb,并扩增核糖体122 bp大小的基因片段,经酶切后西洋参为80 bp和42 bp长度的两条片段,而人参仍然为122 bp长度的单一片段.结论西洋参与人参DNA具有特异性酶切位点,可作为西洋参与人参鉴定的有效方法,该方法简便快速,结果可靠.     

酵母酸性磷酸酯酶基因PHO81克隆的初步研究

酵母PHO81基因是调控阻遏酸性磷酸酯酶的的一种中介因子,其编码区由3531个核苷酸组成。由于片段较大,目前很难应用PCR技术一次予以扩增。本文用自行设计的4个引物以啤酒酵母总染色体DNA为模板借助PCR技术扩增PHO81基因的两个片段,其长度分别为1.3kb和2.2kb,通过限制性酶切将其装入载体质粒pUC18中。并初步进行了重组质粒限制性内切酶酶谱分析和Southern杂交试验。     

滑鼠蛇肝线粒体DNA的制备及性质测定

报导了用蛇肝脏制备线粒体DNA的简便方法。电镜分析结果表明,滑鼠蛇肝mt DNA为环状分子,周长5.23μm。限制性内切酶PstI,BamHI和EcoRI在滑鼠蛇肝mtDNA上分别有2、3和4个点切。根据各酶切片段的大小测得mt DNA的平均分子量为16.91kb或10.85×10~6 dalton。     

粗毛栓菌(Trametes gallic)基因启动子的分离与鉴定

粗毛栓菌 (Trametesgallic)总DNA经Sau3AI酶切后插入到启动子探针型载体pSUPV8的BamHI位点 ,在含氨苄青霉素与潮霉素双抗平板上筛选到 8个潮霉素抗性(Hygr)重组子 (命名为 pTP1～ 8) ,其插入片段大小为 0 .5～ 1.7kb ,抗性水平为 0 .15× 10 - 3 ～0 .35× 10 - 3 g/mL .对 pTP6进行酶切分析表明 ,插入片段中含有KpnI ,XbaI和SacI位点各一个 ,用限制酶SacI和XbaI去掉其 5’端 0 .7kb和 1.2kb片段后 ,其潮霉素抗性由 0 .2 5×10 - 3 g/mL均降为 0 .15× 10 - 3 g/mL .将TP5片段与粗毛栓菌总DNA进行Southern杂交 ,结果证明 ,TP5片段来源于粗毛栓菌总DNA .对片段TP5的 3’端进行序列分析 ,发现它存在真核生物和原核生物基因启动子的保守序列     

黑麦Rubisco大亚基基因(rbc L)的克隆及其限制性内切酶图谱的构建

以小麦的rbc L为探针,分别与黑麦ctDNA EcoR I,BamH I,Hind III的酶切谱带进行Southern杂交。结果发现,E13(2.15 kb),B2(10.7 kb),H2(10.4 kb)均含有rbc L基因。用pUC9为载体克隆黑麦ctDNA的B2片段,Southern杂交后表明,得到的重组质粒含有rbc L基因,将其命名为pRCB2。设计了一种快速准确的分析方法,构建出pRCB2质粒DNA的限制性内切酶图谱,rbc L被定位在一个2.8 kb的区域内。     

分子标记及AFLP技术

分子标记类型可以基因表达的结果为基础,对基因的间接反映;分子标记则是DNA分子碱基序列变异的直接反映.早期利用限制性内切酶,酶切生物体DNA后来检测不同遗传位点等位变异(RFLP)和以一个碱基顺序随机排列的寡核苷酸序列为引物,利用对基因组DNA随机扩增来鉴别DNA多态性(RAPDs).真核生物基因组中普遍存在的重复序列产生了微卫星(microsatellites)标记技术.而RFLP与RAPDs有机结合形成了有着更为广阔的应用前景的AFLP技术.SNP标记利用大多数基因位点上都会有若干个等位型(alleles)为DNA芯片技术应用于遗传作图提供了基础.     

珠鸡mtDNA的限制性图谱

应用AvaⅠ，BamHⅠ,BglⅠ,DraⅠ,EcoRⅠ,HpaⅠ,PvuⅡ,SacⅠ,SalⅠ,ScaⅠ和StuⅠ共11种限制酶对珠鸡（Acryllium vulturinum)mtDNA进行单酶切分析，结果表明，珠鸡mtDNA的分子量为16.7kb，另以其中除AvaⅠ和StuⅠ外的9种限制酶进行双酶切分析，构建了珠鸡mtDNA的限制性图谱，并与家鸡（Gallus gallus domesticus)比较，二者mtDNA序列歧异值为0.073。     

Sequence analysis of a 7.3 kb Bam H Ⅰ genomic fragment of fowlpox virus strain 282E_4

A 7.3 kb BamH I genomic fragment from fowlpox virus (FPV) strain 282E4 has been sequenced. After comparison with the FPV sequences collected in Genbank, and the entire genomic sequence of vaccinia virus (VV) strain Compenhagen, a 11.2 kb BamH I fragment from FPV strain Munich HP-438 has been found homologous to the fragment. Every predicted open reading frame (ORF) within the fragment has been compared with the ORFs of W strain Copenhagen at the amino acid level. The signal peptide and transmembrane region of each peptide encoded by each corresponding ORF predicted in the fragment have been studied as well.     

