利多卡因对人角膜上皮细胞的毒性作用及其机理研究

利用不同浓度利多卡因（ｌｉｄｏｃａｉｎｅ）处理体外培养的人角膜上皮（ＨＣＥＰ）细胞系细胞,利用光镜观察、ＭＴＴ、荧光染色、ＤＮＡ电泳、ＴＵＮＥＬ、流式细胞仪和透射电镜方法研究了利多卡因对 ＨＣＥＰ细胞的毒性作用及其机理。光镜观察和 ＭＴＴ检测结果显示,质量浓度 １２５～１０００ｇ／Ｌ的利多卡因对 ＨＣＥＰ细胞具有显著的毒性作用,并具有浓度和时间依赖性;ＡＯ／ＥＢ荧光双染色结果显示,质量浓度 ０６２５～１００００ｇ／Ｌ的利多卡因可引起 ＨＣＥＰ细胞的质膜通透性显著提高,细胞凋亡率也具有浓度和时间依赖性;ＤＮＡ电泳和 ＴＵＮＥＬ检测结果显示,利多卡因能引起 ＨＣＥＰ细胞发生 ＤＮＡ断片化;ＴＥＭ观察结果显示,利多卡因能引起 ＨＣＥＰ细胞的超微结构出现了凋亡细胞的形态结构特征,如胞质空泡化、染色质浓缩、线粒体膨胀且嵴的结构紊乱、出现凋亡小体等;ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ染色的流式细胞仪检测结果显示,利多卡因能引起 ＨＣＥＰ细胞质膜中的磷脂酰丝氨酸（ＰＳ）发生外翻变化;ＥＬＩＳＡ检测结果显示,利多卡因还能引起 ＨＣＥＰ细胞中胱冬肽酶3、8、9、10表达量的增加,表明利多卡因确能引起 ＨＣＥＰ细胞发生细胞凋亡,而不是细胞坏死。由此可见,利多卡因在质量浓度大于 0.625ｇ／Ｌ时对 ＨＣＥＰ细胞具有显著的细胞毒性,并具有浓度和时间依赖性,且其毒性作用的发挥是通过诱导细胞凋亡实现的,在眼科临床应用中具有很大的毒副作用,应谨慎使用。     

Bc1-2 基因加强表达对 OA 诱发的细胞编程死亡的效应

ＯＡ能诱发人神经母细胞瘤ＳＫ细胞进行编程死亡．死亡细胞缩小变圆，细胞质凝聚，ＤＮＡ有控降解成约２００ｂｐ左右的片段，且这一过程可由蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮（ＣＨＸ）抑制．将编码Ｂｃ１－２全长蛋白质的ｃＤＮＡ植入ｐＸＪ４１ｎｅｏ载体中，使其表达由ＨＣＭＶ病毒启动子控制．形成的顺义（ｐＢｃｌ－２－Ｓ）及反义（ｐＢｃｌ－２－ＡＳ）表达质粒经转染导入ＳＫ细胞中获得稳定转染子，Ｗｅｓｔ－ｅｒｎ印迹表明顺义转染子表达较大量的２６ｋｄＢｃ１－２蛋白，而反义转染子则不表达．增强表达的Ｂｃ１－２基因产物对ＯＡ引ＳＫ细胞编程死亡无抑制效应．     

红细胞生成素(EPO)在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中稳定表达

将ＥＰＯｃＤＮＡ分别插入真核表达质粒载体ｐＳＶ２ｄｈｆｒ和ｐｃＤＮＡ３的适当位点,用电脉冲法导入ＣＨＯ细胞,用ＥＬＩＳＡ法检测ＥＰＯ的表达量,用ＴＦ１细胞检测ＥＰＯ表达产物的生物活性．结果表明,用ｐＳＶ２ｄｈｆｒ作为载体,在抗ＭＴＸ阳性细胞克隆中,获得了表达ＥＰＯ（２５８ｎｇ／ｍＬ培养液）的ＣＨＯ细胞株,并且表达产物具有生物活性．进一步的传代和冻存试验表明,所得细胞株表达ＥＰＯ的水平不受传代和冻存的影响     

维生素C或H2O2系统中HO对DNA的损伤作用

采用紫外分光光度法，ＴＢＡ法，琼脂糖凝胶电泳法检测维生素Ｃ或Ｈ２Ｏ２体系对ＤＮＡ的作用，发现ＤＮＡ在２６０ｎｍ处吸光值下降，检测到ＤＮＡ的脱氧核糖损伤，观察到ＤＮＡ链降解，痕量的过渡金属离子Ｆｅ＾２＋等能加速上述反应的进行，各种ＨＯ清除剂可抑制上述反应。表明在上述两类反应体系中产生了ＨＯ，是ＨＯ破坏ＤＮＡ的碱基和脱氧核糖，降解ＤＮＡ链。     

