悬浮培养型BHK-21细胞生长特性及成瘤性研究

目的:了解低血清驯化的悬浮培养型BHK-21细胞的生长特性及致裸鼠成瘤能力.方法:比较研究悬浮型和贴壁型BHK-21细胞的细胞形态、生长动力学和成瘤性.结果:驯化的悬浮培养型和贴壁培养型BHK-21细胞生长状态均良好,最大增殖浓度分别为517×104/mL和39.67×104/mL,群体倍增时间分别为23.03h和21.36h,能显著提高细胞培养密度(P0.05).背部皮下接种致裸鼠成瘤性实验表明,驯化的悬浮培养型组裸鼠的体重增长率均低于贴壁培养型BHK-21细胞、阳性细胞组(Hela)和阴性细胞组(KMB17)(P0.05),裸鼠成瘤体积增长率均高于其他三组(P0.05).结论:驯化的悬浮培养型BHK-21细胞能显著提高细胞密度,其成瘤性方面还需进一步改善.     

纤细角毛藻平板反应器培养条件的优化

纤细角毛藻作为海洋生物的饵料,生长密度低、应用成本高一直是制约其利用的关键因素．本研究采用自行研制开发的平板式密闭光生物反应器培养纤细角毛藻,考察光照强度、光照周期、通气量、接种量等环境因素对藻细胞生长的影响,并采用均匀设计方法获得了优化的培养条件：光照时间24h,光照强度为6mW／cm^2,通气速率为8．43L／min,在优化条件下预期细胞密度最大值可达（6．94±0．88）×10^8／mL,验证实验获得最大的细胞密度为（6．18±0．13）×10^8／mL,理论计算值与实验值一致．     

贴壁及悬浮培养的Trex-293细胞生长及其重组腺病毒制备产率的比较分析

为了提高病毒产率并避免制备的重组腺病毒产物中残留的动物血清,将贴壁生长的Trex-293细胞用无动物血清的CD293培养基在搅拌式培养瓶中悬浮培养。分析比较其生长特征及不同条件下的病毒产率。结果表明悬浮培养的细胞生长为稳定状态的时间比贴壁培养时稍长,但每次以(4—6)×105cells/mL密度传代。(3—4)d后基本达到2×106cells/mL,21 d达3×106cells/mL以上,比贴壁细胞密度约高3倍。培养初期,悬浮细胞存活率稍低,培养14 d开始维持90%以上,细胞倍增时间约32 h。而贴壁细胞存活率是基本维持在95%以上。重组腺病毒以200,500和1 000 VP/cell的比例感染悬浮细胞所获产率均值各为18 000,14 000和990 VP/cell,而1 000 VP/cell的比例感染贴壁细胞所获产率均值为10 500 VP/cell。结论为Trex-293细胞用无动物血清的培养基在搅拌式培养瓶中可悬浮培养,当重组腺病毒感染比例为200 VP/cell,感染后48 h,细胞存活率50%时收获有利于提高病毒产率,且高于感染贴壁细胞所获产率。     

流加培养对球等鞭金藻生长和生化成分的影响

采用恒速和变速流加培养技术,研究了氮和磷等营养条件对球等鞭金藻生长和生化成分的影响．结果表明：在恒速流加培养奈件下,细胞密度、细胞干重、胞内蛋白质和叶绿素含量达到了0．870×10^7mL^-1、0．17g/L、0．14g/g和0．60mg/g的水平,分别比对照组高3．0倍、2．7倍、2．1倍和11．5倍;采用变速流加技术细胞密度、细胞干重、胞内蛋白质和叶绿素含量进一步提高到1．400×10^7mL^-1、0．24g／L、0．16g／g和0．70mg／g的水平,分别比对照组高4．9倍、3．9倍、2、5倍和13．3倍．可见,流加培养尤其是变速流加培养能有效地促进球等鞭金藻的生长．在此基础上,通过数学模型控制对变速流加的培养奈件进行了优化,获得了最适的流加条件．结果表明,当流加因子K=0．100时,球等鞭金藻的细胞密度、细胞干重、蛋白质和叶绿素含量分别达到了2．220×10^7mL^-1、0．44g／L、0．17g／g和0．70mg/g的更高水平,比对照组高6．9倍、7．7倍、2、6倍和14．1倍．     

