片形吸虫成虫虫体抗原制备及ELISA实验研究

目的:研究人体片形吸虫病ELISA检测试剂盒的检测效果。方法:采用云南大理本地采集的牛体片形吸虫成虫制备可溶性粗抗原,包被反应板,采用人体片形吸虫病ELISA法(FAWA-ELISA)进行研究,分别检测26份片形吸虫患者血清、102份其他寄生虫病患者血清和25份健康人血清,评价检测试剂盒的检测效果。结果:检测试剂盒的敏感性为100.0%、特异性分别为95.28%(95%CI:98.9%~91.2%),约登指数分别为0.95。结论:FAWA-ELISA试剂盒检测效果较好,且成本相对较低,可适宜用于云南片形吸虫病流行区流行病学筛查,减轻病原学检测的工作量。     

抗大肠癌组织差异表达蛋白(SCAP47)抗体的制备及初步应用

制备一种新的大肠癌组织差异表达蛋白质抗体(抗SCAP47),用于检测大肠癌相关肿瘤抗原SCAP47。采用本室制备的大肠癌组织差异表达蛋白质(SCAP47)免疫新西兰纯种兔,制备兔抗SCAP47抗体,用双向免疫扩散法和ELISA法测定抗体效价;并用ELISA法检测129例患者的胃肠道肿瘤和疾病及正常对照组织的可溶性SCAP47抗原。用SCAP47抗原免疫新西兰纯种兔,获得抗SCAP47抗体,经检测其最高效价：双向免疫扩散法为1：32;ELISA法为1：6400。129例患者的胃肠道肿瘤和疾病及正常对照组织可溶性SCAP47抗原ELISA法检测结果显示：诊断大肠癌的敏感性52．4％,特异性95．4％,阳性预示值84．6％,阴性预示值80．6％,似然比11．4,约登指数0．47。本实验制备的抗SCAP47抗体是一种新的大肠癌相关抗原SCAP47抗体。由于SCAP47不同于CEA、P^27、CCA等大肠癌肿瘤标志物,且在大肠癌中呈现高度表达,推测其可能是一种新的大肠癌相关抗原。因此,制备抗SCAP47抗体为用于多种指标联合检测早期大肠肿瘤提供了一种新的检测工具。     

两种国产与一种进口小鼠肝炎病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较研究

目的 本研究拟对比小鼠肝炎病毒( MHV)抗体 ELISA 检测试剂盒的敏感性、特异性、精密性和可信度,以筛选出既经济又可靠的检测试剂盒。 方法 选择两种国产与一种进口的 ELISA 试剂盒检测 MHV 抗体和以下 5 种病毒阳性血清:小鼠仙台病毒(SV)、小鼠肺炎病毒(PVM)、小鼠细小病毒(MVM)、小鼠鼠痘病毒(MPV)及小鼠呼肠孤Ⅲ型病毒(Reo-3),并进行敏感性、特异性、精密性及可信度实验比较。 结果 ELISA 国产 B 试剂盒的敏感性是国产 A 试剂盒的 400 倍,进口试剂盒的敏感性是国产 B 试剂盒的 4 倍;特异性实验显示国产 A 试剂盒与 MPV 无交叉反应,但与其他 4 种病毒阳性血清均有交叉反应,国产 B 试剂盒和进口试剂盒与 MPV 以外的 5 种病毒阳性血清均无交叉反应;精密性实验显示进口试剂盒批内平均变异系数为 5. 667%,国产 A 和国产 B 试剂盒批内平均变异系数分别为13. 825%和 13. 827%;可信度实验显示国产 B 试剂盒和进口试剂盒的阳性和阴性检测符合率均为 100%,国产 A 试剂盒的阳性和阴性检测符合率分别为 40%和 80%。 结论 ELISA 检测国产 B 试剂盒除敏感性和精密度低于检测的进口试剂盒外,其特异性和可信度均良好,国产 A 试剂盒的敏感性、特异性、精密性和可信度均低于检测的进口试剂盒。     

