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1.
荔枝R基因同源序列的克隆与分析 总被引:3,自引:0,他引:3
根据已知植物抗病基因(R基因)编码的蛋白质NBS保守区设计特异简并引物,对荔枝的基因组DNA进行体外扩增,获得了一条大小约500bp的扩增谱带;回收该特异扩增带并进行克隆,筛选若干阳性克隆进行测序,共获得5个片段的序列。同源性比较发现,该5个片段均属于NBS-LRR类抗病基因同源序列(RGA),与已知R基因相应区段的氨基酸序列一致性为13.5%-45.9%。这些RGA既可进一步用于筛选荔枝的抗病候选基因,同时也可以作为分子标记,用于荔枝遗传图谱的构建。该研究表明R基因同源克隆技术可望成为荔枝抗病基因克隆和基因组研究的重要手段。 相似文献
2.
根据已克隆的STK类抗病基因的保守区设计简并引物对4个不同桃的基因组DNA进行PCR扩增,将获得的扩增片段的回收产物,应用pGEM-T easy裁体试剂盒进行了目的基因片段的克隆.随机挑取若干单克隆经PCR鉴定确认后,进行测序,共获得11个各不相同的片段序列.氨基酸序列分析中,有6个片段能推导出完整的氨基酸序列.除了两侧都基本具有STK类抗病基因产物的保守结构域. 相似文献
3.
滑膜肉瘤融合基因SYT-SSX cDNA的克隆与序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法获得SYT-SSX的cDNA,克隆入PUCm-T载体后,在美国ABI DNA自动测序仪上以反向引物测序法进行核苷酸序列的测定,扩增出98bp的特异性片段,并筛选出阳性重组克隆质粒PUCm-SYT-SSX。获得的滑膜肉瘤融合基因SYT-SSX的cDNA,为深入揭示滑膜肉瘤分子发生机理奠定基础,同时可进一步完成原核表达。 相似文献
4.
根据已分离植物抗病基因N(烟草)、RPS2(拟南芥)和L6(亚麻)的保守区域设计简并引物,从抗TuMV甘蓝材料84075第1链cDNA中扩增出1个与植物抗病基因同源的序列,经克隆测序结果表明,该基因片段与许多NBS类抗病基因同源,Southem杂交分析表明甘蓝抗病基因同源序列在基因组中以多基因家族的形式存在. 相似文献
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6.
编码普通野生稻磷酸盐转运蛋白基因片段的分离与克隆 总被引:1,自引:0,他引:1
以云南普通野生稻基因组DNA为模板,根据GeneBank中登记的编码小麦高亲和力磷酸转运蛋白基因保守序列设计一对特异引物,利用多聚酶链反应技术(PCR),扩增出目标基因(cwrpt)1002bp长度的基因片段并克隆到载体pGEM-T。经DIG标记探针杂交检测初筛,限制性内切酶酶切,PCR扩增,DNA序列分析与可能氨基酸序列同源性比较,此推定的氨基酸序列与小麦,水稻,拟南芥,番茄磷酸转运蛋白同源性很高,初步认为此基因片段为普通野生稻耐低磷胁迫相关磷酸盐转运蛋白的编码基因,获得全长序列与基因表达的进一步研究正在进行中。 相似文献
7.
致弱I型MDV pp38基因同源物的克隆和序列分析 总被引:3,自引:0,他引:3
将致弱I型马立克病病毒(MDV)感染的细胞基因组DNA的EcoRI酶切产物建于pUC18质粒载体文库中,以digoxingenin标记的含有中毒GA株MDVpp38基因克隆片段作为探针,进行了原位杂交反应,初步筛选出阳性重组质粒,进一步用EcRI酶切分析筛选到含pp38基因同源物的重组pUC18质粒,序列人析表明该pp38基因同源物与pp38基因有极高的同源性,仅有1个碱基突变并导致1个氨基酸的夫 相似文献
8.
扩增并克隆了JD病毒的gag 基因片段(位于300nt~564nt,编码基质蛋白MA)和pol基因片段(位于3467nt~3691nt,编码反转录酶RT),测定其序列并同BIV、BFV 和BLV 的相应基因进行比较.所建立的方法能够特异性扩增JDV序列,适用于JDV的检测 相似文献
9.
对SMARTTM技术构建的元江普通野生稻叶片cDNA文库进行随机测序,获得了元江普通野生稻的金属硫蛋白基因cDNA序列.该序列全长525 bp,开放阅读框长186 bp,编码62个氨基酸,10个半胱氨酸集中分布在肽链的N端和C端,该蛋白的分子量为6.42 kD,理论等电点为5.21.氨基酸序列(Blastp)同源性分析表明该基因属于金属硫蛋白家族. 相似文献
10.
应用PCR技术,首次从我国水稻品种中作8604的未成熟种子中,特异地扩增并克隆测序了半胱氨酸蛋白酶抑制剂的cDNA。它共有430个核苷酸,编码102个氨基酸,序列分析表明,本文克隆的水稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂的cDNA与水稻其他品种的同类基因的同源率均为100%;与水稻不同类型的半胱氨酸蛋白酶抑制剂的同源率为61.8%;与玉米、大豆、马铃薯和紫藤同类基因的氨基酸同源率分别为66.0%、51.1%、45.9%和46.9%;与动物的同类基因相比,也有较高的同源性。 相似文献
11.