牛肾原代细胞培养最适接种浓度的选择

为了提高口服轮状病毒活疫苗（LLR株）生产用原代牛肾细胞的产量和质量,对不同接种浓度培养的原代牛肾细胞的生长情况进行研究。将牛肾细胞按5×10^4、10×10^4、15×10^4、20×10^4、25×10^4、30×10^4个细胞/cm26个不同浓度接种到细胞培养瓶中,37℃培养,观察细胞生长情况并记录形成良好单层的时间。结果显示,接种浓度为20-30×10^4个细胞/c？的原代牛肾细胞培养8-9d时就能形成良好单层;而接种浓度小于20×10^4个细胞/cm2时,需11-12d才能形成良好单层或不能形成单层。说明在大批量培养原代牛肾细胞时,选择细胞接种浓度20-30×10^4个细胞/cm^2比较适宜。     

昆虫细胞Sf9在四种生物反应器中的培养

昆虫细胞表达系统已广泛的应用于表达各种重组蛋白,研究昆虫细胞Sf9分别在4种生物反应器:转瓶、摇瓶、Bellocell反应器、发酵罐中进行悬浮培养.转瓶、摇瓶、Bellocell和发酵罐的细胞接种密度都是5×102/mL.对细胞数量、葡萄糖浓度以及主要代谢产物乳酸、氨的浓度进行检测.昆虫细胞经转瓶和摇瓶培养,细胞密度达到最高分别为:5.5×106、7.3×106/mL,是起始密度的11倍和14.6倍.昆虫细胞经Bellocell和发酵罐培养,细胞密度达到最高分别为:8.01×106、1.52×107/mL,是起始密度的16.02倍和30.4倍.昆虫细胞经四种生物反应器中的悬浮培养之后,都达到了很高的密度,尤其是经发酵罐培养达到如此高密度,为高效大规模表达药物蛋白,奠定重要的基础.     

甲壳胺微载体培养Vero细胞实验

采用以甲壳胺为基质合成的CX－1型微载体，进行Vero细胞悬浮培养实验，结果表明，在1mg/ml甲壳胺微载体浓度下，使用RPMI1640培养基，添加10％新生牛血清，37℃培养3h，传代Vero细胞能够快速贴附于微载体上，悬浮培养24h时，细胞浓度达到2.26×10^5个／ml；培养72h时，细胞浓度达到6.89×10^5个／ml；培养120h时，细胞浓度达到7.12×10^5个／ml。电镜观察表明细胞在微载体上长势良好。说明甲壳胺微载体适合Vero细胞高密度悬浮培养。     

不同浓度血红蛋白对小鼠骨髓瘤细胞体外培养的影响

用含不同浓度的牛源性血红蛋白细胞培养液培养小鼠骨髓瘤细胞,通过细胞计数绘制生长曲线,计算最大增殖浓度和倍增时间,并进行比较分析.结果表明:当培养液的血红蛋白浓度在1~5 mg/dL时小鼠骨髓瘤细胞生长较好,细胞最大增殖浓度在1.2×106个/mL以上,倍增时间小于20 h,当培养液的血红蛋白浓度为6 mg/dL时细胞生长抑制,细胞最大增殖浓度和倍增时间为6.7×105个/mL和21.6 h.由此可见,培养液中血红蛋白浓度≤5 mg/dL时不影响细胞生长,达到6 mg/dL时抑制细胞生长.     

一种喜温蓝藻的培养条件

从厦门杏林湾温泉分离到一种喜温蓝藻Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓｅｌｏｎｇａｔｕｓｖａｒ．ａｍｐｈｉｇｒａｎｕｌａｔｕｓＣｏｐｅｌａｎｄ（Ｓ．ｅｌｏｎｇａｔｕｓＴ３）．测定了该蓝藻的培养条件．培养基ＢＧ－１１以ｐＨ７．５为宜，若添加１．２ｍｍｏｌ／Ｌ的碳酸氢钠对该蓝藻生长有利；接种量控制在接种后培养液中的细胞密度２×１０６ｃｅｌｌ／ｍＬ较好；适於生长的培养温度和光照强度分别为５５℃和２５００Ｌｘ．经计算，这种蓝藻的细胞倍增时间为６．９ｈ．     