ELISA在梅毒检测中的价值

对ELISA在梅毒检测中的价值作了评价，比较了TRUST和ELISA两种方法用ELISA法检测TRUST阳性标本83份，TRUST阴性标本1536份，结果出现梅毒-ELISA和TRUST不一致结果13份，用TPPA进行确认．13份确认结果显示，梅毒-ELISA与TPPA的符合率为83．3％，TRUST与TPPA的符合率为8．3％．梅毒-ELISA的敏感性、特异性分别为100％、99．9％，TRUST的敏感性、特异性分别为89．9％、99．8％．梅毒-ELISA的敏感性、特异性都优于TRUST，与TPPA的符合率高，是用于梅毒检测和筛查的一种良好方法．     

传统抗原、重组抗原检测啮齿类动物病毒的ELISA法敏感性和特异性

酶联免疫吸附试验 (ELISA)是一种常用的检测啮齿动物血清病毒抗体的方法。用于检测血清抗体的抗原可是用常规方法制备的全病毒或是在原核或真核系统中表达的重组抗原蛋白。利用杆状病毒表达系统已获得细小病毒、沙粒样病毒和冠状病毒的带有His标记的重组病毒抗原。重组抗原在昆虫细胞中表达裂解后 ,可用色谱法提纯。提纯的抗原用来包被 96孔ELISA板。用细小病毒非结构蛋白 (NS 1) ELISA法检测啮齿动物血清 ,在检测的 345 7份样本中有 88份 (2 5 % )NS 1抗体阳性 ,9份 (0 3% )为非特异性反应。虽然NS 1ELISA检测NS 1抗体具有…     

双抗原夹心ELISA检测抗鳗弧菌抗体效价的研究

建立检测抗鳗孤菌抗体效价的双抗原夹心ELISA法,评价其可行性。采用高碘酸盐法对鳗孤菌抗原进行辣根过氧化物酶标记,并通过血清抗体效价比较双抗原夹心ELISA与微量凝集法的优越性。结果显示：标记蛋白含量为2．5mg的抗原所需HRP的最适量为0．20rag。以超声破碎后鳗弧菌离心上清为最适标记抗原,其工作浓度为12．25mg／L．并且双抗原夹心ELISA操作简易具有较高的敏感性和特异性。     

不孕妇女血清中卵透明带抗体的检测

利用与人卵透明带有交叉免疫反应的猪ZP3抗原，建立起不孕妇女血清卵透明带抗体检测的ELISA技术，并对120例不孕妇女血清进行了检测，发现15例透明带抗体阳性血清。该法灵敏、特异，稳定性和重复性好，易于在临床推广应用。     

双抗体夹心ELISA法检测海产蟹血卵涡鞭虫方法的初步建立

以针对血卵涡鞭虫的特异性单克隆抗体为捕获抗体,纯化的抗血卵涡鞭虫的兔抗血清为检测抗体,初步建立了检测血卵涡鞭虫的双抗体夹心ELISA方法.方阵滴定确定最佳反应条件:包被的单克隆抗体浓度为10μg/mL,多抗兔血清工作浓度为14.3 μg/mL,待检样品稀释度为1:800;HRP-羊抗鼠IgG按1:20 000稀释.用建立的ELISA方法对86份已知背景样品进行检测,阳性检出为97.6%,血卵涡鞭虫抗原检测的灵敏度为100 pg/mL;与蟹血淋巴细胞、假丝酵母菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌等样本均无交叉反应.结果表明,建立的双抗体夹心ELISA方法灵敏度高、特异性强,可用于诊断梭子蟹乳化病血卵涡鞭虫病的检测.     

