产壳聚糖酶的肠杆菌分离鉴定及其培养特性研究

针对筛选的一株产壳聚糖酶菌株进行了鉴定和培养特性研究．首先对产酶菌株进行鉴别培养基培养、显微镜检并结合生理生化与16SrDNA分子鉴定以确定菌属来源,后对菌株产壳聚糖酶的碳源、氮源、金属盐和诱导物进行筛选优化．结果表明：产酶菌株为产气肠杆菌,最佳培养碳源为葡萄糖,最佳氮源为氯化铵和酵母粉,MnSO4,MgSO4,KCl和NaCl对产酶有积极作用．该菌来源的壳聚糖酶为诱导酶,最佳诱导物为粉末壳聚糖,壳聚糖酶活性为1．58U／mL．     

接骨草蔗糖酶同工酶的分离纯化及其部分性质研究

从接骨草幼叶中提取的蔗糖酶粗酶液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析纯化，得到3种同工酶．对3种同工酶进行SDS-PAGE和IEF电泳均显示一条蛋白带，其亚基分子量分别为45．8KD，44．3KD，43．2KD；等电点分别为pH4．0，pH3．8，pH3．75．凝胶过滤测得3种同工酶全酶分子量分别为91．2KD，89．1KD，87．4KD，表明3种同工酶均由2个相同亚基组成，其表观Km分别为30mmol／L，57.1mmol／L，65mmol／L;Vmax分别为98μg／min，48μg／min，35μg／min．同工酶Ⅰ和同工酶Ⅲ在pH4．4～5．0时有最大活性，同工酶Ⅱ则在pH3．9～4．2时有最大活性．3种同工酶均在pH3-6范围内比较稳定．同工酶Ⅰ和同工酶Ⅱ在48～52℃有最大活性，同工酶Ⅲ在50～55℃有最大活性．3种同工酶均在50℃以下有较好的稳定性．     

地衣芽胞杆菌产纤溶酶的分离、纯化及其酶学性质研究

以地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WBL-3进行固体发酵生产纤溶酶.通过生理盐水浸提、离心去除菌体、硫酸铵分级盐析、透析、离子交换层析和凝胶过滤层析对酶进行分离纯化,SDS-PAGE电泳检测酶的分子量大小,并对该纤溶酶的酶学性质进行研究.结果表明:经凝胶过滤层析后,纯化倍数为33.19,回收率12.39％;SDS-PAGE电泳检测为单一蛋白条带;酶学性质分析表明:酶的最适反应温度为55℃,稳定性随着温度的升高而降低;最适反应pH为8.5,pH7-10范围内酶活稳定性较高;Mg2+对该酶有微弱的激活作用,Cu2+、Ag+、Fe3+、Hg2+、Pb2+对酶有较强的抑制作用.本研究为开发新的溶栓药物提供了新的选择.     

降纤酶的分离纯化及其性质

蛇毒蛋白对抑制血栓形成和溶解血栓具有较好的疗效 ,但由于得不到性质稳定、组分单一的酶蛋白 ,影响了其临床效果。该研究通过亲和层析方法 ,从长白山白眉蝮蛇乌苏里种蛇毒中分离提纯到 SDS- PAGE图谱为单一组分糖蛋白——降纤酶 ,相对分子质量约 3.6× 10 4。该酶具有体外凝血、体内抗凝作用。等电点约为 4 .2 5。HPL C分析结果表明其纯度为 99%。最适温度为 70℃ ,最适 p H =8.0。动力学研究表明该酶为一 Michaelis- Menten酶 ,Michaelis常数为0 .32 0 mm ol/ L,最大反应速度为 0 .117μm ol/ m in。EDTA,Mg2 + ,Cu2 + 对其有抑制作用。测定该酶 N端 2 0个氨基酸的序列是 Val Ile Glu Glu Asp Glu Cys Asn Ile Asn Glu His Arg Phe L eu,与其他的蛇毒类凝血酶有高度同源性。     

番薯过氧化物酶的分离纯化及其性质研究

从番薯皮中分离和纯化番薯过氧化物酶,对其酶学性质进行表征,分析了温度、pH对酶促反应的影响,考查了酶的热稳定性、酸碱稳定性.分离纯化过程包括匀浆、水提、双水相萃取、Sepharose CL-6B凝胶层析、Phenyl Sepharose 6 fast flow疏水层析、Con A Sepharose 4B亲和层析.经纯化的番薯过氧化物酶比活力为6 930 U/mg,SDS-PAGE显示一条带,分子量为34 000,RZ值为2.酶反应的最适pH在5.5附近,最适温度为70℃;在中性偏碱性条件下酶的稳定性非常高,60℃保温1 h,酶活力残余60%.结果表明番薯过氧化物酶是一种良好的耐酸碱、耐热过氧化物酶.     