反义HSP90诱导HeLa细胞凋亡的研究

目的 探讨反义ＨＳＰ９０降低ＨｅＬａ细胞恶性度的机制。方法 经荧光染色观察细胞形态,ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ及流式细胞仪检测凋亡细胞。结果 转染有反义ＨＳＰ９０的ＨｅＬａ细胞经荧光染色细胞呈不均一亮蓝色,荧光染色观察可见细胞变小,染色质浓缩并产生凋亡小体,ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ可见明显的梯形条带,流式细胞仪检测有凋亡的细胞。结论 反义ＨＳＰ９０可诱导细胞凋亡。     

血管内皮细胞凋亡过程中几种癌基因表达的研究

为了研究细胞凋亡的分子调控机制,用光学显微技术、ＤＮＡ凝胶电泳和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法,研究了去除生长因子和蛇诱导的两个血管内皮细胞凋亡系统中ｐ５３、ｃ－Ｈｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ和ｂｃｌ－２基因的表达。发现去除生长因子诱导细胞的凋亡过程中,Ｐ５３基因表达显增加,ｃ－Ｈ－ｒａｓ和ｃ－ｍｙｃ基因表达无变化;蛇毒诱导细胞凋亡过程中,Ｐ５３有达显增加ｃ－Ｈ－ｒａｓ和ｃ－ｍｙｃ基因表达无变化。在正常生     

慢性乙肝病毒感染者外周血单个核细胞染色体遭受病毒损害的见证

用Ｓｏｕｔｈｅｍ　ｂｌｏｔ分子杂交技术，检测９９例ＨＢＶＭ阳性的慢性ＨＢＶ感染者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）内ＨＢＶＤＮＡ的存在状态，其中７１例同时用ＢｒｄＵ标记法检测细胞中姊妹染色体交换（ＳＣＥ）率，观察ＨＢＶ对宿主单个核细胞染色体的损害情况。结果发现４２例被检者（４２．４２％）的ＰＢＭＣｓ中存在ＨＢＶＤＮＡ（游离型或整合型，有的还见到游离的复制中间体），正常对照组则无１例检出ＨＢＶＤＮＡ。被检者ＰＢＭＣｓ的平均ＳＣＥ率明显高于对照组，其中ＨＢＶＤＮＡ（＋）组又显著高于ＨＢＶＤＮＡ（－）组。证明ＨＢＶ的入侵与ＳＣＥ率升高之间有密切关系，提示ＨＢＶ对单个核细胞染色体形成了损害。这一现象可能是慢性乙肝病毒感染者免疫功能紊乱和ＨＢＶ长期不能清除等系列表现的原因之一。     

Ce(NO3)3对不同细胞DNA的损伤作用研究

以体外培养３Ｔ３ 细胞和ｌｏｖｏ 细胞为研究对象, 运用单细胞凝胶电泳技术, 探讨了Ｃｅ（ＮＯ３）３ 对这２ 种细胞ＤＮＡ 的损伤作用．结果表明Ｃｅ（ＮＯ３）３ 对２ 种细胞均有损伤作用： 低浓度（１ ｍｍｏｌ／Ｌ） 时,ｌｏｖｏ 细胞的ＤＮＡ 损伤率要明显高于３Ｔ３ 细胞ＤＮＡ 的损伤率, 高浓度（５ｍｍｏｌ／Ｌ） 时, 则２ 种细胞的损伤率几近相同, 提示较低浓度Ｃｅ （ＮＯ３） 对正常细胞和癌细胞存在着不同的作用, 稀土对癌细胞具有选择性杀伤作用; Ｃｅ （ＮＯ３） 具有一定的遗传毒性     

CHO细胞胞质分裂阻断微核技术的研究

使用胞质分裂断微核（ＣＢＭＮ）法，采用ＣＨＯ细胞评价一些环境因子造成的染色体损伤和细胞毒性，当细胞松驰素Ｂ（ＣＢ）的剂量为６ｍｇ．Ｌ＾－１，作用时间４０ｈ时，不能获得一个含有适宜数量又核细胞和多核细胞的ＣＨＯ细胞体系，利用这一体系，研究了这一种标准的实验室致突变剂丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）对ＣＨＯ细胞的影响，在实验剂量范围内，得到了可重复诱导微核形成的效果，并与其它实验室的研究结果一致，此外还检测了另外     

