复合诱变和原生质体融合选育S-腺苷甲硫氨酸酿酒酵母高产菌株

对生产S-腺苷甲硫氨酸（SAM）的酿酒酵母（S.cerevisiae）菌株R1进行复合诱变和原生质体融合。采用酶解法获得出发菌株S.cerevisiae R1的单倍体菌株hR10,对其进行UV和DES复合诱变,筛选出了4个单倍体正突变株DR1-3、NM14、NM39和NM45。制备了单倍体正突变株的原生质体,采用热灭活和UV灭活法灭活双亲原生质体,在聚乙二醇（PEG）的诱导下进行原生质体融合,筛选得到融合子F35,其生产 SAM的产量为22.5 mg/L,与出发菌株R1（11.1 mg/L）相比,提高了103%,并且能够稳定遗传。采用正交试验优化了F35发酵生产SAM的培养基和发酵时间,优化了的培养基配方为麦芽糖100 g/L,蛋白胨10 g/L,NH₄H₂PO₄4g/L,NH₄Cl₅g/L,MgSO₄0.1g/L,KH₂PO₄6 g/L,发酵时间为72h。     

植物和微生物合成2-苯乙醇的研究进展

2-苯乙醇是一种有广泛用途的香味物质,对其他香味在食品、烟草和化妆品等日化产品有增效作用.介绍了目前2-苯乙醇在植物和微生物中的代谢机理和最新研究进展,并对其研究前景进行了展望.     

酿酒酵母的双亲株原生质体灭活融合研究

把两株酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)S_1、S_2的原生质体分别用紫外线(U.V)和碘乙酰胺灭活或只用紫外线灭活,经PEG诱导融合后,在完全培养基上得到了融合子。融合频率为(0.98-2.13)×10~(-7)。融合子的细胞形态、DNA含量等都和亲株有明显差别,并在生产特性上有某些改进。     

浓醪酒精发酵酵母菌的选育

以本研究室保藏酵母菌Y316作为出发菌株,经紫外线诱变处理原生质体,再生菌通过初筛,复筛,选育出酒精高产菌株Y316-23,在料水比1∶1.8,发酵60h的条件下,成熟醪酒精的体积分数可达13.5%以上.     

高光学纯度2-氯-1-苯乙醇的酶法合成

为实现手性2-氯-1-苯乙醇两个高纯度对映体的酶法合成,考察了多种脂肪酶的动力学拆分效果,并探讨了有机溶剂、温度以及水活度对脂肪酶催化拆分(R,S)-2-氯-1-苯乙醇的影响,研究了固定化酶的重复利用性.结果表明:一种来自Pseudomonas cepacia的固定化脂肪酶Lipase PS IM,在正己烷体系、35℃和水活度0.69时,能同时得到两个高纯度的对映体(ee_p 99%,ee_s 99%);经过5次重复反应后Lipase PS IM的相对酶活仍有85%.     

纤维素酶高产菌选育研究进展及未来趋势

纤维素是地球上最丰富、最廉价、年产量巨大的可再生资源.合理开发和科学科用这一丰厚天然资源是世界各国研究开发的重点领域.利用纤维素酶的作用,把纤维素水解成葡萄糖等物质,进一步发酵生产酒精、单细胞蛋白、有机酸等人类急需的能源食物和化工原料等。不仅可以使纤维素变废为宝,而且可以避免由于化石燃料燃烧所带来的环境污染,更重要的是可以缓解或解决石化能源短缺、枯竭所带来的世界性能源危机以及因石油短缺引起的国际问题等.筛选出产高活性纤维素酶的菌株是开发利用纤维素资源的前提和关键.本文总结纤维紊酶高产菌选育的国内外研究进展,概括了迄今为止筛选出的纤维素酶高产菌的微生物种群及其产酶特点,以及诱变育种、原生质体融合技术育种、纤维素酶基因克隆的国内外研究现状。对今后纤维素酶高产菌的选育研究未来发展趋势做了全面的分析和综述.     