粘虫PuA7S细胞的悬浮培养病毒增殖及其细胞克隆

粘虫ＰｕＡ７Ｓ细胞能在ＴＮＭＦＨ培养基和Ｅｘ－Ｃｅｌｌ４０５，Ｅｘ－Ｃｅｌｌ４００两种无血清培养基中实现高密度悬浮培养。在１００ｒ／ｍｉｎ搅拌条件下，ＰｕＡ７Ｓ细胞上述培养其中的最大生长密度分别为１．６５＊１０＾６细胞／ｍＬ，３．５０＊１０＾５细胞／ｍＬ和２．０２＊１０＾６细胞／ｍＬ，群体倍增时间分别为４８ｈ，４５ｈ和４２ｈ，ＡｃＭＶＰＶ能够在ＰｕＡ７Ｓ细胞悬浮系统高水平增殖，在３种培养基培养细胞     

铜绿微囊藻和斜生栅藻的组合对拟同形溞生长生殖的影响

文章研究单细胞的产毒铜绿微囊藻和斜生栅藻的组合对拟同形溞生长生殖的影响.结果表明:拟同形溞不能在纯铜绿微囊藻下生长生殖.随着斜生栅藻浓度的升高,拟同形溞的首次怀卵时间逐渐减少,而成熟体长逐渐增大.拟同形溞的首次产幼溞数、最大种群密度及最大种群增长率随着斜生栅藻浓度的增大而增大.最大种群密度和最大种群增长率均出现在2×106cells/mL的斜生栅藻浓度组,分别为302.7 ind.(200 mL)-1和0.213 d-1.在低的斜生栅藻浓度(1×105cells/mL)下,拟同形溞不产生卵鞍.在2×105~2×106cells/mL的斜生栅藻浓度下,拟同形溞产出较多的卵鞍,最大值(77.3 ind.)出现在1×106cells/mL的斜生栅藻浓度组.在较高的斜生栅藻浓度(1×106cells/mL和2×106cells/mL)下,含休眠卵的卵鞍数占总休眠卵数的比例明显高于较低的斜生栅藻浓度组(2×105cells/mL和4×105cells/mL).研究暗示,斜生栅藻浓度的增大可以减缓产毒单细胞铜绿微囊藻对拟同形溞的生长生殖的抑制作用,而卵鞍的产生和休眠卵的形成受其种群密度和铜绿微囊藻的共同影响.     

单壁碳纳米管-Nafion修饰电极同时测定硝基苯酚异构体

采用单壁碳纳米管(SWCNTs)-Nafion修饰电极作为工作电极,对邻、间、对硝基苯酚进行同时测定,实现了硝基苯酚异构体不经分离同时测定.邻硝基苯酚(o-NP)、间硝基苯酚(m-NP)和对硝基苯酚(p-NP)的线性范围分别为3.0×10-5～9.0×10-5,1.0×10-5～7.0×10-5,8.0×10-6～5.0×10-5 mol/L;检出限分别为6.0×10-6,4.0×10-6,1.0×10-6 mol/L.     

活化微碳圆盘电极用于鸟嘌呤测定的研究

以活化微碳圆盘电极为工作电极,铂电极为对电极,Ag/AgCl电极为参比电极,研究了鸟嘌呤的电化学行为。在pH=8.20的Britton-Robinson（B-R）缓冲溶液中,鸟嘌呤于0.780 V有一氧化峰。工作电极在1.0 mol·L^-1的NaOH溶液中活化5 min后,鸟嘌呤氧化电流响应明显提高。氧化峰电流和鸟嘌呤浓度在1.0×10^-6～1.0×10^-4 mol·L^-1范围内呈现良好的线性关系,检测限为6.0×10^-8 mol·L^-1。对5.0×10^-5 mol·L^-1鸟嘌呤溶液进行10次的连续重复测定,相对标准偏差为4.30%,表明稳定性良好。这种法操作简便、快速灵敏,用于实际样品阿昔洛韦片中鸟嘌呤含量的测定,结果满意。     

