免疫外科法分离牛卵巢颗粒细胞核

实验旨在用制备的兔抗牛脾脏细胞免疫血清去除牛颗粒细胞膜,将得到的完整的细胞核分离纯化以应用于核移植胞质内注射.首先用牛脾脏细胞免疫健康成年兔,注射五周后将兔子放血,分离得到高效价的免疫血清,分装冷藏;然后,解冻适量血清,与牛颗粒细胞反应,观察凝聚现象和破膜反应.结果表明,免疫学方法可以批量破除细胞膜,该法为体细胞核移植方法的改进提供了一条新的思路,值得为相关研究所借鉴.     

转基因和再克隆对克隆胚胎细胞凋亡的影响

细胞凋亡在着床前胚胎发育过程中发挥着重要作用,胚胎凋亡检测能为获得高质量的体细胞克隆胚胎提供有益信息,进而有助于提高克隆效率.用原位末端标记法对牛的转基因克隆和转基因再克隆囊胚进行了细胞凋亡检测,再克隆囊胚是利用转基因克隆牛的体细胞作为供体细胞进行体细胞核移植后获得的第二代克隆胚胎.结果表明转基因克隆胚胎的囊胚发育率显著低于非转基因克隆胚胎的囊胚发育率,而转基因克隆囊胚的细胞凋亡指数显著高于非转基因克隆胚胎的细胞凋亡指数.此外,转基因再克隆胚胎的囊胚发育率和胚胎细胞凋亡指数与非转基因克隆胚胎的囊胚发育率和胚胎细胞凋亡指数相比差异性不显著.结果表明早期的转基因克隆胚胎发育能力的减弱可能是由于供体细胞的基因转染和药物筛选过程导致的,而再克隆对其早期胚胎的发育能力没有负面影响.     

牦牛繁殖科学研究进展

主要分析总结了近五年来牦牛繁殖科学在生殖内分泌调节机制、诱导发情与同期发情、超数排卵、牦牛及牦牛与普通牛体外受精、牦牛与普通牛异种体细胞核移植等方面的研究进展和存在的问题,并提出了如何将这些研究进展应用到牦牛生产中以提高牦牛业的经济效益以及进一步开展牦牛繁殖科学研究的思路.     

浅谈细胞核移植的两种技术

本文着重概述了细胞核移植的两种技术。国内外科学家对细胞核移植的研究情况，说明了细胞核移植技术在生物学中的重要地位和在医学方面的作用及其经济价值．     

访转基因牛“滔滔”之“父”

今年1月,上海医学遗传研究所开展的转基因牛的研究成果,被评为中国1999年十大基础研究成果,并名列榜首。转基因牛“滔滔”(携带人白蛋白基因)和它的培育者——曾溢滔、黄淑帧夫妇,引起传媒和广大读者的浓厚兴趣。为此,《转基因动物与生物制药》一书的编辑方鸿辉专门就该课题对中国工程院院士曾溢滔进行了访谈。     

利用体细胞核移植技术生产黄牛和水牛同种、异种转基因克隆囊胚

以含neo和GFP基因双标记的水牛、黄牛胎儿成纤维细胞进行牛转基因体细胞核移植,结果发现：阿菲迪霉素可有效将胎儿成纤维细胞同步于G0／G1期;以GFP阳性细胞进行核移植,其卵裂率、囊胚率与对照组间无显著差异（P〉0．05）,所构建的重组胚,2-细胞阶段观察不到GFP的表达,4-细胞以后GFP的表达逐渐增强,在囊胚的内细胞团和滋养层细胞均可检测到GFP的表达,将黄牛同种转基因克隆囊胚进行移植,获得1例妊娠;黄牛卵母细胞-水牛供核细胞构建异种重组胚囊胚率显著高于黄牛供核细胞-水牛卵母细胞构建的异种重组胚（P〈0．05）,并且异种核移植重组胚中可检测到GFP表达,GFP可作为异种核移植胚胎来源的一种新标记．     

抗草甘膦转基因大豆对雄鼠睾丸的影响

以雄性昆明小鼠为动物模型,分别以抗草甘膦转基因大豆和非转基因大豆饲料喂食,于30、90 d后,取其睾丸.采用流式细胞术检测睾丸组织中各生殖周期细胞比例、Hoechst33258染色观察睾丸细胞凋亡、组织化学染色技术观察睾丸组织病理学变化.研究抗草甘膦转基因大豆对雄鼠睾丸的影响.结果显示,30、90 d实验组和对照组小鼠睾丸精细胞单倍体、2倍体、4倍体比例均正常且趋于稳定,单倍体比例占主导地位,且实验组与对照组相比无统计学差异.在荧光显微镜下实验组睾丸细胞的细胞核呈正常的蓝色,与对照组相比,未发现明显的细胞核呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染,颜色有些发白的凋亡细胞.组织病理观察也未发现两组小鼠的睾丸出现明显病理损伤.30 d喂食抗草甘膦转基因大豆急性毒理研究和90 d喂食抗草甘膦转基因大豆亚慢性毒理研究对雄鼠睾丸均无显著影响.     