小鼠金属硫蛋白基因—I在CHO细胞中稳定表达及其在医疗…

将小鼠的ＭＴ－Ｉ基因插入ｐＳＶ２－ｄｈｆｒ质粒的ＥｃｏＲＩ位点，构建了具有ＳＶ４０和ＭＴ双启动子并正向插入ＭＴ－Ｉ基因的表达载体。用改良的磷酸钙／ＤＮＡ沉淀法将表达载体导入ＣＨＯ－ｄｈｆｒ＾－细胞内，用不含次黄嘌呤（Ｈ）和胸腺嘧啶（Ｔ）的选择培养基筛选出稳定表达ＭＴ阳性克隆Ｄ－２２，经检测１０＾６细胞的ＭＴ表达量约为１．８μｇ，Ｄ－２２细胞对Ｃｄ＾２＋浓度抗性较之ＣＨＯ－ｄｈｆｒ＾－细胞高１４倍。     

虾青素抑制H2O2诱导的HeLa细胞凋亡

为了阐明虾青素的抗氧化作用与细胞凋亡的关系,探究虾青素预处理对H_2O_2诱导HeLa细胞氧化应激的影响.通过CCK-8、活性氧探针染色、流式细胞术、蛋白质免疫印迹、实时荧光定量pcr等,分别检测细胞存活率和活性氧的积累、细胞凋亡、蛋白含量、基因相对表达量改变.结果表明虾青素预处理组细胞活力较对照组提高了29.54%以上且其可以将H_2O_2诱导的活性氧降低至对照水平,同时提高Nrf2蛋白表达量3倍之多,过氧化氢酶基因相对表达量1.5倍.说明虾青素可以有效缓解H_2O_2诱导的HeLa细胞氧化应激,从而抑制细胞凋亡.     

H2O2诱导烟草悬浮细胞的凋亡

烟草悬浮细胞经不同浓度的过氧化氢处理发现 ,当用 6mmol L的H2 O2 处理时从形态学上可观察到明显的染色质凝聚 ,细胞质皱缩和细胞核解体等现象 ;DNA电泳结果显示发生凋亡的细胞基因组DNA被降解形成明显的DNA梯状条带 ,从而表现出典型的细胞凋亡特征 .其他高浓度的处理也有以上特征 ,但细胞坏死数目也相对增多 ,因此本研究认为 6mmol L的H2 O2 处理 2 4h能够非常有效地诱导烟草悬浮细胞的凋亡 .     

Involvement of NADPH oxidase NtrbohD in the rapid production of H2O2 induced by ABA in cultured tobacco cell line BY-2

The mechanisms for the production of hydrogen peroxide （H2O2） induced by abscisic acid （ABA） were investigated in suspension culture cells of tobacco BY-2 cells. The results showed that the immediate generation of H2O2, which was mainly derived from super-oxide dismutase-catalyzed dismutation of superoxide radical, was significantly induced by ABA. Furthermore, treatment of the cultured tobacco cells with ABA resulted in a time-dependent quick increase in plasma membrane （PM） NADPH oxidase activity, which coin- cided on time and magnitude with the elevation in ABA-induced accumulation of H2O2. Moreover, these enhanced effects were pro- nouncedly inhibited by two NADPH oxidase inhibitors, diphenylene iodonium and imidazole, suggesting that PM NADPH oxidase is involved in the rapid accumulation of H2O2 in cultured tobacco cells. In addition, analysis of the expression level of NtrbohD, a PM NADPH oxidase gene in tobacco, by RT-PCR and protein gel blot revealed that the gene at both mRNA and protein levels was upregulated by ABA, indicating that NtrbohD participates in the ABA-stimulated rapid production of H2O2 in tobacco culture cells. Taken together, these findings suggest that ABA induces the rapid accumulation of reactive oxygen species via NADPH oxidase in sus-pension culture cells of tobacco, and that NADPH oxidase and H2O2 appear to be important components in ABA signal transduction pathway in plants.     

Protein tyrosine phosphatases involved in signaling of the ABA-induced H2O2 generation in guard cells of Vicia faba L.

Although protein tyrosine phosphatases (PTPases) play an important role in signal transduction in animal cells, little is known about the function of PTPases in higher plants. Hydrogen peroxide (H2O2) and mitogen-activated protein kinases (MAPKs) are the critical components of ABA signaling pathway in guard cells. PTPase is an important regulator of MAPK, which is believed to mediate ABA-induced H2O2 generation in guard cells of Vicia faba L. Here, we investigate the possible role of PTPases in stomatal movement process. Phenylarsine oxide (PAO), a specific inhibitor of PTPases, could prevent ABA or H2O2-induced stomatal closure of Vicia faba L; furthermore, it could promote opening of the stomata closed by ABA or H2O2. The activity of PTPases can be effectively inhibited by PAO and H2O2. DTT had no effect on the PAO-induced inhibition of PTPases activity, but it could relieve the inhibition of H2O2 on PTPases activity. PAO could also inhibit the ABA-induced H2O2 generation in guard cells of V‘wia faba L. These results suggested that PTPases is a critical signaling component in ABA-induced stomatal closure, and serve as targets for H2O2 lying on the signaling pathways downstream of ABA induced H2O2 generation.     

