用PCR法检测苏云金杆菌的溶原性噬菌体

根据苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,B.t)溶原性噬菌体G IL01(GenBank Accession Number:AJ536703)的同源序列设计一对引物,用35株B.t标准菌株和生产菌株MZ1(血清型H3 a3b)的过夜培养物作模板,结果有16株菌株包括MZ1能扩增出大小约为750 bp的预期产物,推测这16株菌为溶原菌。MZ1菌株的过夜培养液与指示菌ZK1(血清型H25)混匀并在双层琼脂上培养12 h后出现了滴度为2×107pfu的噬菌斑,从而证明生产菌株MZ1确为溶原菌;又以G IL01同源性较高的其它四个基因设计引物,分别以MZ1的培养物及其溶原性噬菌体基因组为模板进行PCR扩增,结果两者得到几乎一致的带型,进一步证明了生产菌株MZ1为溶原菌,说明利用PCR法检测鉴定苏云金杆菌的溶原性是可行的。比较指示菌方法、直接电镜法和DNA鉴定法,PCR法快速简便,对B.t生产上快速检测其溶原性噬菌体有实用意义。     

布氏杆菌病的护理

了解什么是布氏杆菌病,掌握布氏杆菌病的流行病学及护理要点。对16例布病患者进行认真观察与护理,落实相应的护理措施。4例患者经过积极治疗后痊愈出院,2例转为慢性病例经中西医结合治疗后病情好转。布氏杆菌病为西北地区发病率较高的传染病,要高度重视养殖业及畜牧业人员的防疫,加强自我防护意识,同时严格加强对病畜的检疫工作。对住院患者制定针对性的护理计划、给予有效的护理措施,对促进布氏杆菌病患者早日康复有积极作用。     

乐果在植物体内的分布和药效

1.作者描述了一个效果较好而又节省有机溶剂的提取及分离乐果的方法。2.不同生育期青菜(四月慢)中乐果残留量的测定指出:在同株孕蕾抽苔期青菜上,苔莢中乐果含量为菜叶的2.5倍(施药一天后);同时也大于小菜期全株的含量。3.所试两种不同类型的油菜中,甘蓝型(胜利油菜)的乐果残留量大于白菜型(白果油菜)。这种差具可能由于生态的而非生理的原因所致。4.施药一天后,同株桃树上,桃叶中的乐果残留量为桃子的5倍。5.施药五天后,所测各样品的乐果残留量均小于1ppm,这个数值低于规定的安全限量2ppm。     

应用荧光抗体法检测人工感染小鼠体内的鼠棒状杆菌抗体

<正> 鼠棒状杆菌又叫科屈氏棒状杆菌(Corynebacterium kutscheri),可引起鼠棒状杆菌病(伪结核),它是严重危害小鼠、大鼠的细菌性传染病之一。该病多呈隐性感染,自然病例病变多在肺、肝、肾中形成脓肿。当小鼠由于营养不良、经辐射或用可的松处理,机体的免疫功能降低时,以及感染鼠痘、沙门氏菌和大量氨气刺激等,可导致本病爆发,造成大批死亡。同时给研究工作带来严重干扰和影响。世界许多国家均有发病报道。近年来对本病的监测研究较多。我国于1985年从小鼠肝     

绿色荧光蛋白标记的芽孢杆菌在幼龄畜禽体内的动态分布

应用DNA重组技术构建了表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组芽孢杆菌(Baci1010).以GFP为标记研究该工程菌在仔猪和小鸡体内的动态分布.试验结果表明:投喂含质量分数为0.1%工程菌(Baci1010)菌液的全价配合饲料12h后,在仔猪和小鸡的肠道内可检测到该工程菌的存在,36h后在小鸡盲肠内该工程菌的数量达到(155±33)×105个/g,48h后在仔猪盲肠内该工程菌的数量达到(133±35)×105个/g,在仔猪和小鸡体内,该工程菌都能在肠道内迅速复活并繁殖成为有益菌.     