利用多聚酶链反应(PCR)技术,从天冬氨酸酶基因的3'-端删除42个碱基,缺失突变基因经克隆、转化和筛选,得到一株有C端缺失14肽的天冬氨酸酶突变体表达的转化子.突变酶纯酶活性为野生型酶的1.21倍.圆二色谱和荧光光谱的研究表明,突变酶的结构比野生型酶松散或更具柔性,天冬氨酸酶C端14肽不是其功能所必需的. 相似文献
12.
铝诱导普通野生稻(Oryza rufipogon L.)光合系统相关基因表达 总被引:4,自引:0,他引:4
采用抑制差减杂交技术对正常与铝毒处理的普通野生稻植株进行表达基因差异性分析,通过对差异表达基因的PCR选择性研究,阳性表达基因的测序、Northern杂交的进一步分析,得出3个cDNAs在铝毒处理的叶片中高效表达,其中2个与光合系统代谢相关,1个与花的发育有关,研究结果为更好地理解植物在铝毒胁迫下叶片相关基因表达提供思路,同时也为在野生稻这个丰富基因库中筛选出耐铝毒的重要基因,以便改良亲源较近的水稻适应日益酸化的土壤具有一定的意义。 相似文献
13.
易序权 《佛山科学技术学院学报(自然科学版)》1996,(Z1)
聚合酶链反应(PCR)技术,现已在医学工程、疾病诊断、遗传工程、考古学及法医学等领域得到广泛应用,由于该技术具有灵敏、特异、产量高、速操作简便和容易自动化等突出优点,因此,也被应用于食品检验.本文就PCR技术的原理及在食品卫生检验中的应用作一综述. 相似文献
14.
钙调蛋白(Calmodulin)是生物细胞内一种重要的调控蛋白,通过其与靶酶的相互作用控制细胞正常的生长发育及细胞对外界环境变化的反应,我们从甜菊顶芽和花芽中提取总RNA,逆转录合成cDNA第一链,以此为模板,参考GenBank上已发表植物的钙调蛋白基因序列合成5′端和3′端引物,利用多聚酶链式反应(PCR)扩增并克隆得到了甜菊钙调蛋白基因的两个异型基因,序列分析表明,它们均由450个核苷酸组成,编码148个氨基酸,在核苷酸序列上与迄今已知的多种植物钙调蛋白均有很高的同源性,同源率在83%以上,编码的氨基酸序列同源性更同,同源率高达95%以上,这两个基因之间存在差异,其核苷酸序列同源率为85%,编码区的氨基酸序列的同源率为99%,仅在第122个氨基酸由ALA代替了VAL。 相似文献
15.
武延安 《西北师范大学学报(自然科学版)》1994,30(2):64-70
对细菌E.amylovora,E.herbicola和Pseudomonassyringae的DNA提纯,并通过聚合酶链反应,发现引物B_5等可用以有效地鉴别E.amylovora.对E.amylovora细胞培养液直接稀释,加清洁剂处理后进行聚合酶链反应(PCR).据引物B_5测定,得到清晰而强烈的相同的DNA分子电泳光带,可有效反应测定500个细菌细胞;用引物B_5和B_6进一步测定细菌E.amylovora。E.herbicola和P.syringae,从E.herbicoda反应获得一个电泳光谱,从P.syringae获得3个泳谱;用引物B_5和B_7与细菌E.amylovora和P.syringae反应,从E.E.amylovora得到两条相同光带,从P.syringae反应获得了相似的带谱分布。 相似文献
16.
《科学通报(英文版)》1993,38(20):1752-1752
17.
目的:为提高PCR检测乙型肝炎病毒(HBV)的特异性和灵敏度,降低成本,对PCR条件进行优化.方法:将HBV特异性基因片段转化到大肠杆菌DH5α中,提取质粒,利用PCR扩增HBV C区基因,对PCR条件中的退火温度、Mg2 浓度进行优化,并比较3种不同Taq DNA聚合酶的灵敏度.结果:HBV C区基因扩增的最佳退火温度为58℃,最佳Mg2 浓度为1.5mmol/L,Biostar Taq DNA聚合酶扩增到10-6.讨论:对HBV C区基因进行了转化和PCR实验条件的优化,为扩大PCR在乙型肝炎病毒(HBV)检测领域中的应用提供实验依据. 相似文献
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根据鸡10型腺病毒以及人2、5、40、41型腺病毒、牛3型、鼠1型腺病毒六邻体蛋白基因序列,选择保守区,设计和合成一对引物,以鸡腺病毒内蒙古分离株基因组DNA为模板,进行聚合酶链反应(PCR)扩增得到预期大小的0.55kbDNA片段.将此DNA片段克隆于pUC19的SmaI位点,筛选重组质粒,进行限制酶切分析和PCR检测,得到含有六邻体蛋白基因片段的重组质粒,为进一步开展此病毒分子生物学研究和分子生物学诊断技术的建立创造了条件 相似文献
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