番薯过氧化物酶的分离纯化及其性质研究

从番薯皮中分离和纯化番薯过氧化物酶,对其酶学性质进行表征,分析了温度、pH对酶促反应的影响,考查了酶的热稳定性、酸碱稳定性.分离纯化过程包括匀浆、水提、双水相萃取、Sepharose CL-6B凝胶层析、Phenyl Sepharose 6 fast flow疏水层析、Con A Sepharose 4B亲和层析.经纯...     

萤火虫荧光素酶分离纯化及其特性的研究

萤火虫荧光素酶只在萤火虫体内产生,一般通过养殖和用化学法提取。研究了以基因工程菌Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ－Ｌｕｓ－Ｊ－１为材料,从它的对数生长期发酵液中提取萤火虫荧光素酶。经检测其分子量为５×１０４,动力学性质研究表明它是非典型的Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ－Ｍｅｎｔｅｎ氏酶,对荧光素作用动力学曲线为Ｓ型,最适ｐＨ为７．５,最适温度为１５℃,且对光和盐浓度非常敏感。     

里氏木霉木聚糖酶的分离纯化及其性质

使用硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-25凝胶色谱脱盐、DEAE-Sephadex A-50和SP-SephadexC-50离子交换色谱等分离纯化技术，从里氏木霉（Trichoderma reesei）RutC-30培养液中分离出木聚糖酶组分，再经SephadexG-100凝胶过滤色谱进一步分离纯化，得到2个纯木聚糖酶组分A组和组分B。经SDS-PAGE鉴定两组分为单带，相对分子质量分别为20300和13500。组分A的最适反应条件为45℃、pH3.0-5.5很稳定，酶解产物主要是低聚木糖，只含少量木糖；组分B的最适反应条件为55℃、pH5.5，酶解产物全部是低聚木糖。     

灵芝漆酶的分离纯化及其部分酶学性质研究

将灵芝（Ganoderma lucidum）漆酶经过Sephadex G-75和DEAE-Sepharose Fast Flow两步纯化,获得具有3个同工酶的组分,并且纯度提高了81倍,酶活回收率高达83.9%。以ABTS为底物,漆酶最适pH值是2.2～2.6,在pH值4.6～7.8范围内稳定;最适温度45℃,在低于45℃时较稳定。大部分金属离子、酸根离子对灵芝漆酶普遍有抑制作用,除盐可以提高漆酶活力。     

大肠杆菌噬菌体的分离、纯化及其特性研究

探讨了从生活污水中分离、纯化大肠杆菌噬菌体的方法.经富集,从厦门大学、厦门港的生活污水中获得3种噬菌体.一是:蝌蚪状不可收缩尾的噬菌体,其头部为二十面体,直径约110～120 nm,尾部长220～230 nm,尾宽13～15 nm,无尾鞘、基板、尾丁、尾丝等结构.二是蝌蚪状可收缩尾的噬菌体,其头部为三十面体,约70 nm×110 nm,尾部长约120～130 nm,尾宽约18～22 nm,有尾鞘、基板、尾丁、尾丝等结构,该类噬菌体在污水中占绝大多数.三是短尾噬菌体,其头部为二十面体,大小为20 nm,尾部长约2～3 nm,在污水中占有一定的比例.2种噬菌体在-18℃冰箱可存活56天.经噬菌体处理的污水,总菌数下降了30%左右,大肠杆菌总数下降90%以上.     

穿山龙多糖分离纯化工艺的研究

以粗多糖得率为指标，比较水醇法、水提ZTC吸附澄清剂法和超声波法三种提取方法，并以穿山龙多糖含量为指标，考察采用水醇法提取穿山龙多糖时，回流时间、固液体积比，提取次数对多糖含量的影响；同时，用硫酸-苯酚法对穿山龙粗多糖中的多糖含量进行了测定．实验结果表明，水醇法提取的多糖得率高于水提ZTC吸附澄清剂法和超声波法，分别提高6．0倍和6．6倍．水醇法的最佳提取工艺条件：回流提取时间90min，液料比1：10，提取次数3次．     

糖脂康多糖的分离与纯化研究

目的:研究糖脂康多糖的提取、分离与纯化方法,并筛选出糖脂康多糖脱蛋白、脱色的最佳方法。方法:采用水提醇沉法提取分离糖脂康多糖,以提取多糖物质多糖损失率、蛋白质去除率为测定指标,分别考察不同实验方法对糖脂康多糖脱蛋白、脱色的影响。结果:三氯乙酸脱蛋白法为糖脂康多糖脱蛋白的最佳方法,活性炭脱色法对糖脂康多糖的脱色效果优于过氧化氢脱色法。结论:糖脂康粗多糖的纯化,脱蛋白、脱色方法的优化为进一步研究糖脂康多糖的生物活性提供了基础。     