MCTD、SS和RA患者血清中SARS-CoV抗体阳性原因分析

为探讨严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒(SARS-CoV)抗体在SARS病原学诊断中的特异性及其在干燥综合征(SS)、混合结缔组织病(MCTD)和类风湿性关节炎(RA)患者血清中的假阳性问题，应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光法(IFA)检测了111例正常对照和46例SS、MCTD和RA患者血清中SARS-CoV抗体的阳性率。结果在正常对照和SS、MCTD和RA患者中，应用ELISA测定SARS-CoV抗体的阳性率分别为3．6％(4／111)和19．6％(9／46)，经IFA检测，上述SARS-CoV抗体阳性者均为阴性。提示IFA诊断SARS的特异性为100％，ELISA诊断SARS存在一定的假阳性。     

用酶联免疫吸附试验诊断蓝氏贾第鞭毛虫病免疫价值的研究

用蓝氏贾第鞭毛虫纯培养虫株和超声粉碎可溶性虫体部分作为抗原,采用ELISA方法检测人体感染蓝氏贾第鞭毛虫血清免疫抗体并讨论其寄生虫学诊断价值．检测65份成人贾第虫病血清,其中55份IgG和／或IgA阳性,阳性率84．62％．20份10岁以下儿童贾第虫病人血清无1份阳性．结果提示蓝氏贾第鞭毛虫感染产生的体液免疫反应存在有年龄依赖性,酶联免疫吸附试验用于蓝氏贾第鞭毛虫病免疫诊断具有局限性．     

肝片形吸虫、布氏姜片吸虫和日本血吸虫毛蚴体表结构的比较观察

本文应用扫描电镜及相位差显微镜对下列三种吸虫毛蚴进行了比较观察。一、肝片形吸虫毛蚴:顶突呈厚壁圆环状,中央为顶腺开口,壁上有4个腺体的开口及6根短纤毛。纤毛上皮细胞共21个,排列顺序为6.9(6.3)、4.2;第2列由2个完整的亚列组成。在第1、2列上皮细胞间的细胞嵴上,有2个侧乳突和4个细胞间嵴小突。二、布氏姜片吸虫毛蚴:顶突由2个唇瓣样物构成,中央为顶腮开口,未见其它小孔及纤毛。纤毛上皮细胞数及排列顺序与肝片形吸虫的相似,但第2列只有一个半亚列组成。三、日本血吸虫毛蚴:顶突呈网格状,上有2个穿刺腺开口及4—6根短纤毛。纤毛上皮细胞共22个,排列顺序为6、9、4、3,第2列呈单行排列。在第1、2列细胞间,有2个侧小突和多个细胞间嵴小突。本文还对上述各种结构的功能进行了讨论。     

对流免疫电泳试验在肝片吸虫病诊断中的应用

目的探讨对流免疫电泳试验在肝片吸虫病诊断中的应用。方法用对流免疫电泳试验（CIET）检测肝片吸虫患者、肝片吸虫病兔、正常兔、血吸虫病兔和血吸虫患者血清的抗体。结果以CIET检测肝片吸虫患者和病兔血清中的抗体，阳性率分别为90．3％和92．3％。同时检测正常兔、血吸虫病兔和血吸虫病人血清，皆无沉淀线形成，阴性反应。结论CIET用于肝片吸虫病临床诊断具有较好的特异性。     

自制和进口试剂盒在犬细小病毒检测中的应用

用本研究室研制的犬细小病毒单克隆抗体和多克隆抗体，采用夹心ＥＬＩＳＡ原理，研制成功犬细小病毒快速诊断试剂盒。对８７份犬粪便样品进行检测，并与ＨＡ法和美国ＩＤＥＸＸ公司研制的ＥＬＩＳＡ试剂盒进行比较。结果表明，与ＨＡ法相比，自制试剂盒的敏感性为９３．３％，特异性为１００％，总符合率为９５．４％；与美国试剂盒相比，自制试剂盒的敏感性为１００％，特异性为８４．６％，总符合率为９５．０％，达到国外同类产品     