甜菊叶肉细胞脱分化高尔基体超微结构观察

应用电镜观察脱分化的甜菊叶肉细胞高尔基体与叶绿体、细胞核和微体的关系,结果如下:1)高尔基体成熟面紧贴正在分化的叶绿体,高尔基小泡沿着叶绿体外膜移动,2)高尔基体靠近细胞核,其成熟面向着细胞核;高尔基小泡经核孔进入细胞核内,3)高尔基体与微体靠近,高尔基小泡移向微体并沿着微体膜移动。     

影响体细胞核移植重构胚发育的因素

目前已有多种动物被成功克隆,但存在着诸多未知因素,使体细胞核移植重构胚发育至囊胚阶段的比例过低,克隆动物存在早衰等异常现象.该文围绕这产生这些现象的根本原因、高度分化的体细胞核移入卵质后所发生的分子事件以及其影响因素如体细胞的来源和培养代数、细胞周期、核质相互作用、细胞核再程序化、线粒体等方面对体细胞核移植重构胚发育的影响等进行综述.     

转基因小鼠乳腺表达人乳过氧化物酶的初步研究

从人基因组PAC文库中筛选出人乳过氧化物酶（hLPO）基因,利用长片段PCR的方法获得hLPO基因5’端约3kb片段,通过酶切方法获得hLPO基因3’端约27kb片段,将这两部分拼接并克隆到乳腺特异性表达载体pBC1上,构建以山羊β-casein启动区指导的hLPO的转基因表达载体pBC1-hLPO。利用显微注射的方法获得28只FO代小鼠,经PCR检测和Southerm杂交分析证实,有5只小鼠（4♂,1♀）为整合hLPO基因的转基因阳性小鼠,整合率为17.86％,整合拷贝数在1至5之间。利用SDS-PAGE凝胶电泳和Western blot印迹分析FO、F1代共3只雌性转基因小鼠乳样,结果表明hLPO重组蛋白的特异条带不明显。     

转基因动物的研究现状及展望

介绍了转基因鼠、转基因猪、转基因鱼、转基因牛的研究现状和产生的效益,展望了转基因动物的发展前景,并对其未来发展提出了建议。     

客观地认识动物克隆问题

要获得遗传物质完全相同的生物体,必须应用克隆技术。克隆（ｃｌｏｎｅ）即无性繁殖系,指单一的亲代细胞通过无性繁殖而产生的一组细胞。克隆动物是把动物的细胞核转移到成熟的去核卵细胞质内而发育成的动物个体,它可分为胚型克隆和无性克隆两种。胚型克隆动物是指用早期胚胎细胞核作供体移植、克隆所形成的动物。其主要克隆方式有胚胎分割,胎细胞核移植、胚胎干细胞核移植、胎儿成纤维细胞核移植和胚胎嵌合。目前世界上已经完成了对小鼠、家兔、山羊、绵羊、猪、牛、马等动物的胚胎分割克隆;用胚胎细胞核移植技术克隆成功了小鼠、家兔…     

PRELIMINARY STUDY ON REPRODUCTION TRAITS OF THE ItlRUDINARIA MANILLENSIS

为确定菲牛蛭（Hirudinaria manillensis）体质量、年龄和应激刺激与菲牛蛭繁殖性能的关系,采用单因素方差分析在不同体质量、年龄、应激次数条件下,菲牛蛭的产卵和孵化情况.结果显示：不同体质量菲牛蛭亲本其繁殖能力有显著差异（P〈0.05）,体质量为10～〈15g亲本产茧数最多,卵茧孵化率和孵化数最高;不同年龄菲牛蛭亲本,其繁殖能力差异显著（P〈0.01）,实验中2～3龄亲本产茧数最多,卵茧孵化率和孵化数最高;适当的环境刺激对菲牛蛭的繁殖有促进作用,实验中1或2次操作刺激对菲牛蛭亲本产茧数、孵化率和孵化数均有明显的增加（P〈0.01）.建议在菲牛蛭人工繁殖过程中,选取10～〈15g体质量、2～3年龄亲本进行繁殖,同时在繁殖过程中可适当对亲本进行1或2次刺激.     