脂肪酶催化拆分2-氯-1-苯乙醇

手性2-氯-1-苯乙醇这一关键的药物中间体,已被酶法合成。经过筛选多种脂肪酶,一种新的商业化的来自Pseudomonas cepacia固定化脂肪酶PS IM,表现出最高的活力。同时首次发现小麦胚芽脂肪酶（WGL）具有与其他脂肪酶相反的立体选择性。并系统探讨了溶剂体系,温度以及水活度对PS IM催化拆分2-氯-1-苯乙醇的影响。最终发现在正己烷体系,35℃和水活度0.69时,获得最好的分离效果,能同时得到两个高纯度的对映体（eep 99%,ees 99%）。PS IM在经过5次重复反应之后的活力约保留了85%。     

木糖发酵重组酿酒酵母研究进展

近年来针对木质纤维素类原料生物转化乙醇的研究引起了广泛关注。乙醇的高产依赖于木质纤维素水解液中六碳糖和五碳糖的共同发酵。但是,传统产乙醇酵母酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae 既不能发酵木糖, 也不能利用该五碳糖生长。因此, 研究人员尝试各种方法构建重组酵母菌以提高木糖发酵能力。作者综述了木糖发酵重组酿酒酵母菌的研究进展,包括天然木糖发酵微生物、木糖代谢途径、S. cerevisiae 的代谢工程、原生质体融合以及基因组改组技术, 同时也对目前研究存在的问题及研究前景进行了讨论。     

利用原生质体融合提高酿酒酵母赖氨酸含量的研究

以酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae)为出发菌株，经N-甲基-N‘-亚硝基胍（NTG）和紫外线（UV）诱变，选育出抗S-（2-氨基乙基）-L-半胱氨酸（AEC）和抗氯化理（LiCl)的抗药性菌株作为融合新株的细胞质基因标记。用100mg/ml蜗牛酶制备亲株的原生质体，两亲株的原生质体在35%PEG（MW6000），0.01mol/L CaCl2条件下被诱导融合，融合频率为10^-6 - 10^-7。试验表明，这些融合菌株具有杂种性质。其中一株产胞外赖氨酸的能力比亲株明显增强。     

啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)营养缺陷型的筛选及原生质体融合

本文采用营养缺陷型的互补进行了啤酒酵母原生质体融合产物的筛选。从DNA含量分析看,融合子多为三倍体,少数为四倍体,融合子的生长速度和酒精产率都比亲株高,种内原生质体融合率为1.21×10~(-4)。     

啤酒酵母和异常汉逊酵母属间原生质体融合

本文探索了用不可逆生化抑制剂(碘乙酸)抑制—亲株细胞某些酶活性的同时,利用两亲株细胞生理性差异作为啤洒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和异常汉逊酵母(Hansenula anomala)原生质体融合选择性标记的可行性。结果表明这一选择系统简便、可靠和适用。属间原生质体融合率为1.48-2.25×10~8。经菌落形态比较,碳化合物的发酵和同化,DNA含量测定,酯酶型分析,细胞核染色和自然核分离实验,结果表明从选择性培养基上筛选到的菌株分为三种类型:84.4％异常汉逊酵母型:10.4％啤酒酵母型:5.2％是真正核融合子型。本文还讨论了三种类型菌株出现的机理。     

啤酒酵母原生质体融合株HN31-6的啤酒酿造中试研究

为了考察啤酒酵母融合株HN31-6的啤酒酿造生产性能,以12.5°Bx麦芽汁为培养基,用500 L发酵罐在12℃下发酵,发酵期间每天取样测定发酵液的发酵度和酒精度以及发酵液的双乙酰、乙醛、高级醇和酯类等挥发性物质的含量.结果表明:在上述条件下,发酵14 d,发酵液的发酵度和酒精度分别为69.9%和4.46%;双乙酰和乙醛的含量分别为0.036 4 mg/L和4.53 mg/L;异戊醇、异丁醇和正丙醇的含量分别为46.47、8.34和9.82 mg/L,总高级醇的含量为64.6mg/L;甲酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸异丁酯、乙酸异戊酯和己酸乙酯的含量分别为0.132、21.92、0.037、2.22和0.293 mg/L,总酯为24.6 mg/L;该菌株的发酵度以及发酵液的酒精、双乙酰、乙醛、总高级醇和一些酯类等的含量均达到国家优质啤酒的标准,啤酒口感良好.该融合株在啤酒酿造生产中具有很好的应用前景.     