Zn和I在鲮鱼体内的积累与分布

用同位素示踪的方法研究水中的Zn 2 和I-在鲮鱼体内的积累和排泄行为.结果表明,在Zn 2 质量浓度为0.2 mg·L -1,I-质量浓度为0.01 mg·L -1的水体中,Zn和I-在鲮鱼中的积累趋势大致相同,并可分别用模拟方程Y=30.729Ln(t) 45.983及Y=1.2743Ln(t) 2.0991表达.Zn 2 和I-在鲮鱼体内主要分布在内脏,7 d时Zn为235.48 μg·g -1,I-为0.49 μg·g -1,其次为鳞片和鳃,肌肉中分布最少.而鱼体对Zn 2 积累能力较I-强,对Zn 2 的浓集系数是对I-的17.5倍.Zn 2 和I-从鲮鱼中的排泄较迅速,排泄过程可分为快排泄相(0～1 d)和慢排泄相(1～13 d),其慢相排泄过程可分别用模拟方程Y=6.5688e -0.081t和Y=0.0388e -0.1201t表示.Zn 2 的慢相半衰期为8.5 d,I-的慢相半衰期为5.8 d.内脏对于Zn 2 和I-的排泄速度比其他取样部位快.     

PCR法对结核杆菌早期检测的评价

<正> 近年结核病的发病率呈上升趋势,因而结核杆菌的快速诊断给结核病的防治起了重大作用。聚合酶链式反应(PCR)以其快速、敏感、特异等特点从众多结核杆菌检测方法中脱颖而出。我们同时用PCR法与直接涂片法对536例临床标本进行检测,其中54例用培养法进行了检测,对PCR技术在结核杆菌早期检测的价值进行评价,并对PCR假阳性结果产生的原因作初步分析。     

小鼠体内单核细胞增多性李氏杆菌的动态分布及病理变化

为进一步研究单核细胞增多性李氏杆菌的致病机制,培养浓度为9×109 cfu/mL单核细胞增多性李氏杆菌,采用Karber法测得该菌对小鼠的LD50为2.85×108 cfu/mL。由此建立小鼠模型,然后人工腹腔感染小鼠30只,分别在感染后2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h、48h和72h定期剖杀感染小鼠,取其脏器,采用PCR方法、分离培养及病理组织学方法,对感染模型小鼠体内的单核细胞增多性李氏杆菌动态分布及各器官的病理组织学变化进行初步研究。结果显示:感染2h,脾、肝、心血组织中均可检测到单核增多性李氏杆菌DNA,同时从上述脏器也可分离到单核增多性李氏杆菌;感染6h,大脑中可检测到单核增多性李氏杆菌DNA,并在感染后72h可分离到该细菌;感染4～6h,脾、心血、肝脑即开始出现病理变化和组织学变化。     

RB型硝胺发射药使用寿命实验研究

针对布鲁氏菌BCSP-31蛋白基因设计一对引物,优化反应条件,对布鲁氏菌属6个代表菌株以及与布鲁氏菌有交叉反应的对照菌株进行扩增,结果能够对布鲁氏菌属6个代表菌株进行很好扩增,扩增片段大小为223bp,而对照菌株不能扩增,使用该方法最低可以检测20个细菌.     

小鹅瘟的PCR检测

通辽市某养鹅户饲养的640只雏鹅从5日开始死亡,死亡率达75%.经PCR检测后确诊为鹅细小病毒感染.     

实时荧光PCR技术检测致敏原小麦的研究

采用实时荧光PCR技术检测致敏原小麦成分.试验结果表明:采用小麦管家基因GAG56D和Wx012基因的特异性检测引物和探针进行检测时,26种样品经实时PCR扩增,只有小麦产生阳性的荧光信号,其余样品均不产生荧光信号.灵敏度试验结果表明:该方法对小麦致敏原基因的检测灵敏度较高,可达到1 mg.kg-1,符合痕量检测要求.     

实时荧光PCR方法检测含麸质的谷类产品管家基因

采用实时荧光PCR方法鉴别含麸质的谷类成分,选择大麦Hordein管家基因、小麦Gliadin管家基因、黑麦Sec1管家基因和燕麦Avenin管家基因作为物种鉴定的特异性标记基因,设计适合于Taqman探针实时荧光PCR扩增的引物和探针,从而达到鉴别检测食品中含麸质的谷类大麦、小麦、黑麦、燕麦成分的目的.特异性实验结果表明,分别采用大麦、小麦、黑麦、燕麦的引物和探针进行实时PCR扩增时,经检测25种样品,只有相对应的阳性物种样品产生荧光信号,其余非该物种样品均不产生荧光信号,表现出了很高的物种鉴定特异性.以大麦为例的灵敏性实验结果表明,原料样品检测灵敏性可达到0.01%,加工后的食品则可达到0.05%,符合食品成分痕量检测要求.     