Sequence analysis of a 7.3 kbBam H I genomic fragment of fowlpox virus strain 282E4

A 7.3 kb BamH I genomic fragment from fowlpox virus (FPV) strain 282E₄ has been sequenced. After comparison with the FPV sequences collected in Genbank, and the entire genomic sequence of vaccinia virus (VV) strain Compenhagen, a ll.2 kb BamH I fragment from FPV strain Munich HP-438 has been found homologous to the fragment. Every predicted open reading frame (ORF) within the fragment has been compared with the ORFs of VV strain Copenhagen at the amino acid level. The signal peptide and transmembrane region of each peptide encoded by each corresponding ORF predicted in the fragment have been studied as well.     

青岛文昌鱼神经胚中期cDNA文库的构建

提取青岛文昌鱼18小时神经胚中期mRNA,以5＇脱磷的NotI-oligo(dT)18为引物,反转录合成cDNA.双链cDNA的5＇端钝端连接上带EcoRI突出末端的衔接头,再经NotI酶切,在cDNA的3＇端形成NotI突出末端.以SizeSep离心层析柱除去400bp以下的小分子,与带有NotI和EcoRI突出末端并经过5＇端脱磷的λExCellNotI/EcoRI/CIP载体DNA进行连接,经体外包装和感染NM522宿主菌,得到了3.6×10     

质粒Yp7构建的探讨

以大肠杆菌酵母穿梭质粒YRp7 DNA为材料,经体外重组构建了质粒Yp7。该质粒具有Amp~r、Tet~r两个抗药性标记和一个来自酵母细胞的Trpl基因。分子量约为5.25kb。该质粒可用于筛选水稻等真核生物DNA中的自主复制序列。     

IFI16基因反义干扰表达载体的构建与鉴定

为了构建可在人喉癌细胞中稳定表达 IFI16基因短发夹RNA（shRNA）的表达载体,设计合成的IFI16基因shRNA片段,连接到经BamH I和 EcoR I双酶切的pGreenPuroTM shRNA表达载体中,连接产物转化大肠杆菌后挑取几个抗性菌落,用PCR技术初步进行鉴定,经PCR初步鉴定为重组质粒的一个重组子DNA用测序进一步鉴定,测序结果显示成功构建了 IFI16基因shRNA的表达载体pGreenPuro-IFI16 shRNA 。     

Molecular cloning and expression of Pfu DNA polymerase gene and its application in long-distance PCR

A 2.3 kb DNA fragment containing Pfu DNA polA gene was amplified by PCR from total DNA of Pyrococcus furiosus and cloned into a pGEM-T vector. The recombinant clone pT-pfu was digested with Nco I and Xho I and the fragment was inserted into an expression vector pET3d-X. The Pfu polA gene was expressed in Escherichia coli BL21 (DE3). The gene product (Pfu) was purified with heat denaturation, polyethylenemine (PEI) precipitation and Bio-rex 70 ion-exchange chromatography. The recombinant Pfu was verified by protein N-terminal sequencing. With the recombinant Pfu, large λ DNA fragments were successfully amplified in long-distance PCR.     

A型口蹄疫病毒VP1免疫活性肽基因串联片段的化学合成及克隆与表达

A型口蹄疫病毒（FMDV）VP1蛋白的141～160和200～213位氨基酸序列是决定FMDV免疫原性的抗原决定簇片断．人工合成一个免疫活性肽基因的串连片段（20AA－14AA-20AA）、全部选用大肠杆菌偏爱密码子．在5’端带有EcoR1位点和一个起始密码子ATG，在3’端带有BamH1位点和一个终止密码子TGA．利用这两个酶切位点把该基因连接到pWR590质粒上．并筛选高表达的菌株．结果表明该融合蛋白在大肠杆菌JM101中能高表达．经斑点ELISA实验证明．大肠杆菌细胞中表达的融合蛋白有A型FMDV抗原活性．     

大黄鱼(Larimichthys crocea)fAFLP方法的建立

以大黄鱼为材料,探索及优化了影响荧光标记AFLP(fAFLP)分析体系的主要因素.结果表明:内切酶EcoRⅠ与MseⅠ各0.35 U,双酶切350 ng大黄鱼基因组DNA,依次反应4 h可得最佳效果;T4DNA连接酶2.5 U,16℃过夜连接3μL酶切产物与接头时效果最佳;以1μL连接产物作底物,EcoRⅠ与MseⅠ预扩引物分别为0.3μmol/L与1.5μmol/L时预扩效果最佳;预扩产物稀释超过100倍作为选择性扩增的模板时致使某些样品的电泳条带缺失.使用该体系分析了一个野生大黄鱼群体的AFLP片段的多态水平,结果证明该方法简便有效,可用于群体遗传多态性分析.     

35S启动子组入蓝藻质粒载体pUC13－pbl

３５Ｓ启动子组入蓝藻质粒载体ｐＵＣ１３－ｐｂｌ楼士林，郭奕斌，吴巧娟（生物学系）近年来构建了一些含３５Ｓ启动子的质粒载体￣［１］，但未见含３５Ｓ启动子的蓝藻质粒载体．因此本研究拟把ＣａＭＶ的３５Ｓ启动子组入由孙立春等人构建的蓝藻质粒载体ｐＵＣ１３－ｐ...