酿酒酵母的连续复合诱变及其突变株的快速筛选

为了获得高产的工业用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)菌株,利用己烯雌酚(DES)和UV对酿酒酵母菌QD进行连续复合诱变,采用改进的发酵小管集气法结合乙醇定量测定来进行突变株的筛选,并与常规复合诱变及筛选方法进行比较.结果表明:连续复合诱变的正向突变率最大值为18.9%,与常规诱变方法的最大正向突变率15.6%相比提高了21.2%,说明运用该诱变方法能获得较高的正向突变率;改进的筛选方法可以快速筛选出目的突变株,同时,获得了一株高产乙醇的突变株,在甘蔗汁发酵培养基中其乙醇产量达到9 720 mg/100 mL,比常规诱变方法筛选到的突变株乙醇产量(9 170 mg/100 mL)高出6.0%;与常规诱变方法相比,连续复合诱变方法不仅能够得到较高的正向突变率,而且能够获得更加高产的突变株.     

Ca~(2 )对酿酒酵母与粟酒裂殖酵母细胞增殖的影响

SD培养基中外加不同浓度的Ca2 可促进酿酒酵母与粟酒裂殖酵母细胞的增殖 ,但在促进增殖方式上存在明显差异 .随SD培养基中外Ca2 浓度增加 ,酿酒酵母到达稳定期的细胞终浓度也越高 ;而粟酒裂殖酵母生长到达稳定期细胞终浓度随Ca2 浓度增加而增加的效应不明显 .同时SD培养基中外加Ca2 对酿酒酵母的促进作用主要是通过加快生长对数期细胞分裂速度 ;对粟酒裂殖酵母主要是靠缩短生长延滞期来促进增殖 .     

重组真菌细胞色素P450nor2在酵母细胞中的表达

酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）是一种理想的真核蛋白表达系统．将真菌细胞色素P450nor2基因亚克隆到酵母表达载体pAUR123中,构建重组表达质粒pAUR-P450nor2并转化酿酒酵母AH22,经Aureobasidin A筛选和菌落PCR鉴定得到阳性克隆．SDS-PAGE分析证实：重组的真菌细胞色素P450nor2在酵母细胞中实现了高表达．     

酿酒酵母吸附Zn2+的特性及其动力学研究

为利用啤酒酵母生物吸附去除重金属离子,以酿酒酵母为例,研究了无缓冲溶液体系对Zn离子的吸附特性和动力学。结果表明,当Zn2 的初始浓度是5.23~52.32 m g.L-1,酵母浓度约1.0 g.L-1时,初始pH值约5.6,反应38 h时,酵母对Zn2 吸附量为2.57~42.82 m g.g-1,去除率达到76.4%~92.8%,pH值升高0.55~1.28。酵母吸附Zn2 的动力学过程复杂,高浓度条件下脱附现象严重,仅部分反应时段符合准二级动力学方程。Zn2 初始浓度越高,准二级速率方程的常数越低,初始反应速率越快。酿酒酵母可以用于吸附除去水体中的Zn离子。     

酿酒酵母中心代谢网络动力学建模

以酿酒酵母中心代谢网络为研究对象进行代谢网络动力学模拟,将酶反应速率方程改写成普适的形式,模拟了以葡萄糖为碳源的一次生长代谢状态,计算得到了代谢网络达到稳态的代谢流分布以及全部代谢物浓度随时间变化的情况,并将模拟得到的代谢流分布与实验结果进行了比较,结果具有一致性.