桄榔蛋白酶的分离、纯化及性质的研究

在桄榔属的Arenga pinnata的果实中,发现了丰富的蛋白水解酶。我们称之为桄榔酶(Arengain)。用硫酸铵将果肉汁分级盐析获得粗酶制品,用DE52层析分出三个蛋白水解活性峰,其中层析成分5为主要活性组分,等电聚焦电泳证实该组分均一,等电点在pH3.99左右,用SDS-PAGE电泳法测算得分子量为44000。 10~(-3)mol/L的Hg~(2+)、PCMB、1AA、DTNB可计量地使酶失活.Hg~(2+)、PCMB抑制了的酶可为EDTA恢复活性。一定时间内巯基乙醇能令酶活性增加。二异丙基氯磷酸虽可抑制酶活性,但先加半胱氨酸,后加二异丙基氟磷酸,可使这种抑制不能实现,证明桄榔酶是巯基酶。酪蛋白做底物,桄榔酶反应的最适温度为60℃,最适pH为pH11。该酶的pH稳定性很好,pH6～12都表现了很高活性.酶液于pH6～12中24小时活性基本不变;该酶还表现了极高的乙醇耐受力,在50％～70％的乙醇中都显示出高活性。它还耐受3mol/L盐酸胍,50％曲拉通,0.1mol/L的二巯苏糖醇。     

康氏木霉木聚糖酶的分离纯化及特性

使用硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-25凝胶色谱脱盐和Sephadex G-100凝胶色谱等分离纯化技术，从康氏木霉（Trichoderma Koningii）发酵液中分离出木聚糖酶，纯化后的木聚糖酶经十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）凝胶电泳鉴定为单一组分，其相对分子质量为55208．所得的木聚糖酶的最适反应温度为65℃，pH值为6．0．该酶稳定性较好，在30—60℃下放置2h能保持83％以上的酶活；在3．0-10．0的pH值范围内能保持85％以上的酶活．研究表明：金属离子Ba^2＋，Pb^2＋，Fe^2＋，Fe^2＋，Al^3＋和高浓度（12mmol/L）的Cu^2＋对木聚糖酶的活性有抑制作用，而Ca^2＋，Zn^2＋和4mmol／L的Cu^2＋对该酶反应有促进作用．该木聚糖酶作用于Birchwood木聚糖的米氏常数为5．37g/L，最大反应速率为0．94μmol／min．     

石油中的环烷酸及其脱除与精制工艺

简要介绍了环烷酸的来源及用途，通过对环烷酸腐蚀特点的阐述，指出了对原油或馏分油进行脱酸的重要性，并对石油中环烷酸的脱除及其精制工艺进行了综述。     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化工艺研究

以人工饲养的北星二号蚯蚓为材料,通过对14种进口和国产离子交换树脂和 DEAE-纤维素的筛选试验和比较研究,确定了蚯蚓纤溶酶的分离纯化的较佳工艺:组织匀浆或磷酸缓冲液保温提取→Amberlite IRA 904或 DEAE-纤维素离子交换柱层析分离→Sephadex G 100或 Sephadtx G 75凝胶层析纯化→真空冷冻干燥得蚯蚓纤溶酶冻干粉。该工艺所需设备简单,操作方便,适合中,小工厂生产     

大蒜SOD的分离纯化及其低温胁迫下的酶活性

在低温条件下用CaCl₂浸种处理蒜瓣，通过“热击法”、“等电点法”、“丙酮分级沉淀法”的串联使用分离纯化SOD，并运用邻苯三酚的自氧化法测SOD的酶活性，研究钙对低温条件下大蒜SOD酶活性的影响.结果表明：上述3种方法串联能够有效地纯化超氧化物歧化酶，且其纯化程度比使用单一方法高.在低温胁迫条件下，钙离子浸种处理过的大蒜SOD酶活性下降的程度较未经处理的轻.说明钙离子对低温胁迫条件下的大蒜SOD酶活性有一定的保护作用，能够提高其抗冷性.     

大孔吸附树脂分离纯化大黄蒽醌类物质

考察了大黄蒽醌在5种大孔树脂上的静态吸附过程,筛选出效果最佳的树脂(AB-8).研究了大黄蒽醌在AB-8树脂上的动态吸附特性,并确定分离大黄蒽醌的适宜工艺条件.结果表明:AB-8树脂对大黄蒽醌的静态吸附平衡时间为4 h;20℃时吸附过程可用Langmuir吸附等温方程来描述,吸附溶液的适宜pH值为6.0.确定树脂柱的较佳操作条件为:流速1.0 mL.min-1,大黄蒽醌浓度0.001 3 mg.mL-1.     

微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)的分离纯化

利用产谷氨酰胺转胺酶的H-197菌株发酵产生MTG,发酵液通过高速离心、冷冻浓缩、乙醇沉淀、冷冻干燥,制得粗酶粉,粗酶粉溶解后经过SephadexG-75柱得到较纯酶样,结果表明:经冷冻浓缩、乙醇沉淀后其活力回收率为44.6%,酶的比活为0.83 U/mg.较浓缩前增加了2.43倍;粗酶经Sephadex G-75凝胶过滤层析后得到较纯的酶,酶的比活力为1.44 U/mg,最终纯化倍数达7.08.