菌-藻体系去除水产养殖废水中氮和磷的净化实验

以投加人工饲料喂养罗非鱼7天的玻璃鱼缸内的废水为样品,接种地衣芽孢杆菌（Bacilluslicheniformis）、硝化细菌、月牙藻（Selenastrum reinsch）和四尾栅藻（Scenedesmus quadricanda）后于光照箱内培养,于0、12h、24h、48h、84h、120h、168h测定废水样品的pH值、溶解氧、氨氮、亚硝酸盐氮、硝酸盐氮和可溶性磷酸盐的去除率,以24h氨氮和168h可溶性磷酸盐的去除率为指标进行L9（34）正交实验,研究菌-藻体系去除水产养殖废水中氮和磷的净化效果。结果表明,地衣芽孢杆菌、硝化细菌、月牙藻和四尾栅藻组成的菌-藻体系可以通过其新陈代谢过程中形成的原始共生关系有效地去除养殖水体中的氮、磷污染物。菌-藻体系去除氨氮的最佳反应时间为24h,最大去除率98%,在初始密度为5×105cells/ml条件下,最佳菌-藻体积配比为1∶2∶2∶3,即最佳菌-藻初始密度分别为2.5×105cell/ml、5.0×105cell/ml、5.0×105cell/ml、10.0×105cell/ml。菌-藻体系去除可溶性磷酸盐的最佳反应时间为168h,去除率100%,在初始密度为5×105cells/ml条件下,最佳菌藻体积配比为1∶1∶3∶2,即最佳菌-藻初始密度分别为2.5×105cell/ml、2.5×105cell/ml、10.0×105cell/ml、5.0×105cell/ml。     

新月菱形藻的紫外诱变及优化培养

本实验室通过紫外诱变得到一株富含油脂的新月菱形藻BC6,在实验室条件下研究了不同温度、光照强度、pH值、N源含量、NaCl含量等培养条件对BC6生长的影响。研究结果表明：最适培养温度在20 ℃,pH值为7.5,最适光照强度为54 μE/(m2·s),NaNO3的最适添加量为105 mg/L,NaCl最适添加量为27 g/L。在优化培养条件下,最高细胞密度可达1.69×106 /mL,比优化前增大了2.2倍。     

实验条件下原甲藻与中肋骨条藻种间相互作用研究

微藻化感作用是一种极其复杂的生理、生态学现象,其在解释微藻藻种分布、群落结构及种群动力学方向起着关键作用。选择我国典型常见赤潮优势种原甲藻(Prorocentrum micans)与中肋骨条藻(Skeletonemacostatum)作为对象,研究实验室共培养条件下2种微藻种间相互作用关系。结果表明:两者以1×104 cells/mL的密度接种共培养时,原甲藻的生长状况几乎没有显著变化(F=0.004 48,P=0.947 96>0.05),而共培养的中肋骨条藻被原甲藻强烈抑制致死(F=5.116 63,P=0.047 21<0.05)。Lotka-Volterra双藻竞争模型分析知,共培养条件下原甲藻的种间竞争能力大于中肋骨条藻的种间竞争能力。在去藻滤液实验中,灭菌处理及未经灭菌处理的原甲藻去藻滤液对中肋骨条藻的生长都没有显著影响(P>0.05);中肋骨条藻-原甲藻共培养体系的去藻滤液经灭菌处理及未经灭菌处理培养中肋骨条藻时,中肋骨条藻的生长也没有显著变化(P>0.05)。可见,中肋骨条藻与原甲藻共培养时的种间相互作用,可以由细胞间的直接接触进行,而并不需要通过介质来完成。     

聚5-羧基吲哚-聚乙交酯可降解导电共聚物的合成与表征

以N,N'-二环己基碳化二亚胺(DCC)为脱水剂、4-二甲氨基吡啶(DMAP)为催化剂,通过低温缩聚法合成可生物降解并导电的聚5-羧基吲哚(PICA)与聚乙交酯(PGA)的共聚物.合成的产物采用红外光谱仪(FT- IR)、核磁共振氢谱仪(1H NMR)、质谱仪(MS)进行表征.结果表明:产物经25 d降解了41.7％,测得掺杂的共聚物电导率为9.1×10-4 S/cm.将乳仓鼠肾细胞(BHK21)黏附于合成的齐聚物膜上,细胞增殖生长效果明显.