五种不规则抗体检测方法的比较研究

比较盐水法、木瓜酶法、凝聚胺法、试管间接抗人球蛋白法、全自动微柱凝胶间接抗人球蛋白法检测受血者血清中不规则抗体的敏感性、特异性。选取解放军总医院门诊及住院输血患者5000例,分别采用盐水法、木瓜酶法、凝聚胺法、试管间接抗人球蛋白法、全自动微柱凝胶抗人球蛋白法对其输血前标本进行抗体筛选,对阳性结果进行抗体鉴定。盐水法未能检出阳性结果;木瓜酶法检出其中的15例,特异率86．7％;试管间接抗人球蛋白法检出了其中的19例,特异率为89．5％;凝聚胺法检出阳性结果18例,特异率100％;全自动微柱凝胶间接抗人球蛋白法检出阳性标本22例,特异率90．9％。说明盐水法不适合不规则抗体检测;木瓜酶法检出率低,具有一定局限性;试管间接抗人球蛋白法需要反复洗涤红细胞,费时较多,不便于开展大规模筛查;凝聚胺法简便、快速,但手工操作,不易标准化;全自动微柱凝胶抗人球蛋白法灵敏度高、重复性好、易于标准化,适于临床输血前大批量抗体筛选。     

猴B病毒BVgD-多肽ELISA检测方法的建立

目的建立猴B病毒抗体BVgD-多肽ELISA检测方法。方法以Western-blot分析猴B病毒糖蛋白D(BVgD)上的多肽抗原决定簇(BVgD-多肽)的抗原性,采用方阵滴定法,确定ELISA法的最佳实验条件。用灭活BV全病毒、HSV-1和BVgD-多肽三种抗原系统对猴血清样品进行平行检测,比较分析了三种系统的抗原性特点。并且将检测结果与美国BV抗体检测试剂盒的检测结果进行了比较。结果建立了猴B病毒抗体的BVgD-多肽ELISA法,研究结果表明本方法与BV全病毒和以HSV-1病毒为抗原的试剂盒相比,敏感性较低、特异性较好,避免了制备BV抗原对实验室要求高和HSV-1抗原引起的非特异性问题。检测结果与美国实验室BV抗体检测结果的符合率达85%。     

不同小鼠肝炎病毒对ELISA方法检测其血清抗体的影响

目的 建立小鼠肝炎病毒（Mouse Hepatitis Virus,MHV）血清抗体ELISA检测方法,用于本地区MHV的日常监测,以便对SPF小鼠感染状况及时作出判断。方法 选取3种MHV毒株MHV1、MHV-JHM和MHV-A59,通过L929细胞扩增培养获得纯化浓缩抗原并筛选适合包被抗原类型;免疫BALB/C小鼠,获得高效价免疫阳性血清;优化ELISA反应体系建立规范化的ELISA试剂盒并用于临床小鼠血清样品的检测。结果 筛选出适合本地区的MHV包被抗原类型为MHV1,建立了病毒扩增及浓缩纯化方法,制备的MHV抗血清达到同批次大量高滴度的水平,可作为标准化质控血清。包被抗原、待检血清和酶结合物最佳工作浓度分别为4. 0μg/m L (10 -7. 73 /0. 1 m L TCID50)、1∶40和1∶4 000稀释;批次内和批次间平均变异系数分别为5. 13%和5. 57%;检测灵敏度为1∶4 000稀释;与小鼠仙台病毒（SV）、小鼠肺炎病毒（PVM）、呼肠孤病毒III型（Reo3）、小鼠细小病毒（MVM）和鼠痘病毒（Ect）阳性血清均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于10%。对165份血清样品进行检测,阳性血清相符率97. 37%（37/38）,阴性血清相符率92. 19%（118/127）。结论 本研究建立的ELISA方法检测小鼠血清MHV抗体具有较高的特异性、敏感性和结果可重复性,可以用于本地区MHV日常病原学监测,以便对小鼠感染状况作出准确判断。