菲牛蛭繁殖性能的初步研究

为确定菲牛蛭(Hirudinaria manillensis)体质量、年龄和应激刺激与菲牛蛭繁殖性能的关系,采用单因素方差分析在不同体质量、年龄、应激次数条件下,菲牛蛭的产卵和孵化情况.结果显示:不同体质量菲牛蛭亲本其繁殖能力有显著差异(P0.05),体质量为10～15g亲本产茧数最多,卵茧孵化率和孵化数最高;不同年龄菲牛蛭亲本,其繁殖能力差异显著(P0.01),实验中2～3龄亲本产茧数最多,卵茧孵化率和孵化数最高;适当的环境刺激对菲牛蛭的繁殖有促进作用,实验中1或2次操作刺激对菲牛蛭亲本产茧数、孵化率和孵化数均有明显的增加(P0.01).建议在菲牛蛭人工繁殖过程中,选取10～15g体质量、2～3年龄亲本进行繁殖,同时在繁殖过程中可适当对亲本进行1或2次刺激.     

育成牛不同月龄配种对其体尺发育的影响

通过对 2 0头育成牛不同月龄配种后体尺指标测定 ,发现 18月龄是育成牛体尺发育最好的初配时期 得出的最终结果是育成牛 18～ 2 1月龄时间段内越早配种 ,体尺发育越快     

栉孔扇贝精子形成中的核变化与顶体形成

透射电镜下观察了栉孔扇贝精子形成过程中的核变化与顶体形成。在次级精母细胞时期，胞质内出现致密的前顶体颗粒；精子形成早期，前顶体颗粒融合、增大后逐渐成为前顶体；最后，前顶体覆盖在细胞核的前端形成锥状的顶体，与此同时，细胞核发生致密，体积逐渐缩小，由圆球形变成长柱状的精子核。     

中国血蛤精子超微结构的研究

利用透射电镜研究了中国血蛤成熟精子的超微结构,研究结果表明中国血蛤的精子为原生型,由头部、中部和尾部构成.精子头部由顶体、亚顶体腔和细胞核组成.顶体呈圆锥形,电子密度比较均匀,顶体长度约为细胞核长度的5/8;亚顶体腔内含有中等电子密度物质;细胞核呈圆柱形,核长度为(1.36±0.05)μm,核宽度为(1.24±0.07)μm(n=42).精子中段由4个近椭圆形的线粒体和2个相互垂直的中心粒组成.尾部鞭毛为典型的"9+2"结构.     

小菜蛾颗粒体病毒在离体细胞内的形态发生

用小菜蛾颗粒体病毒侵染家蚕胚胎细胞系Ｂｍ－２１Ｅ－ＨＮＵ５，对受梁细胞的超薄切片做电镜观察，在攻毒后１２０ｈ的受梁细胞核内开始发现病毒发生基质、核衣壳和病毒粒子，病毒粒子以出芽方式通过细胞核膜排出核外，攻毒后，１４４ｈ蒴状体所在囊膜和细胞核中可见大量小膜泡。     

小鼠表皮生长因子对人胚眼角膜上皮组织增殖效应的研究

报道了人胚眼角膜上皮组织离体培养试验，结果表明，小鼠颌下腺表皮生长因子，对离体培养人胚眼角膜上皮组织，具有明显促进细胞增殖和分化的效应。培养４ｄ的实验组角膜上皮组织厚度、上皮细胞增殖层数以及角膜上皮层细胞核数量，均较正常人胚角膜上皮细胞增长２倍，角膜上皮组织结构中基底细胞核数与表层细胞核数的比率较正常人胚角膜上皮细胞增长３倍。     

几种水蛭抗凝血物质提取及活性分析

 研究3种提取方法对菲牛蛭不同处理品的抗凝作用,采用筛选的最佳提取方法分析了5种水蛭各处理品的抗凝血酶活性,并比较了3个不同地理分布野生菲牛蛭和2个不同饵料饲喂菲牛蛭各处理品的抗凝血酶活性。结果表明：丙酮浸提法在菲牛蛭各处理品中均具有最高的提取得率,所测抗凝血酶活性显著高于其他方法（P<0.05）;5种水蛭抗凝血酶活性测定结果显示非吸血蛭类的湿体匀浆液和干体无或微弱的抗凝活性,而吸血蛭类（日本医蛭和菲牛蛭）具有较高抗凝活性,且菲牛蛭的抗凝活性显著高于日本医蛭(P<0.01);不同地理分布野生菲牛蛭和不同饵料饲养菲牛蛭的湿体匀浆液、干体粉末和唾液腺分泌物抗凝活性均无显著差异（P>0.05）。研究表明菲牛蛭具有较强的体外抗凝血酶活性,且人工养殖对菲牛蛭的抗凝活性未产生不利影响。