利用荧光定量PCR检测B.ovis侵染巨噬细胞RAW264.7的相对数量

为了探讨布鲁氏菌胞内寄生的机制,采用荧光定量PCR方法对进入巨噬细胞的布鲁氏菌的数量进行检测,克隆了绵羊种布鲁氏菌019株的16SrRNA基因和小鼠巨噬细胞RAW264.7的GAPDH基因。以16SrRNA基因和巨噬细胞GAPDH做为内参基因,将二者的比值作为检测布鲁氏菌进入巨噬细胞数量多少的指标,建立绵羊种布鲁氏菌019株侵染巨噬细胞不同阶段的感染模式。结果表明:在绵羊种布鲁氏菌019株侵染巨噬细胞15min～1h,16SrRNA与GAPDH的比值缓慢上升,侵染1～4h中,16SrRNA与GAPDH的比值急剧上升,说明在此阶段,细菌侵入细胞中的数量显著增多。     

犬附红细胞体病PCR检测方法的建立及应用

根据Genbank中已经发表的犬附红细胞体16sRNA基因序列设计合成一对特异性引物,通过聚合酶链式反应（PCR）扩增出一条与目的片段大小一致,约630bp的基因片段,建立了PCR快速检测方法．以建立的PCR检测方法及瑞氏、姬姆萨、吖啶橙染色法为基础对20例犬附红细胞体病例进行检测,比较四种方法的检出率．结果表明：建立的PCR检测方法的检出率略高于吖啶橙染色,明显高于瑞氏、姬姆萨染色,进而证明建立的PCR检测方法可用于犬附红细胞体的快速诊断和流行病学调查．     

应用聚合酶链反应技术检测库蚊抗性基因的初步研究

根据致库蚊有机磷抗性酯酶Ｂａ基因序列设计了两对引物，应用ＰＣＲ技术对广州部分地区的致倦库蚊ＯＰ抗性基因进行了测定。结果表明引物２、３扩增阳性率比引物１、２为高；实验室株及石牌、晓港、中山医医科大学、中山大学等４个地区自然种群抗性基因的扩增阳性率分别为３８％、２２．５％、２０％、１５％和７．５％。另外发现雄性库蚊出现的阳性率比雌蚊高。     

空调冷却塔中军团菌的半巢式PCR检测方法研究

军团菌是军团菌病的病源,在空调系统中的冷却塔水中普遍存在. 对常德市区随机在14个冷却水塔取水样,通过半巢式PCR方法,扩增军团菌特异16srRNA基因成功地对水样进行检测,结果14个水样检出有军团菌,检出率为100%.     

多重荧光PCR同时检测转基因成分35S和Nos方法的建立

根据商品化转基因作物中常用的花郴花花叶病毒启动子（CaMV35S）和根癌农杆菌终止（Nos）的序列特点，设计并合成了两对引物和相对应的荧光双链探针，建立一种应用荧光双链探针的多重荧光PCR同时检测转基因成分35S启动子和Nos终止子的方法，并利用该方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等11份实物样品进行了检测，其中有5份样品结果阳性，结果表明所建立的多重荧光PCR方法能同时检测了35S方法同时检测出35S和Nos双组分，较常规PCR技术更为简便、快速、准确，有很很好的应用前景。     

FTH1在布鲁氏菌侵染宿主细胞中的作用

为了探究布鲁氏菌侵染宿主巨噬细胞过程中铁蛋白(FTH1)生物学功能,本研究根据FTH1蛋白核苷酸序列,分别设计4条特异性小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)分子,亚克隆到RNAi-Ready pSIREN-RetroQ ZsGreen载体,并转染RAW264.7巨噬细胞,实时定量PCR筛选干扰效果最优的质粒;布鲁氏菌侵染干扰前、后的RAW264.7巨噬细胞,实时定量PCR检测布鲁氏菌基因16S rRNA和细胞凋亡相关基因的mRNA表达量。结果显示:获得了4条特异性siRNA分子,经测序正确,pSIREN-C siRNA质粒对FTH1干扰效果最高可达98%。干扰后布鲁氏菌侵染抑制率为84%,凋亡相关基因的mRNA表达量5个降低,3个上升。本研究表明:FTH1基因沉默后布鲁氏菌胞内的生存能力下降;布鲁氏菌侵染可以抑制细胞凋亡发生,FTH1基因沉默后细胞凋亡升高。