S_2O_8~(2-)/CaO·Fe_2O_3光催化降解罗丹明B的研究

采用共沉淀法合成新型催化剂S2O28-/CaO.Fe2O3粉体。用红外光谱对其结构进行表征,并考察了助催化剂H2O2的用量、催化剂的投加量以及不同光源对罗丹明B溶液催化降解的影响。实验结果表明,所研制的S2O28-/CaO.Fe2O3粉体为固体超强酸,粒径处于纳米数量级,且其在紫外光区556 nm处有个紫外特征峰。在浸渍液(NH4)2S2O8浓度为0.5 mol/L、S2O28-/CaO.Fe2O3投加量为0.03g/25 mL、H2O2用量为1.00 mL/25 mL下,对浓度为0.6 g/L的罗丹明B溶液在自然光下静置1 h,其降解率可达99.2%。同时还初步探讨了催化降解过程中物理现象与化学性质分析、酸中心的形成机理及催化剂失活的可能原因。     

H2、O2与Pd反应的平衡压力研究

基于电子与核振动近似方法,应用密度泛函B3P86方法和相对论有效核势SDD计算,结合统计热力学方法, 研究了100K～1000K温度范围内Pd与H2、O2反应的标准生成热力学函数以及反应平衡压力与温度的关系. 结果表明：Pd与H2、O2反应是放热反应,Pd原子吸附H2的放热量大于吸附O2的放热量,温度升高不利于吸附反应进行;Pd对O2的自发吸附温度很低,室温下几乎不能进行,而对H2的自发吸附温度可高达500K以上;在100K~284.394K可自发吸附O2和H2的温度范围内,O2的反应平衡压力比H2的平衡压力高出9~18个数量级. 因此,O2作为杂质气体对目标反应Pd-H2的影响非常有限.     

Ca2+在H2O2促进蚕豆气孔关闭过程中的作用

利用表皮生物分析法，通过表皮条缓冲液中加CaCl2研究了Ca＾2＋在H2O2促进蚕豆气孔关闭过程中的作用．研究发现在不同浓度的H2O2溶液中加入0．05mol/L和0．005mol/L CaCl2均能加强H2O2对蚕豆气孔关闭的促进作用，H2O2和Ca^2 浓度越高，气孔开度减小越明显．推测在H2O2促进蚕豆气孔关闭过程中，保卫细胞质中Ca^2 浓度升高时的来源可能是质外体中的Ca^2＋．     

以H2O2/Fe2+体系引发丙烯酰胺接枝聚乙烯醇的研究

本文从原料配比、反应温度、反应时间、引发体系及氧阻聚几方面研究了Ｈ２Ｏ２／Ｆｅ２＋引发体系对丙烯酰胺（ＡＭ）接枝聚乙烯醇（ＰＶＡ）时转化率及接枝度的影响,证实该体系可代替铈盐引发ＡＭ与ＰＶＡ共聚。     

H_4PMo_(11)VO_(40)催化氧化2-甲基萘制备甲萘醌

以磷钼钒杂多酸H4PMo11V1O40为催化剂、乙酸为溶剂,用双氧水氧化2-甲基萘制备2-甲基萘醌.实验表明:H4PMo11V1O40具有一定的催化活性.通过正交试验和单因素试验考察了催化剂用量、乙酸用量、双氧水用量、反应时间、反应温度等对收率的影响,获得较佳的合成条件:杂多酸∶2-MN(质量比)=7%,乙酸∶2-MN(质量比)=10.5∶1,双氧水∶2-甲基萘(摩尔比)=4.2∶1,较适宜的温度为40~50℃,反应时间为30 min.     

低酸度下氟塑粘活性炭电极上氧还原为H_2O_2的电流效率

用恒电流电解法证实,氧在氟塑粘活性炭电极上还原为H_2O_2的电流效率,于0.5M H_2SO_4-2.5M(NH_4)_2SO_4中可达72.6%,比高酸度时为高.长时间电解时,累积浓度高于0.76M(2.3%),此时电流效率为58.1%.据试验,电流效率降低的主要原因,不在于H_2O_2在电极上的还原,而在于通过隔膜的扩散损失.